王婷
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：江西农业大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科技计划项目江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学医药卫生生物学更多>>
- 链霉菌JD211发酵液对水稻防御稻瘟病菌诱导抗性的作用被引量：5
- 2017年
- 为研究链霉菌JD211对水稻的抗性诱导机制,采用链霉菌JD211发酵液处理叶片,测定叶片中主要防御性酶活性及丙二醛(MDA)含量的动态变化,叶片表现出明显的抗稻瘟病菌作用。结果表明,不同浓度链霉菌JD211发酵液均能使水稻叶片中的过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性提高,MDA含量也逐渐升高,其中以20%链霉菌JD211发酵液浓度处理效果较好。
- 徐志荣傅雁辉赵英杰王婷魏赛金
- 关键词：水稻防御酶诱导抗性
- 新型冠状病毒Omicron变异株RBD二聚体蛋白抗体的制备与鉴定
- 2023年
- 【目的】研究旨在构建新冠病毒Omicron变异株(B.1.1.529)RBD重组质粒pET-28a-RBD-dimer,利用E.coli BL21(DE3)原核细胞表达S-RBD二聚体蛋白并制备其多克隆抗体,用于研究Omicron变异株RBD的免疫学功能。【方法】运用Golden Gate无缝克隆技术将密码子优化的RBD二聚体基因克隆到pET-28a载体中,构建pET-28a-RBD-dimer重组质粒。经表达条件优化后,以镍离子亲和层析法分离纯化RBD二聚体蛋白。将纯化的蛋白作为免疫原制备鼠源抗RBD二聚体蛋白的多克隆抗体,利用间接ELISA、IFA及Western blotting试验技术分别检测多克隆抗体的效价和特异性。【结果】ELISA试验结果显示该多克隆抗体的效价高达1:256000,IFA及Western blotting试验结果表明该多克隆抗体可特异性识别原核、真核细胞表达的RBD二聚体蛋白以及商业化RBD蛋白,具有较好的特异性、反应原性和灵敏性。【结论】研究成功使用原核细胞表达Omicron RBD二聚体蛋白,其具有较好的免疫原性,可以有效制备具有较高抗体效价、特异性及灵敏度的多克隆抗体,为进一步研究原核表达的RBD二聚体蛋白的生物学功能,Omicron变异株的鉴别诊断和亚单位疫苗的开发提供依据。
- 王婷陶飞飞刘仕国余文捡王宇黎美凤李名志刘树荣王毅豪孔令保
- 关键词：多克隆抗体
- 乙型脑炎病毒NS1_(△63)蛋白发酵工艺优化研究
- 2023年
- 【目的】乙型脑炎病毒NS1蛋白能诱导机体产生保护性免疫,具有开发成亚单位疫苗的潜力。为提高重组蛋白NS1_(△63)的原核表达量,研究进行发酵条件优化以开发稳定高产的蛋白生产工艺。【方法】采用单因素与Plackett-Burman试验对培养基成分进行优化,同时探究诱导条件对发酵的影响,并在5 L发酵罐中进行初步的工艺放大验证。【结果】最佳的培养基成分为乳糖10 g/L、酵母粉19 g/L、蛋白胨25 g/L、磷酸盐37.5 mmol/L、氯化钾1.25 g/L。最佳发酵条件是诱导温度36℃、诱导时间12 h、0.6 mmol/L IPTG、5%接种量。蛋白产量提高到优化前的3.25倍,5 L发酵罐蛋白产量可达3022.23 mg/L。【结论】研究显著提高了NS1△63蛋白的原核产量,为该蛋白应用于亚单位疫苗和检测试剂盒的相关研究奠定了基础。
- 陶飞飞卞佳宁余文捡刘仕国熊海月钟鸣孔令保王婷
- 关键词：乙型脑炎病毒大肠杆菌发酵优化
- PEDV、TGEV、PDCoV和GAR多重RT-PCR检测方法的建立及应用
- 2022年
