蔡国栋
- 作品数：17 被引量：32H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目江苏省教育厅自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- ZEA对小鼠T淋巴细胞活化过程中超微结构及核因子NFAT和NF-κB信号通路的影响被引量：2
- 2019年
- 为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)对动物免疫功能影响的机制,以免疫磁珠负性分选法从小鼠脾脏中分离得到的高纯度T淋巴细胞为材料,刀豆蛋白A(Con A)作为T淋巴细胞活化刺激剂,研究ZEA对小鼠T淋巴细胞活化过程中细胞超微结构的影响及对核因子NFAT、NF-κB信号通路的影响。试验设空白对照组(不含Con A)、Con A (5μg·mL^(-1))对照组、ZEA(10、20及40μmol·L^(-1))+Con A (5μg·mL^(-1))染毒组,细胞染毒48h后用透射电镜观察细胞结构变化情况。细胞染毒处理24和36h后分别提取细胞浆、细胞核蛋白,Western blot检测NFAT及NF-κB信号通路中关键蛋白表达情况。结果表明:与空白对照组相比,Con A组T淋巴细胞胞浆内NFAT、NF-κB等相关蛋白含量显著或极显著升高;细胞体积增大,细胞浆丰富,核糖体和线粒体明显增多。与Con A组相比,ZEA染毒组T淋巴细胞胞浆内NFAT、NF-κB相关蛋白含量显著或极显著下降,并呈剂量-效应关系;细胞胞浆减少,细胞质出现不同程度的空泡化,线粒体肿胀,核糖体消失,异染色质增多。与空白对照组相比,Con A组T淋巴细胞核内NFAT、NF-κB含量均极显著升高;与Con A组相比,ZEA染毒组T淋巴细胞核内NFAT、NF-κB含量显著或极显著下降,并呈剂量-效应关系。这一研究提示ZEA可造成T淋巴细胞活化过程中细胞超微结构的损伤,抑制小鼠T淋巴细胞活化过程中核因子NFAT、NF-κB信号通路活性,抑制相关蛋白合成,造成T淋巴细胞的活化作用被抑制。
- 刘利蔡国栋孙凯朱启航王涛邹辉顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：玉米赤霉烯酮刀豆蛋白ANFAT
- 玉米赤霉烯酮对趋化因子诱导的小鼠T细胞迁移效应和黏附与迁移相关蛋白表达的影响
- 2019年
- 为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)免疫毒性机理,通过体外试验研究了ZEA对趋化因子诱导的小鼠T细胞迁移效应的影响,以及这一过程中与细胞黏附与迁移相关蛋白的变化。以ConA作为T细胞活化剂,以不同浓度ZEA(0、10、20、40μmol/L)染毒处理细胞后,Transwell法检测T细胞分别在CCL19、CCL21作用下的迁移效应,以及利用流式细胞术检测迁移后CD4、CD8阳性T细胞所占比例。激光共聚焦显微镜拍摄细胞穿膜形态,Western blot检测T细胞迁移及细胞黏附相关蛋白的表达。结果显示,ZEA可以分别降低CCL19和CCL21趋化的T细胞的迁移指数并扰乱迁移后CD4、CD8阳性T细胞之间的比例。此外,ZEA可以不同程度地抑制CCL19和CCL21介导的T细胞穿膜效应。Western blot结果显示,20、40μmol/L的ZEA作用可下调T细胞迁移及细胞黏附相关蛋白的表达。结果表明,ZEA可以抑制趋化因子介导的T细胞迁移效应,在这一过程中,黏附蛋白及迁移蛋白的表达均受到抑制,提示ZEA可能通过抑制T细胞运动过程中黏附及迁移这两个环节,进而影响T细胞的免疫应答,从而发挥免疫抑制作用。
- 史嘉缤朱敏钱婧蔡国栋邹辉袁燕顾建红刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：玉米赤霉烯酮T细胞趋化因子细胞迁移细胞黏附
- ZEA、DON及其联合作用对李斯特菌感染小鼠CD4^+T细胞活化的影响被引量：3
- 2020年
