王志慧
- 作品数：18 被引量：22H指数：2
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”“十二五”国家科技计划农村领域国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 2014～2015年黑龙江牡丹江地区犬博卡病毒的分子流行病学调查被引量：2
- 2016年
- 为了调查黑龙江牡丹江地区犬博卡病毒流行情况,在2014年5月至2015年4月,在黑龙江牡丹江地区采集40份腹泻犬的粪便拭子样品,利用PCR扩增方法进行鉴定和混合感染检测,进一步做进化树进行分析。检测结果显示,在40份样品中,8份样品为CBoV阳性（20%,8/40）;在8份CBoV阳性样品中,与CPV-2、CCoV、CaKV混合感染率分别为37.3%（3/8）、25%（2/8）、25%（2/8）。序列分析表明,8个CBoV毒株的NS1片段在核苷酸水平的同源性为94.2%～100%,在氨基酸水平的同源性为91.7%~100%。进化树分析显示,与韩国、美国、德国和中国香港的CBoV毒株相比,8个中国CBoV毒株表现出遗传多样性。研究揭示了黑龙江牡丹江地区流行的CBoV毒株显示出遗传多样性以及与其他肠道病毒的混合感染情况。
- 姚爽王志慧滕井胜李春秋张思瑶边秀东张立春郭东华
- 牛源坏死梭杆菌43K外膜蛋白的黏附特性研究
- 2023年
- 旨在明确牛源坏死梭杆菌43K OMP的黏附特性。将43K OMP基因克隆连接至pET-32a载体,转化入大肠杆菌BL21 DE3中,通过IPTG诱导进行原核表达,应用黏附试验、天然蛋白竞争试验、抗体抑制试验和蛋白酶水解试验,明确牛源坏死梭杆菌43K OMP的黏附性,同时将纯化的重组蛋白和提取的天然43K OMP与牛子宫内膜细胞和牛乳腺上皮细胞共孵育,观察43K OMP对细胞的黏附作用。结果显示:43K OMP基因克隆到pET-32a载体中,随后在大肠杆菌BL21 DE3以包涵体形式成功表达;携带重组质粒(H2019)的大肠杆菌经IPTG诱导后,与空载体对照相比,与宿主细胞的结合显著增强(P<0.05);天然43K OMP与细胞共孵育后,黏附细胞的细菌数量显著降低(P<0.05);H2019与43K OMP多抗或单抗预孵育后,显著降低黏附宿主细胞的细菌数量(P<0.05);经不同浓度蛋白酶K处理H2019后,黏附细胞的细菌数量显著降低(P<0.05),且与蛋白酶K浓度呈现剂量依赖关系。同时,43K OMP天然蛋白和重组蛋白能黏附于牛子宫内膜细胞和乳腺上皮细胞表面。牛源坏死梭杆菌43K OMP能黏附宿主细胞,43K OMP作为一种黏附蛋白有助于牛源坏死梭杆菌对宿主细胞的黏附作用。
- 贺显晶刘娇王志慧武瑞郭东华
- 关键词：细菌黏附上皮细胞
- 牛坏死杆菌43K OMP原核表达及多克隆抗体制备
- (目的)通过构建牛坏死杆菌43K 外膜蛋白(outermembraneprotein,OMP)原核表达载体,进行原核表达并将其纯化,免疫家兔制备多克隆抗体.(方法)针对大肠杆菌具有偏嗜性的密码子进行优化,构建pET-32...
- 王志慧张思瑶蒋剑成郭东华
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 猪整合素β3多克隆抗体制备与鉴定
- 2016年
- 为了制备猪整合素β3多克隆抗体,试验利用大肠杆菌原核表达系统,对密码子优化的猪整合素β3基因主要抗原区进行原核表达,表达的重组蛋白纯化后,免疫Balb/c雌性小鼠,采血后分离血清,进一步通过ELISA和Western-blot对制备的猪整合素β3多克隆抗体进行鉴定。结果表明:猪整合素β3基因主要抗原区获得了成功表达,表达蛋白分子质量为102 ku左右,以纯化重组蛋白作为免疫原制备的多克隆抗体效价为1∶12 800,且能识别天然猪整合素β3。
- 高晶王志慧郭东华李春秋苏明俊王欣宇赵喜文王恩雨魏姗刘秋瑾孙东波
- 关键词：整合素Β3原核表达重组蛋白多克隆抗体病毒受体病毒感染
- 奶牛腐蹄病坏死杆菌分离鉴定及白细胞毒素基因lktA1序列分析被引量：2
- 2015年
- 为分离纯化奶牛腐蹄病坏死杆菌,分析其与其他菌株的亲缘关系,本研究利用坏死杆菌白细胞毒素特异性引物,对奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品进行了PCR检测,利用厌氧培养基对PCR检测阳性样品进行了坏死杆菌的分离培养,以分离的坏死杆菌基因组DNA为模板,对白细胞毒素基因进行了克隆和序列分析。结果显示,9份奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品PCR检测结果均为阳性,对其中一份样品中的坏死杆菌进行分离培养,获得了纯培养物,命名为bFR13-1。坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素基因测序结果显示,与GenBank已发表的H05、A25和B35菌株的白细胞毒素基因在核苷酸水平的同源性分别为98.40%、98.35%和90.79%,推导氨基酸的同源性分别为97.7%、97.6%和89.0%。进化树分析结果显示,坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素与H05菌株的同源性最高,bFR13-1菌株与H05菌株和A25菌株呈较近亲缘关系。结果表明,不同坏死杆菌分离株的白细胞毒素呈现一定的变异性,这种变化是否与坏死杆菌致病性相关,值得深入研究。
- 高晶李春秋姚爽张立春王欣宇王志慧赵喜文魏姗王恩雨孙东波武瑞郭东华
- 关键词：奶牛腐蹄病坏死杆菌
- 2014-2015年黑龙江三个地区犬博卡病毒的PCR检测及遗传变异分析
- 犬博卡病毒(Canineboca virus,CBoV)是近几年新发现与犬肠炎密切相关的病原,对该病毒的研究尚处于初级阶段,为了探索CBoV在黑龙江地区的流行情况及遗传演化,于2014年5月至2015年4月,在黑龙江哈尔...
