杨仲丽
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华侨大学化工学院工业生物技术福建省高等学校重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 辅酶依赖型和不依赖型甘油脱水酶的比较被引量：1
- 2010年
- 实验比较源自肺炎克氏杆菌(K.pneumoniae)和丁酸梭状芽孢杆菌(C.butyricum)中的甘油脱水酶(GDHt)的辅酶依赖特性.采用生物信息学的方法,对两种酶的异同点进行分析,发现两种酶结构上相似性较低、亲缘性较远、分属于两个不同的家族.SMART数据库搜索结果表明,C.butyricum中不依赖辅酶的甘油脱水酶及其再激活酶,分别属于gly-Radical和Radical-SAM家族,多序列比对得到的一段富含半胱氨酸残基C**C**C的保守序列正是其共同特征.
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- 关键词：肺炎克氏杆菌辅酶甘油脱水酶维生素B12
- 克雷伯杆菌中甘油脱氢酶的定向进化
- 克雷伯杆菌甘油脱氢酶(GDH)在辅酶NAD+的存在下催化甘油生成二羟基丙酮(DHA),NAD+被还原成NADH。在微生物以甘油为底物发酵生成1,3-丙二醇的过程中,
- 李梓君方柏山杨仲丽朱春杰
- 丁酸梭菌中甘油脱水酶及其再激活酶基因的克隆表达
- 丁酸梭状芽孢杆菌(Clostridia butyricum)甘油脱水酶(glycerol dehydratase,GDHt)是文献报道的一类不依赖辅酶B12的甘油脱水酶,它是一个单亚基二聚体,其基因DhaB1与再激活酶基...
- 杨仲丽方柏山李梓君朱春杰
- 应用易错PCR定向进化甘油脱氢酶被引量：2
- 2010年
- 经过连续易错聚合酶链式反应(Error-Prone PCR)向克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)甘油脱氢酶基因中引入突变,并构建突变文库.依据突变体催化番红O显色的特性,采用琼脂平板法和96微孔板法相结合的高通量筛选方法,成功获得突变体gldA-74,其酶活力是亲本重组酶的2.73倍.通过软件对突变体gldA-74酶基因和亲本重组酶基因进行分析对比,发现突变体gldA-74酶基因发生了一处点突变(A964T),该突变使一处氨基酸被取代.将亲本重组酶和进化酶的高效表达产物经Ni柱纯化后,酶学性质的测定结果表明,甘油的Km值由0.58 mmol.L-1升高至0.63 mmol.L-1,而NAD的Km值由0.74 mmol.L-1升高至0.77mmol.L-1,并且酶的最适pH值由原来的11.5升高至12.5,而最适温度由65℃降至55℃.
- 李梓君方柏山杨仲丽刘嘉
- 关键词：甘油脱氢酶克雷伯杆菌定向进化