- 为探究玉米赤霉烯酮(ZEA)及脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对动物CD4^+T细胞活化的影响,以李斯特菌感染小鼠的CD4^+T细胞为研究对象,研究了低剂量的ZEA、DON对小鼠T细胞活化标志分子CD69、CD71以及CD44、CD223的影响。试验分别设空白组(Control)、李斯特菌组(Listeria)、ZEA+李斯特菌组(ZEA组)、DON+李斯特菌组(DON组)、ZEA+DON+李斯特菌组(联合毒素组),用流式细胞术分别检测李斯特菌感染第3天的小鼠的脾CD4^+T细胞CD69的表达及感染第7天小鼠的脾CD4^+T细胞CD71、CD44、CD223的表达。结果显示,与空白组相比,李斯特菌组CD4^+T细胞CD69、CD71及CD44、CD223表达均显著或极显著升高(P<0.05或P<0.001)。与李斯特菌组相比,ZEA组CD69、CD71和CD44表达均无显著差异(P>0.05),CD223的表达显著下降(P<0.05);DON组CD71和CD223的表达均无显著差异(P>0.05),CD69、CD44表达均极显著下降(P<0.001);联合毒素组CD69、CD71和CD223表达均无显著差异(P>0.05),CD44表达极显著下降(P<0.01)。与ZEA组相比,联合毒素组CD69、CD71和CD44、CD223表达均无显著差异(P>0.05)。与DON组相比,联合毒素组CD71和CD223表达均无显著差异(P>0.05),CD44和CD69的表达显著或极显著升高(P<0.05或P<0.001)。结果表明,低剂量的ZEA、DON及其联合均能不同程度地抑制李斯特菌感染小鼠的CD4^+T细胞活化标志分子的表达,进而抑制细胞的活化,对动物具有免疫抑制作用;低剂量的ZEA和DON联合应用在对小鼠CD4^+T细胞活化影响上具有一定的拮抗作用。
- 钟昉蔡国栋朱根生邹辉顾建红袁燕朱家桥刘学忠刘宗平朱国强朱国强
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇小鼠
- 玉米赤霉烯酮对小鼠B淋巴细胞体外活化增殖及分化的影响被引量：2
- 2020年
- 为了探究玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对离体B淋巴细胞活化、增殖及分化的影响,试验以BALB/c小鼠脾脏B淋巴细胞为材料,分设细胞空白对照组(Control)、脂多糖对照组(LPS 5?g/m L)、不同浓度ZEA染毒组(LPS+10、20或30?mol/L ZEA),CCK-8法检测24 h时细胞相对活性,流式细胞术分别检测6 h、72 h时淋巴细胞活化标识分子CD69、CD71的表达量,以及72 h时浆细胞表面标识分子CD138的表达量,CFSE法检测B淋巴细胞的增殖情况。结果显示,ZEA在终浓度10、20、30?mol/L下均可显著或极显著地降低LPS诱导的B细胞相对活性,并导致细胞表面标识分子CD69、CD71、CD138的表达量下降(P<0.05或P<0.01)。此外,ZEA还可抑制B细胞的增殖,且呈剂量效应关系。结论认为,玉米赤霉烯酮可直接通过抑制小鼠B淋巴细胞的活化、增殖、分化,影响体液免疫的进程,从而对动物机体产生免疫抑制作用。
- 刘双双史嘉缤李茜蔡国栋邹辉顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：玉米赤霉烯酮B淋巴细胞细胞活化细胞分化细胞增殖
- 玉米赤霉烯酮对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖的影响被引量：11
- 2017年
- 为揭示镰刀菌毒素之一的玉米赤霉烯酮(ZEA)的免疫抑制作用机制,作者拟研究ZEA对刀豆蛋白A(Con A)介导的小鼠离体T淋巴细胞体外活化、增殖的影响。以Con A作为T淋巴细胞活化刺激剂,以不同浓度ZEA(0、10、20、40μmol·L^(-1))染毒处理细胞后,利用流式细胞术检测T淋巴细胞早期活化标志CD69分子及中期活化标志CD25分子表达情况,用CCK-8法检测T淋巴细胞的增殖情况。结果显示:细胞分别培养48、72、96h后,Con A组与细胞空白组相比均产生了明显的刺激增殖效应(P<0.01)。与Con A对照组相比,ZEA染毒可明显抑制Con A刺激引起的T淋巴细胞的增殖作用。除10μmol·L^(-1) ZEA组在72和96h时间段差异显著外(P<0.05),其余染毒组在各时间段均差异极显著(P<0.01),并呈浓度-效应关系。细胞加入Con A分别活化6、30h后,Con A组与细胞空白组相比,早期活化分子CD69和中期活化分子CD25明显升高,提示细胞发生明显的活化效应。与Con A对照组相比,当ZEA染毒浓度为10μmol·L^(-1)时,T细胞早期活化标志分子CD69和中期活化分子CD25的表达明显抑制,差异均极显著(P<0.01),当ZEA浓度为20、40μmol·L^(-1)时,CD69和CD25的表达进一步抑制(P<0.01),并呈剂量依赖性。研究结果表明,ZEA对动物免疫抑制作用的产生与其可直接抑制对小鼠T淋巴细胞的活化和增殖有关。
