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肖燕
作品数:
1
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供职机构:
四川大学生命科学学院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
生物学
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合作作者
陈红军
四川大学生命科学学院
吴传芳
四川大学生命科学学院
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1篇
2017
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一种改进的小非编码RNA cDNA文库构建方法
2017年
本文使用RNA Antisense Purification(RAP)技术富集纯化sncRNA,有效去除了5S、5.8SrRNA.联合使用Tobacco Acid Pyrophosphatase(TAP)和RNA 5′Polyphosphatase处理sncRNA,将5′-端为非单磷酸结构的sncRNA转变成单磷酸结构,增加了文库覆盖率.在sncRNA3′-端添加poly(A)尾结构以及使用oligo(dT)16VN-adapter锚定引物进行逆转录,间接解决了sncRNA 3′-端接头定向连接问题,不再使用价格昂贵的腺苷化接头.改进后的sncRNA cDNA文库容量为3×105cfu,重组率为95%,且测序结果显示,获得的cDNA序列具有较好的完整性.使用这种成本低且行之有效的改进方法,为深入研究sncRNA奠定了基础.
杜光石
罗发涛
肖燕
陈红军
吴传芳
关键词:
CDNA文库
POLY(A)
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