陈宗香
- 作品数：12 被引量：5H指数：2
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 一种拯救麻疹Schwarz/Moraten疫苗株的系统和方法
- 本发明提供了一种麻疹Schwarz/Moraten疫苗株反向遗传学方法，包括如下步骤：(1)病毒全长质粒pT7MV<Sub>sw</Sub>和辅助质粒与哺乳动物细胞混合；(2)电击转染；(3)培养细胞，收获病毒；所述全长...
- 刘兰军张勇侠陈宗香高雅丽康庄
- 文献传递
- 一种用于拯救麻疹病毒、重组麻疹病毒的系统以及方法
- 本发明公开了一种用于拯救麻疹病毒及表达GFP的重组麻疹病毒的系统、方法及用途，本发明的系统包括如下成分：1)含有麻疹病毒反基因组全长的转录质粒pT7MV<Sub>S191</Sub>或pT7MV<Sub>S191</Su...
- 刘兰军张勇侠李玫颖陈宗香
- 文献传递
- Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备
- 2018年
- 目的原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白(NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法构建重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达。表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6Xhis的识别和结合特性。结果重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量为100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis表达的DENV2 NS1蛋白。结论原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的质检奠定了基础。
- 张勇侠高雅丽康庄丛聪罗心梅代云见陈宗香李立李桂华刘兰军
- 关键词：登革病毒NS1蛋白原核表达免疫荧光
- 一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺
- 本发明提供了一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺，属于病毒载体疫苗制备领域。所述方法包括以下步骤：(1)细胞培养：在装载有细胞微载体的生物反应器内加入无血清细胞生长液，培养Vero细胞至密度为2～5...
- 刘兰军容新宗武志强张勇侠李春阳陈宗香高雅丽牟建超杜天飞杨硕杨盛理李佳林
- 一种小型动物采血车
- 本实用新型公开一种小型动物采血车，所述采血车的操作台上设有躯干固定架，所述躯干固定架包括主体框架、上挡板、前挡板，主体框架上端开口，水平设有滑槽，上挡板水平嵌入滑槽内，前挡板下端与主体框架铰接，两侧设有与主体框架连接的锁...
- 杨硕李佳林陈宗香杨盛理刘兰军
- 表达2型登革病毒NS1重组麻疹病毒的拯救及鉴定被引量：2
- 2018年
- 以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×His,最后构建获得插入了外源基因DENV2 NS1 6×His的载体pT7MVS191-DENV2NS1 6×His。质粒pT7MVS191-DENV2NS1 6×His与表达麻疹病毒N、P、L蛋白的辅助质粒共转染BSRT7细胞完成病毒包装后,在Vero细胞内增殖,完成重组病毒的拯救。重组病毒在Vero细胞上传至第4代,基因测序证明重组病毒中成功插入了外源基因DENV2NS1 6×His;Western Blot、原位免疫荧光反应可检测到重组病毒中麻疹病毒N蛋白及外源抗原DENV2NS1 6×His的表达;重组病毒增值特性与疫苗株MVS191相似;P1至P4代的重组病毒滴度稳定在6log10CCID50/mL～6.5log10CCID50/mL之间;P4代重组病毒免疫家兔,兔抗血清中麻疹病毒中和抗体效价大于1∶160;Western Blot可检测到免疫兔血清中DENV2NS1的抗体。本文成功构建了以麻疹病毒为载体,表达外源抗原DENV2NS1的重组病毒,为以麻疹病毒为载体的登革疫苗研发奠定基础。
- 张勇侠陈宗香高雅丽罗心梅丛聪康庄赵婷刘兰军
- 关键词：重组病毒
- 腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立
- 2019年
- 目的建立腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1(JL1)反向遗传系统,获得单一成分的拯救病毒JL1R。方法将JL1全长cDNA基因序列分为7个片段(F1~F7),在F7片段的3′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRZ),分段合成后分别插入载体pT7-MCS3中,根据每段重叠区域的酶切位点拼接,构建全长表达质粒pT7-MCS3-MUVJL1(HdvRz);同时构建表达腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒;将全长表达质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒pCDIBP-T7RNAP共同电转染Vero细胞。对获得的病毒JL1R进行测序、病毒滴度及中和抗体测定。结果拯救病毒JL1R基因组SH及HN片段与疫苗株JL1对应片段的理论序列一致;JL1R经Vero细胞连续传代培养2~10代病毒滴度均在6 lgCCID50/mL以上;JL1R与疫苗株S79诱发抗MuV抗体滴度接近。结论成功构建了MuV疫苗株JL1的反向遗传操作系统,获得的单一成分拯救病毒JL1R可作为腮腺炎疫苗株的备选株,解决了S79疫苗生产中毒种及疫苗株的成分、纯度和批间一致性等问题,进一步提高了国内腮腺炎疫苗的免疫效果。
- 高雅丽张勇侠陈宗香康庄罗心梅丛聪李立刘兰军
- 关键词：腮腺炎病毒疫苗株反向遗传系统
- 一种副粘病毒的拯救系统和副粘病毒拯救方法
- 本发明提供了一种副粘病毒拯救方法，包括以下步骤：(1)将副粘病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pT7‑T7RNAP质粒、pCDIBP‑T7RNAP质粒和动物细胞混合；(2)使用物理或化学方法介导多质粒共转染；(3)...
- 刘兰军张勇侠高雅丽陈宗香
- 文献传递
- 一种拯救腮腺炎病毒的系统和方法
- 本发明提供了一种制备腮腺炎病毒的系统及方法，它是通过构建带有T7启动子的腮腺炎病毒全长质粒，以及辅助质粒，通过反向遗传学的方法制备腮腺炎病毒。所述辅助质粒有4种：NP质粒、P质粒、L质粒和T7RNAP质粒。其中T7RNA...
- 刘兰军张勇侠高雅丽陈宗香康庄
- 文献传递
- 一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺
- 本发明提供了一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺，属于病毒载体疫苗制备领域。所述方法包括以下步骤：(1)细胞培养：在装载有细胞微载体的生物反应器内加入无血清细胞生长液，培养Vero细胞至密度为2～5...
- 刘兰军容新宗武志强张勇侠李春阳陈宗香高雅丽牟建超杜天飞杨硕杨盛理李佳林