- 蔡国栋孙凯项自来王玲邹辉顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：玉米赤霉烯酮T淋巴细胞增殖T淋巴细胞活化CD69
- ZEA、DON及其联合作用对李斯特菌感染小鼠血清免疫相关细胞因子的影响
- 2023年
- 旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用对细菌感染动物防御能力的影响。试验以小鼠为对象,研究了低剂量的ZEA、DON对李斯特菌感染小鼠血清中免疫相关因子的变化。试验分别设空白对照组(Con)、李斯特菌组(Lis)、10 mg/kg ZEA+李斯特菌组(ZEA+Lis)、1 mg/kg DON+李斯特菌组(DON+Lis)、10 mg/kg ZEA+1 mg/kg DON+李斯特菌组(ZEA+DON+Lis),染毒方式为灌胃,细菌感染方式为尾静脉注射,剂量5×104CFU。在试验结束后,用抗体芯片技术检测小鼠血清中免疫相关细胞因子的水平。结果显示,与Con组相比,Lis组免疫细胞因子如白介素IL-1β、IL-12P40/P70,集落刺激因子MCSF,趋化因子MIG皆显著升高(P<0.05)。与Lis组相比,ZEA+Lis组IL-1β显著下降(P<0.05),基质金属蛋白酶TIMP-1显著上升(P<0.05);DON+Lis组IL-1β、IL-12P40/P70和MCSF显著下降(P<0.05),趋化因子BLC TIMP-1显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01);ZEA+DON+Lis组IL-1β与IL-12P40/P70显著下降(P<0.05),集落刺激因子GCSF、趋化因子BLC与MIG显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01)。与ZEA组相比,ZEA+DON+Lis组IL-6、趋化因子MIP-1α与MIG、TIMP-1显著上升(P<0.05),趋化因子LIX显著下降(P<0.05)。与DON+Lis组相比,ZEA+DON+Lis组GCSF与MCSF显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01),MIP-1α显著上升(P<0.05)。结果表明,低剂量的ZEA、DON及其联合均能不同程度地降低李斯特菌感染小鼠血清中免疫相关细胞因子的水平,说明ZEA、DON及其联合作用下机体对李斯特菌感染的防御能力降低;但在经剂量下,ZEA和DON联合暴露对小鼠血清中免疫相关细胞因子表达表现出具有一定的拮抗作用。
- 许晴雨夏苏干蔡国栋邹辉顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇李斯特菌抗体芯片
- 伏马毒素B_1单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2016年
- 为了制备伏马毒素B1（FB1）单克隆抗体,建立针对FB1快速、简便、灵敏的检测方法,试验用戊二醛一步法分别偶联FB1与BSA和OVA作为免疫原和检测原,5次免疫后取脾细胞与SP2/0融合。结果表明：共筛选出2株能稳定分泌抗FB1单克隆抗体杂交瘤细胞,选取其中1株5F5杂交瘤细胞制备小鼠腹水,所制腹水效价达到1∶256000,其半数抑制浓度（IC50）为6.1ng/mL,检测下限（LOD）低于0.05ng/mL。回收率在84.20%-102.60%之间,变异系数为2.48%-8.79%。制备的单克隆抗体对FB1抑制率为100%,与呕吐毒素（DON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、黄曲霉毒素B1（AFB1）、α-玉米赤霉烯醇（α-ZOL）等基本无交叉反应。
