叶寒清
- 作品数：2 被引量：10H指数：1
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血清Ⅱ型高尔基体膜蛋白与人类肝细胞癌的关系被引量：10
- 2009年
- 目的探讨血清Ⅱ型高尔基体膜蛋白（Golph2）在肝癌诊断中的价值。方法应用逆转录聚合酶链反应技术，从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列，聚合酶链反应回复突变制备全长完整基因（1206bp），将其插入原核表达载体pET21、转化大肠杆菌DH5α，应用异丙基硫代β-D-半乳糖苷诱导其表达，镍柱亲和层析纯化，并经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。用纯化的蛋白质免疫家兔，制备多克隆抗血清。建立Western blot鉴定重组蛋白和抗血清特异性，建立双抗体夹心酶联免疫吸附法测定150例肝癌、120例其他肝病、200名健康体检者血清Golph2水平。均值比较采用ONO-WAY ANOVA法。结果从肝癌细胞中凋取的基因，出现2个基因置换突变和1个碱基缺失突变，经回复突变，获得与NM 177937完全一致的序列。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot证实，重组Golph2与预期结果一致。抗血清能够特异地识别相对分子质量为5．2×10^4的重组蛋白质和7.3×10^4的血清蛋白质，与预期结果一致。建立的酶联免疫吸附试验方法检测肝癌、其他肝病患者、对照组血清Golph2，其吸光度值均数相差显著。以吸光度值≥0．40为阈值，其敏感度和特异性分别为44．5％和82．0％。结论Golph2在各组人群中均有表达，在肝癌组最高，在肝癌诊断中有一定价值，但特异性和敏感度不高。
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- 关键词：肝细胞酶联免疫吸附试验
- Golph2蛋白质的原核表达及多克隆抗体制备
- 2009年
- 目的:新近发现Golph2蛋白与肝癌关系密切,制备Golph2重组蛋白质和多克隆抗体,建立Western blot检测技术,为后续研究提供基础。方法:RT-PCR从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列,PCR回复突变制备全长完整基因(1206bp),将其插入至原核表达载体pET-21、转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE鉴定。将纯化蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗血清。建立Western blot鉴定重组蛋白和抗血清特异性,测定临床血清标本中Golph2蛋白水平。结果:从肝癌细胞中钓取的基因,出现2个碱基置换突变和1个碱基缺失突变,经回复突变,获得与NM177937完全一致序列。SDS-PAGE和Western blot证实,重组Golph2蛋白质与预期结果一致。抗血清能够特异地识别52kD重组蛋白质和73kD血清蛋白质。结论:Golph2蛋白质表达和抗血清制备完全成功。
- 谭龙益陈洁王皓叶寒清厉倩顾继安孔宪涛
- 关键词：多克隆抗体蛋白质表达