- 王志慧郭东华
- 2014—2015年黑龙江省牡丹江地区犬细小病毒2型分子流行病学调查被引量：1
- 2015年
- 为了调查黑龙江省牡丹江地区犬细小病毒(CPV-2)流行情况,利用基于CPV-2部分VP2基因(568 bp)PCR的方法,对2014年5月—2015年4月收集的40份腹泻犬粪便拭子进行了检测与分析。结果显示,在40份样品中,20份样品为CPV-2阳性(50%),其中,新CPV-2a(Ser297Ala)型和CPV-2c型分为别占75%(15/20)和25%(5/20);序列分析结果显示,20个CPV-2毒株VP2基因的核苷酸和氨基酸的相似性分别为98.6%~100%和98.2%~100%;进化树分析表明,与其他国家CPV-2参考毒株相比,鉴定的新CPV-2a型毒株和CPV-2c型毒株与中国CPV-2参考毒株形成一个进化群(A),其中鉴定的新CPV-2a型毒株分布于不同的分支中。结果提示,CPV-2在牡丹江地区犬腹泻病例中呈现高感染率。
- 耿雨菲王恩雨滕井胜李春秋姚爽王志慧王欣宇苏明俊魏姗赵喜文孙筱璇边秀东张立春孙东波
- 关键词：腹泻VP2基因分子流行病学
- 不同程度跛行奶牛血浆中E_2、GnRH、FSH和PGF2a的检测与分析被引量：1
- 2015年
- 为研究跛行对产后奶牛主要生殖激素的影响,实验采用5分制跛行评价标准,在黑龙江地区某规模化牧场,对产后40 d泌乳牛（未使用任何生殖激素类药物）进行跛行评分,然后对跛行评分为1~5分奶牛血浆样品中的促性腺激素释放激素（Gn RH）、促卵泡生长激素（FSH）、雌二醇（E2）和前列腺素（PGF2a）含量进行测定,分析不同跛行评分奶牛血浆样品中4种激素的变化。共获得49头泌乳奶牛作为研究对象,其中1分为8头,2分为19头,3分为14头,4分为4头,5分为4头。研究结果显示,与健康奶牛相比,随着跛行评分的增加,E2、Gn RH、FSH和PGF2a的含量均呈现不同程度的减少趋势。研究结果提示,跛行能影响奶牛产后主要的生殖激素分泌。
- 谷城蒋庆余王欣宇高晶李春秋魏姗王志慧王建发曲永利武瑞孙东波
- 关键词：跛行激素产后
- 籽鹅FSH真核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2015年
- 为了构建真核表达载体pEGFP-FSH-C2-α和pEGFP-FSH-C2-β,并检测其在籽鹅颗粒细胞中的瞬时表达。利用PCR技术合成籽鹅FSH全基因后,构建促卵泡素α、β亚基真核表达载体,并转染籽鹅卵泡颗粒细胞。结果表明:基因片段已正确插入真核表达载体,同时在颗粒细胞中检测到pEGFP-FSH-C2-α和pEGFP-FSH-C2-β的融合蛋白表达。说明已构建真核表达载体pEGFP-FSH-C2-α和pEGFP-FSH-C2-β,并在颗粒细胞瞬时表达成功,为研究和开发生物制剂奠定基础。
- 王志慧徐剑华李鹏
- 关键词：籽鹅双酶切颗粒细胞
- 2014—2015年黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒M基因分子流行病学调查被引量：4
- 2016年
- 为调查黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒（CCo V）的流行情况,本研究通过RT-PCR对141份腹泻犬粪便拭子样品中CCo V M基因片段（409 bp）进行了扩增,进一步对M基因进行了测序和分子进化性分析。结果表明：在141份样品中,38份样品为CCo V阳性（26.95%,38/141）,其中CCo V-Ⅰ型和CCo V-Ⅱ型分别占13.16%（5/38）和86.84%（33/38）。M基因序列分析表明：5个CCo V-Ⅰ型毒株M基因序列的核苷酸同源性为95.7%~99.1%,推导的氨基酸序列同源性为97.4%~100%;33个CCo V-Ⅱ型毒株M基因序列的核苷酸同源性为97.4%~100%,推导的氨基酸序列同源性为100%;33个CCo V-Ⅱ型毒株与中国参考毒株HF3的核苷酸同源性为88.7%~96.2%,推导的氨基酸序列同源性为92.2%~97.4%。进化树分析表明：5个CCo V-Ⅰ型毒株与2个巴西参考毒株呈现出较近的亲缘关系;33个CCo V-Ⅱ型毒株形成五个亚群,与中国参考毒株（除NJ17毒株）和国外参考毒株表现出较远的亲缘关系。可见CCo V在犬腹泻中呈现出较高感染率,以CCo V-Ⅱ型毒株感染为主,并表现出遗传多样性。
- 王欣宇王福军辛科睿魏姗王恩雨郜洪泉王志慧邢宇昕赵喜文孙筱璇边秀东刘秋瑾孙东波
- 关键词：M基因流行病学