- 为了建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪A群轮状病毒(GAR)的多重RT-PCR实验室检测方法。参照GenBank中登录的PEDV、TGEV和PDCoV N基因和GAR VP7基因的保守序列,设计4对特异性引物,通过优化扩增程序和反应体系,建立检测这4种病毒的多重RT-PCR方法。结果表明,该方法对PEDV、TGEV、PDCoV和GAR有特异性扩增;4种重组质粒最低检测量分别为8.7、9.8、1250、12.1拷贝/μL。对江西省部分地区猪场的30份腹泻猪的肠道样品和粪便样品进行检测,发现PEDV、TGEV和GAR的检出率分别为66.7%、3.3%、6.7%;其中检出PEDV、TGEV和GAR混合感染1份,PEDV和GAR混合感染2份。该检测方法特异性强,重复性与敏感性高。
- 张丽荣冯田姚明杰郭萍丁珍孔令保王婷
- 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒多重RT-PCR
- 乙脑病毒RT-LAMP快速检测新方法的建立被引量：3
- 2021年
- 为了实现一步快速检测乙脑病毒,试验采用逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术,利用具有高反转录酶活性的Bst 3.0 DNA聚合酶,根据乙脑病毒P3株NS1序列设计一组LAMP引物,以乙脑病毒NS1重组质粒为模板,针对影响LAMP反应结果的4个重要因素:反应温度、甜菜碱浓度、Mg^(2+)浓度、酶浓度进行单因素试验并优化反应体系。结果表明,当扩增温度为67℃,甜菜碱浓度为0.8mol•L^(-1),Mg^(2+)浓度为4mmol•L^(-1),酶浓度为0.32U·μL^(-1)时体系反应效率最佳。为进一步验证RT-LAMP检测方法,以乙脑病毒P3株为模板,进行扩增反应,结果显示成功。在结果判定方面,采用成本较低的钙黄绿素-MnCI2显色方法,并通过使用有色背景板,增强阳性与阴性结果间的差异,辅助判断。试验说明基于Bst 3.0 DNA聚合酶对乙脑病毒的一步检测是成功的,为研制一款灵敏度高、特异性强、检测成本低、可在猪场和基层实验室简单操作的JEV快速检测试剂盒做出探索,也为今后研发针对RNA病毒的高效检测方法提供参考。
- 卓泽文林彦汐李名志杨自兵朱丽婷孔令保王婷
- 关键词：乙脑病毒可视化
- 基于OBE理念的细胞工程课程教学改革探索与实践被引量：10
- 2020年
- 细胞工程是结合现代生命科学理论和生物技术的综合性学科,代表着生物技术与工程相结合的发展方向和研究热点。为提高教学质量,将OBE理念引入细胞工程教学中,创新教学方法,完善课程评价体系,以期促进细胞工程课程教学质量的进一步提高。
- 万加武程晨王婷
- 关键词：细胞工程教学改革
- 猴痘F3L蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：2
- 2023年
- 目的猴痘病毒(MPXV)是一种能引起人畜共患病的正痘病毒属病毒,在人群和野生动物中具有较高的感染率,对人类公共卫生安全造成重大威胁。当前猴痘病毒的相关研究基础较弱,猴痘诊断试剂匮乏。本研究旨在以猴痘病毒基因F3L为对象表达F3L重组蛋白并免疫小鼠,制备F3L多克隆抗体,为猴痘诊断试剂的研发奠定基础。方法克隆猴痘病毒基因F3L,构建至原核表达载体pET-28a上,测序无误后将重组质粒pET-28a-MPXV-F3L转化E.coli BL21感受态细胞,用优化的IPTG诱导表达条件表达MPXV-F3L重组蛋白,表达蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后采用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。用纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备F3L多克隆抗体血清,采用ELISA检测血清抗体滴度。结果克隆得到的猴痘病毒F3L基因片段长度为471 bp,表达的pET-28a-MPXV-F3L重组蛋白分子质量约为24.6 ku,其最佳表达条件为IPTG浓度0.2 mmol/L、温度42℃、时间12 h。表达蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后纯度达95.29%,经Western blot鉴定表达蛋白能被相应抗体识别。用该蛋白免疫小鼠,制备获得F3L多克隆抗体ELISA滴度为4.709。结论重组表达的F3L蛋白具有抗原性,免疫小鼠后能刺激产生高滴度的血清抗体,为F3L蛋白功能分析、猴痘病毒的致病机制研究以及诊断试剂和疫苗的开发奠定了基础。
