贺怡
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学自动化与计算机技术生物学更多>>
- 一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析
- 2014年
- 利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结合蛋白。进化树分析表明该基因与SP1L5家族基因的亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-GhSP1L5,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,获得分子质量约为12 kD的重组蛋白。QRTPCR结果分析表明GhSP1L5基因在开花后15和20 dpa的纤维组织中表达量较高,在棉纤维发育的其他时期及根、茎、叶组织中表达量较低。
- 李榕寇伟谭兰贺怡梁卓李鸿彬
- 关键词：棉花纤维微管结合蛋白
- 费尔干猪毛菜液泡膜氢离子焦磷酸酶基因SfVP的克隆、序列分析及表达被引量：3
- 2014年
- 植物液泡膜氢离子焦磷酸酶(Vacuolar H+-PPase,VP)能够酸化液泡并为液泡的次级转运系统提供能量,在植物耐盐性方面发挥着着重要作用。本研究采用RT-PCR结合RACE方法,从费尔干猪毛菜中(Salsola ferganica)克隆得到液泡膜质子焦磷酸酶基因SfVP,该基因的cDNA全长2738 bp,包含1个2301 bp的完整开放读码框(ORF),编码766个氨基酸的多肽。氨基酸序列分析表明其属于H+-转运无机焦磷酸酶超家族成员,具有典型的H+-PPase结构域,其疏水性较强,含有12个跨膜螺旋结构。SfVP序列比对显示具有H+-PPase的3个保守序列CS1、CS2和CS3,其中CS1中含有保守的底物催化位点,与烟草的NtVP氨基酸序列相似性为95.3%。半定量RT-PCR结果表明,SfVP的转录表达丰度随着600 mmol/L NaCl处理时间的增加而升高,处理12 h后显著增加并一直维持在较高水平。
- 贺怡钱雯婕袁磊李榕谭兰谢全亮李鸿彬
- 关键词：RACE
- 分子生物学网络教学平台的构建与有效管理被引量：4
- 2013年
- 借助网络教学平台环境和现代教育技术,构建分子生物学网络教学与交流平台,为课堂教学提供方便的互动交流和丰富的网络资源,通过网络教学平台辅助和延伸教学,充分调动学生学习的积极性和主观能动性,不断提升教学质量。
- 王斐贺怡李鸿彬
- 关键词：分子生物学网络平台教学质量
- 棉花GhAO3基因的克隆、功能序列分析及原核表达
- 2013年
- 通过RT-PCR方法从处于快速伸长发育时期(开花后15 d)的棉花纤维组织中克隆得到棉花抗坏血酸氧化酶3(Ascorbate oxidase 3,GhAO3)基因的全长开放读码框,该基因全长读码框为1 758 bp,编码包含585个氨基酸的蛋白质。通过序列功能分析和同源序列比对,GhAO3蛋白具有较高的保守性,包括3个多铜氧化酶结构域以及跨膜信号序列,进化树比对结果显示GhAO3与大豆GmAO的亲缘关系较近。将GhAO3基因与原核表达载体pET32a相连构建重组载体pET32a-GhAO3,把重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组菌,经SDS-PAGE电泳分析,获得分子量约为64 kD的重组GhAO3蛋白。
- 冉茂飞贺怡钱雯婕王斐李鸿彬
- 关键词：基因克隆原核表达
- 陆地棉GhPLDα基因的克隆、序列分析及表达
- 2014年
- 【目的】棉花磷脂酶D(GhPLDα)基因的克隆、序列功能结构域分析及表达。【方法】以陆地棉胚珠和纤维为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到PLDα基因的cDNA片段,将其构建到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,利用分光光度法检测酶活性,采取RT-PCR方法检测基因表达。【结果】从发育的棉花胚珠和纤维混合材料中克隆得到的磷脂酶基因的开放读码框为2 421 bp,编码包含807个氨基酸的蛋白质,分子量约为88 kDa。通过同源序列比对和功能结构域分析,GhPLDα具有典型的磷脂酶D家族(HKD)结构域,同时还存在蛋白激酶C结构域2(C2结构域)。构建了pET28a-GhPLDα原核表达载体;获得分子量约为88 kDa左右的重组蛋白GhPLDα。半定量RT-PCR结果表明GhPLDα基因可能参与棉花胚珠与纤维发育过程。【结论】GhPLDα基因的克隆、序列分析和表达为进一步研究棉花GhPLDα基因在胚珠和纤维发育中过程的功能奠定了基础。
- 谭兰李榕袁哈利贺怡梁卓谢全亮李鸿彬
- 关键词：棉花
- 棉花色氨酸脱羧酶GhTDC基因促进烟草BY2细胞的伸长被引量：1
- 2015年
- 色氨酸脱羧酶(Tryptophan decarboxylase,TDC)在生长素(Indoleacetic acid,IAA)合成和植物器官发育等过程中发挥重要作用,其参与纤维发育的研究现有报道。本研究将陆地棉Gh TDC基因转化烟草BY2悬浮细胞,分析TDC在细胞伸长发育过程中的功能。本研究采用RT-PCR方法从陆地棉胚珠和纤维组织中克隆得到Gh TDC基因,该基因的c DNA全长包含完整开放读码框为1491 bp,编码497个氨基酸的多肽,理论分子质量为54.67 ku。生物信息学分析结果表明,Gh TDC蛋白是一个亲水性蛋白,其含有磷酸吡哆醛结合位点和催化结构域。进化树分析结果表明,棉花Gh TDC与黑升麻Ar TDC的亲缘关系上较近。构建原核表达载体p ET32a-Gh TDC并转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,获得分子质量约为54 ku的重组蛋白,重组蛋白具有较高的酶催化活力。q RT-PCR结果分析结果表明,Gh TDC基因在纤维突起时期的开花前3 d和纤维快速伸长发育时期的开花后5-15 d表达丰度较高。将Gh TDC转基因转化烟草BY2悬浮细胞,烟草悬浮细胞的伸长发育获得了显著促进。本研究结果为研究Gh TDC基因在细胞伸长发育过程中的重要调控作用提供了参考。
- 谢全亮李榕贺怡梁卓李鸿彬
- 关键词：棉花纤维发育细胞伸长
