彭威
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：湖北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 降钙素原基因克隆表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 目的克隆、表达降钙素原(PCT),制备相应的多克隆抗体。方法根据GenBank上PCT的基因序列,设计10条用于基因拼接的DNA引物,利用PCR技术扩增PCT基因并构建pGEX-KG-PCT重组质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白PCT-GST,然后用融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot法进行生物活性鉴定,并利用琼脂免疫扩散实验检测了多克隆抗体的特异性和效价。结果成功获得PCT全长基因,重组质粒pGEX-KG-PCT在大肠杆菌中成功表达,SDS-PAGE电泳显示蛋白相对分子质量(Mr)大小为36 000左右。利用纯化的蛋白同时制备了GST和PCT-GST多克隆抗体,琼脂免疫扩散实验显示多克隆抗体可以特异性识别PCT,效价为1∶4。结论成功克隆、表达并纯化出PCT蛋白,制备了相应的多克隆抗体。
- 谭倩田卫群王礼彭威陈凡
- 关键词：降钙素原克隆表达多克隆抗体