- 范文桐项自来徐辉王光光王冰洁蔡国栋王凤丽顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤间接竞争ELISA
- α-玉米赤霉烯醇单克隆抗体的研制及CiELISA检测方法的建立
- 2017年
- 为了建立快速、简便、灵敏的检测动物性食品中α-玉米赤霉烯醇(α-Zearalenol,α-ZOL)残留的方法,试验利用活性酯法将α-ZOL与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联鉴定后常规免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠。经筛选,获得1株稳定分泌抗α-ZOL单克隆抗体的杂交瘤细胞(1D4),利用1D4获得的抗α-ZOL单克隆抗体建立了检测α-ZOL的间接竞争酶联免疫吸附试验(Ci ELISA)方法。结果表明:该检测方法在1~1 000 ng/m L范围内线性良好,标准曲线方程为y=0.280 2x+0.025 6(R2=0.990 1),半数抑制浓度为76.32 ng/m L。牛奶加标回收试验显示,α-ZOL的回收率在81.29%~117.53%之间,变异系数在4.42%~9.33%之间。试验建立的Ci ELISA检测方法可用于牛奶中α-ZOL残留的定量检测。
- 王光光王冰洁卞晓娇范文桐项自来蔡国栋王凤丽顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：单克隆抗体
- 玉米赤霉烯酮对小鼠原代培养T淋巴细胞细胞因子分泌的影响被引量：1
- 2019年
- 为探讨玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对动物免疫功能的影响及其机理,试验以分离培养的原代小鼠脾脏淋巴细胞材料,研究了ZEA对T淋巴细胞细胞因子分泌的影响。以刀豆蛋白A(Con A,5 mg/L)作为T细胞活化特异性刺激剂,试验设空白对照组(不加Con A)、Con A组(5 mg/L Con A)、不同浓度的ZEA染毒组(Con A+ZEA 10、20和40μmol/L),处理48,72 h后,使用流式液相多重蛋白定量技术检测T细胞分泌IL-2、IL-3、IL-5、IL-6和GM-CSF等细胞因子的含量。结果显示,与空白对照组相比,Con A组细胞在48,72 h时间段5种细胞因子分泌均明显上升;与Con A组比较,染毒48,72 h后,10,20,40μmol/L ZEA染毒组各细胞因子分泌浓度均有极显著下降(P<0.01),并呈剂量-效应关系。结果表明,ZEA可以抑制T淋巴细胞细胞因子IL-2、IL-3、IL-5、IL-6和GM-CSF的分泌,从而影响机体正常免疫反应的进行,降低整体的免疫功能。
- 李茜蔡国栋蔡国栋邹辉邹辉袁燕顾建红刘学忠刘宗平
- 关键词：玉米赤霉烯酮T淋巴细胞刀豆蛋白A细胞因子
- ZEA、DON及其联合染毒对CTLL-2细胞因子分泌的影响被引量：5
- 2017年
- 为研究镰刀菌毒素玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用对动物免疫功能的影响,试验以CTLL-2细胞(细胞毒性T淋巴细胞株)为材料,用不同浓度的ZEA(0、5、10、20μg/mL)、DON(0、0.5、1、2μg/mL)及联合(空白组、5μg/mL ZEA、0.5μg/mL DON、5μg/mL ZEA+0.5μg/mL DON)处理CTLL-2细胞48h,采用ELISA法检测了细胞内及培养上清液中颗粒酶B(GZMB)、穿孔素(PFP)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子的含量。结果显示,ZEA、DON能够降低CTLL-2细胞胞内及培养上清液中PFP、GZMB、IFN-γ的浓度,增加TNF-α浓度,染毒组与对照组相比均有显著或极显著差异(P<0.05;P<0.01),且均呈剂量效应关系;ZEA、DON联合染毒表现为加性效应。结果表明,ZEA、DON及其联合作用可通过影响免疫细胞因子的分泌,降低免疫细胞杀伤活力,间接影响机体体液免疫和细胞免疫的负调节,从而导致动物机体免疫机能下降。
- 蔡国栋潘顺叶王凤丽邹辉顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：玉米赤霉烯酮脱氧雪腐镰刀菌烯醇细胞因子
