步云
- 作品数:1 被引量:0H指数:0
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- 耻垢分枝杆菌MurB蛋白的可溶性表达、纯化和多克隆抗血清制备
- 2015年
- 获得耻垢分枝杆菌MurB纯化蛋白,制备小鼠源性MurB多克隆抗血清。首先,利用PCR技术扩增耻垢分枝杆菌murB基因,连接至pColdII载体并转化至E.coli BL21(DE3)菌株;然后,低温下以IPTG诱导MurB蛋白的表达,并利用Ni-His亲和层析技术纯化MurB蛋白;最后,将MurB纯化蛋白联合免疫佐剂注射BalB/c小鼠,经过初次免疫和2次加强免疫后分离抗血清,并分别利用ELISA和Western blot技术检测制备的抗血清对MurB蛋白的效价和特异性。结果显示:已获得具有理想浓度和纯度的MurB纯化蛋白;已制备具有较高效价的小鼠源性MurB多克隆抗血清,该抗血清能够特异性识别耻垢分枝杆菌可溶性蛋白组分中的MurB蛋白。因此,制备的MurB多克隆抗血清能够应用于分枝杆菌MurB蛋白的检测分析,为MurB功能研究奠定了基础。
- 徐立铭郑琦康健步云钱磊马郁芳
- 关键词:耻垢分枝杆菌