吴峰
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- miR-217慢病毒表达载体及稳转胶质瘤细胞系的构建
- 2015年
- 目的:构建mi R-217慢病毒表达载体并建立稳定表达mi R-217的胶质瘤细胞系,为深入研究mi R-217在胶质瘤细胞生长及功能中的作用及机制提供条件。方法:利用人基因组中mi R-217前体序列,设计并合成引物。采用PCR的方法扩增含mi R-217前体的目的片段,酶切后连接至慢病毒表达载体p LVX-EGFP-Puro。将带有mi R-217前体的慢病毒载体及辅助质粒用脂质体的方法转染293细胞,24小时后收集上清液测定病毒滴度。利用实时定量PCR检测mi R-217的表达水平,确定慢病毒载体的表达能力。将病毒感染胶质瘤细胞系U251,通过荧光观察和嘌呤霉素(Puromycin)筛选,获得稳定转染mi R-217的胶质瘤细胞系。结果:克隆的mi R-217前体目的片段经PCR检测和测序分析,序列完全正确、无突变。实时定量PCR检测发现慢病毒感染293T细胞后,mi R-217的表达水平明显升高(P<0.01),表明mi R-217慢病毒表达载体构建成功。经嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜观察发现细胞均有稳定的绿色荧光表达,并且mi R-217的表达水平显著升高(P<0.01),是对照组的12.5倍。结论:成功构建了mi R-127慢病毒表达载体和稳转胶质瘤细胞系,为后续研究奠定了良好基础。
- 赵保苏国军张淑霞吴峰苏陈叶晶亮韩瑞章郑林丰
- 关键词：MI胶质瘤细胞慢病毒
- 胶质瘤患者血浆miR-21的表达水平及意义被引量：2
- 2014年
- 目的:研究脑胶质瘤患者血浆中miR-21的水平,并评价其作为临床诊断标志物的可能性。方法:收集临床确诊的胶质瘤患者和健康对照人群的血浆标本,常规方法提取血浆中RNA,采用茎环结构的引物将其逆转录成cDNA,实时定量PCR的方法分别检测miR-21在胶质瘤患者和健康对照人群中的水平,根据ROC分析评价miR-21作为诊断标志物的可能性。结果:分别收集了胶质瘤患者和健康对照人群血浆标本52例和43例,实时定量PCR结果显示,相对于健康对照人群,miR-21在胶质瘤患者血浆中呈高水平状态。ROC分析说明血浆miR-21水平作为诊断胶质瘤标志物具有较高的灵敏度和特异度。结论:血浆miR-21水平具有作为胶质瘤诊断的生物标志物的潜能。
- 赵保吴峰郑林丰叶晶亮韩瑞章苏国军
- 关键词：胶质瘤MIR-21血浆标志物
