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比活提高的植酸酶APPA突变体及其基因和应用: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及比活提高的植酸酶APPA突变体及其基因和应用。本发明采用定点饱和突变的方法对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌植酸酶APPA的第53位、第68位、第77位、第96位、第112...; 李阳源黄江何小梅江民华陈丽芝高芝刘金山唐业王勇王平; 文献传递

提高比活的葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和应用: 本发明公开了提高比活的葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因，涉及基因工程领域。本发明采用定点突变技术和易错PCR方法将黑曲霉Aspergillus niger GIM 3.452(CICC 2377)的葡萄糖氧化酶(GOD)基...; 聂金梅李阳源刘金山唐业王建荣; 文献传递

密码子优化及透明颤菌血红蛋白共表达提高耐热脂肪酶在毕赤酵母的表达被引量：1: 2016年; 根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对Thermomyces lanuginosus脂肪酶基因(tll)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb)进行密码子优化。优化后的脂肪酶基因(tll-opt)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb-opt)中碱基GC含量分别由原来的46%提高到49%和42%提高到51%,碱基A、T、C、G均匀分布,减少了AT和GC富集区,利于tll-opt和vhb-opt基因在毕赤酵母X33中的表达。将tll和tll-opt连接到表达载体p PICZαA并转入毕赤酵母X33中。摇瓶培养条件下,含有tll和tll-opt重组工程菌的最大酶活力分别为7 U/m L和16 U/m L。50 L发酵罐培养条件下,含有tll和tll-opt重组工程菌的最大酶活力分别为201 U/m L和430 U/m L。为了进一步提高含tll-opt重组工程菌的表达酶活性,将vhb-opt转入该重组工程菌得到工程菌VHb^+(含有tll-opt和vhb-opt)。重组工程菌VHb+在摇瓶培养条件下最大酶活力为23 U/m L,分别是优化后基因和原始基因最大表达酶活力的1.39倍和3.28倍。重组工程菌VHb+在50 L发酵罐瓶培养条件下最大酶活力为610 U/m L,分别是优化后基因和原始基因最大表达酶活力的1.41倍和3.03倍。; 王建荣刘丹妮夏雨杨玲刘金山唐业陈丽芝黄佳乐李阳源; 关键词：密码子优化脂肪酶透明颤菌血红蛋白高密度发酵

优化密码子及诱导温度提高雪白根霉脂肪酶在毕赤酵母中的表达被引量：3: 2017年; 根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对雪白根霉脂肪酶基因(rnl)进行密码子优化。优化后的脂肪酶基因(rnl-opt)GC含量由原来的46%提高到49%,碱基A,T,C,G均匀分布,减少了AT和GC富集区,适应指数由0.82提升到0.85。将rnl-opt连接到表达载体p PICZαA并转入毕赤酵母X33中。将含有rnl和rnlopt的重组工程菌在摇瓶和50 L发酵罐中进行诱导表达。摇瓶培养条件下,含有rnl和rnl-opt重组工程菌的最大酶活分别为458、956 U/m L。50 L发酵罐培养条件下,含有rnl和rnl-opt重组工程菌的最大酶活和总蛋白浓度分别为14 856、30 500 U/m L和3.61、7.8 g/L。为了进一步提高含rnl-opt重组工程菌的表达酶活,对其在50L发酵罐培养的诱导温度进行优化,当诱导温度为22℃时,含rnl-opt重组工程菌的酶活和细胞湿重均达到最大值分别为39 520 U/m L和461 g/L。相对于30℃,酶活和细胞湿重分别提高了30%和16%。; 王建荣刘丹妮夏雨杨玲刘金山唐业陈丽芝黄佳乐李阳源; 关键词：密码子优化脂肪酶

比活提高的植酸酶APPA突变体及其基因和应用: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及比活提高的植酸酶APPA突变体及其基因和应用。本发明采用定点饱和突变的方法对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌植酸酶APPA的第53位、第68位、第77位、第96位、第112...; 李阳源黄江何小梅江民华陈丽芝高芝刘金山唐业王勇王平

优化的谷氨酰胺转氨酶基因、信号肽及发酵方法: 本发明涉及基因工程领域，具体涉及优化的谷氨酰胺转氨酶基因、信号肽及发酵方法。所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.2～8所示。本发明通过密码子优化技术优化了来源于吸...; 李阳源王建荣陈稳陈丽芝刘金山唐业瞿曼王勇王平; 文献传递

黑曲霉葡萄糖氧化酶基因改造及其在毕赤酵母中的表达被引量：3: 2018年; 为构建并筛选高效表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株,采用PCR法从黑曲霉基因组中获得葡萄糖氧化酶全长基因(GOD),采用定点突变法和重叠PCR法获得GOD^(mut)基因,将其插入到pPICZαA中,获得重组质粒pPIC-GOD^(mut),经Pme I线性化后,用电击法转化毕赤酵母菌株X33,经大量筛选,获得1株高效分泌表达的工程菌株X33-pPIC-GOD^(mut),在此基础上,去除GOD基因的信号肽,用同样的试验方法构建并筛选高效分泌表达的工程菌株X33-pPIC-GODnew,结果表明:X33-pPIC-GOD^(mut)的产酶水平为460. 3 U/mL,X33-pPIC-GODnew的产酶水平为714. 9 U/mL,是前者的1. 52倍,该酶的最适作用温度和最适作用pH值分别为40℃和5. 0,成功获得1株高效稳定表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株。; 聂金梅李阳源刘金山王勇唐业; 关键词：葡萄糖氧化酶黑曲霉毕赤酵母表达系统信号肽

优化改良的植酸酶突变体及其编码基因和应用: 本发明涉及基因工程领域，具体涉及优化改良的植酸酶突变体及其编码基因和应用。基于SEQ ID NO.2植酸酶的第10位，第70位，第142位，第159位和第255位中至少一个氨基酸被替换。本发明利用基因工程手段对大肠杆菌来...; 李阳源何小梅周银华钟开新黄江陈丽芝刘丹妮刘金山唐业; 文献传递

优化改良的植酸酶突变体及其编码基因和应用: 本发明涉及基因工程领域，具体涉及优化改良的植酸酶突变体及其编码基因和应用。基于SEQ？ID？NO.2植酸酶的第10位，第70位，第142位，第159位和第255位中至少一个氨基酸被替换。本发明利用基因工程手段对大肠杆菌来...; 李阳源何小梅周银华钟开新黄江陈丽芝刘丹妮刘金山唐业; 文献传递

热稳定和比活提高的植酸酶ECAPPA突变体及其基因和应用: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及热稳定和比活提高的植酸酶ECAPPA突变体及其基因和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.2的植酸酶的第74，82，97，159，179，376，389，402位氨基酸被突变。相对于原始植...; 李阳源黄江何小梅江民华陈丽芝高芝刘金山唐业王勇王平; 文献传递

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