黄生平
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 供职机构：湖北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金武汉市科技攻关计划项目武汉市青年科技晨光计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 植酸酶和甘露聚糖酶双功能毕赤酵母工程菌的构建和产酶分析被引量：4
- 2007年
- 根据已发表的植酸酶基因和甘露聚糖酶基因序列设计并合成引物,应用PCR技术,分别以土曲霉总DNA和质粒pHBM1201为模板,扩增出均不含假定信号肽序列的植酸酶基因phyA和甘露聚糖酶基因man,将它们各自克隆到毕赤酵母表达载体pHBM907C上,分别得到重组质粒pHBM907C-phyA和pHBM907C-man。将质粒pHBM907C-phyA上由乙醇氧化酶(AOX1)启动子和终止子引导表达、酿酒酵母α信号肽序列引导分泌的phyA表达盒式结构插入到质粒pHBM907C-man中,构成双基因表达分泌质粒pHBM907C-phyA-man。pHBM907C-phyA-man经SalⅠ酶切线性后转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115,获得了同时分泌表达植酸酶和甘露聚糖酶的双功能酵母工程菌。研究了该酵母工程菌所分泌表达的重组植酸酶和甘露聚糖酶的相关酶学性质,并进行了双功能酵母工程菌的稳定性测试。
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- 关键词：植酸酶甘露聚糖酶毕赤酵母共表达
- 一种新型巴斯德毕赤酵母表达载体的构建及甘露聚糖酶的表达被引量：2
- 2007年
- 目的:构建以带自身启动子的蔗糖转化酶基因(suc2)为选择标记的载体,用于外源基因在巴斯德毕赤酵母中的正确分泌表达。方法:根据已发表的蔗糖转化酶基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术,以啤酒酵母INVSC1总DNA为模板,扩增出包含自身启动子和终止区序列的suc2基因。将该基因与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了以suc2为选择标记的表达载体pPIC12K。将甘露聚糖酶基因man克隆入载体pPIC12K,用PEG/LiCl法转化毕赤酵母GS115菌株。以蔗糖为惟一碳源筛选转化子,利用底物平板检测筛选到的转化子中man基因的表达,并对重组表达菌株进行连续传代实验。结果:部分转化子周围产生明显的水解圈,证明甘露聚糖酶已经得到分泌表达;对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的遗传稳定性。结论:以带自身启动子的suc2基因为选择标记的表达载体构建成功,并且这个新型表达载体能够对外源基因进行稳定有效的分泌表达。
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- 关键词：巴斯德毕赤酵母甘露聚糖酶
- 密码子优化的植酸酶基因appA-P在毕赤酵母中的高效表达被引量：10
- 2007年
- 根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子使用偏爱性,对Escherichia coli来源的高比活植酸酶基因（appA）全面地进行密码子优化,人工合成了植酸酶基因（appA-P）,并将该基因克隆到毕赤酵母诱导型分泌表达载体pHBM905A上,获得重组质粒pHBM905A-appA-P,通过PEG1000转化法将线性化的重组质粒转化毕赤酵母GS115菌株,筛选得到一个高效表达植酸酶的重组菌株GS115-appA-P,在25℃摇瓶培养168 h后酶活力达到422 U/mL,该植酸酶最适反应温度为60℃,最适反应pH为4.5,在20-50℃、pH1.0-6.0范围内较稳定.
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- 关键词：毕赤酵母密码子优化
