刘朔捷
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性被引量：4
- 2007年
- 目的构建含日本血吸虫相对分子质量为26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应。方法用RT-PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因。利用重组PCR技术,在Sj26基因的5′端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3′端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26。将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT-PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达。用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群。结果经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达。免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P<0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P<0.05);CD8+细胞百分比高于空白对照组和空载体组(均P<0.05),CD4+细胞百分比没有显著变化(P>0.05)。结论成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26,表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上。pIRES-Sj26疫苗能增强BALB/c小鼠的免疫应答反应。
- 杨平戴五星刘朔捷郭萍马彦彬唐成武程继忠
- 关键词：抗原血吸虫SJ26疫苗免疫性