- 王毅豪刘承锐刘昊霖贾梦乐杨领弟陶飞飞王婷王宇孔令保黎美凤
- 关键词：猴痘病毒原核表达纯化免疫
- 猴痘病毒E2L蛋白的表达、纯化及免疫原性评价
- 2023年
- 【目的】构建猴痘病毒E2L蛋白原核表达载体,经诱导表达及纯化鉴定后免疫接种昆明小鼠评价其免疫原性,为猴痘病毒诊断试剂、疫苗和特异性治疗药物的研发打下基础。【方法】根据GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列优化密码子后合成E2L基因,将其克隆至表达载体pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-28a-E2L,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)受态细胞,采用控制变量的方法对融合蛋白最佳诱导表达条件进行优化,通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。融合蛋白经His-Bind柱亲和层析纯化后,经腹腔注射免疫昆明小鼠,从免疫当天(第0 d)开始每隔7 d通过断尾法采集昆明小鼠血清1次,采用ELISA检测血清抗体效价。【结果】以构建的原核表达载体pET-28a-E2L转化BL21(DE3)受态细胞后,经IPTG诱导,能成功表达获得融合蛋白E2L,且主要以包涵体的形式进行表达。融合蛋白E2L的最佳诱导表达条件为40℃下以1.0 mmol/L IPTG诱导16 h,通过His-Bind柱亲和层析纯化时的最佳咪唑洗脱浓度为100 mmol/L。昆明小鼠免疫试验结果表明,纯化后的融合蛋白E2L能诱导昆明小鼠产生较高水平的体液免疫,至免疫第42 d昆明小鼠血清仍然维持较高抗体水平,抗体效价高达1∶70400,说明融合蛋白E2L具有良好的免疫原性。【结论】猴痘病毒E2L蛋白在原核表达系统能实现高效表达,且以纯化后的融合蛋白E2L免疫昆明小鼠能产生较强的体液免疫,表明具有良好的免疫原性,可用于新型猴痘病毒检测方法及预防疫苗的研发。
- 贾梦乐熊嘉琦杨领弟王毅豪孙静婷王婷黎美凤孔令保彭棋
- 关键词：猴痘病毒原核表达免疫原性
- 猴痘病毒A5L蛋白的原核表达及其免疫原性评价
- 2024年
- 【目的】获取高纯度猴痘病毒(Monkeypox virus, MPXV)A5L蛋白,制备小鼠抗A5L高效价抗血清,为MPXV A5L蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】构建重组质粒pET-28a-A5L,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,通过分析不同IPTG诱导浓度、诱导温度、诱导时间条件下重组蛋白A5L表达情况,筛选最佳表达条件。通过Western blotting鉴定重组蛋白A5L表达,利用SDS-PAGE分析重组蛋白可溶性。A5L蛋白经His-Bind镍柱亲和层析纯化后免疫小鼠,通过ELISA法检测抗体效价。【结果】双酶切和测序结果显示,原核表达载体pET-28a-A5L构建成功。Western blotting结果显示重组蛋白A5L在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达;A5L蛋白在诱导温度42℃、诱导剂(IPTG)浓度为1.6 mmol/L、诱导16 h后表达量最高,大小为40 ku。SDS-PAGE分析结果显示,A5L蛋白主要以包涵体形式存在,最佳咪唑洗脱浓度为50 mmol/L。ELISA结果显示,制备的鼠抗A5L蛋白抗体最高效价达1∶205 440。【结论】本研究成功构建了重组质粒pET-28a-A5L,并在原核表达系统中成功表达重组蛋白A5L,制备的A5L多克隆抗体具有较好的免疫原性,研究结果为进一步探究MPXV A5L蛋白的生物学功能奠定基础。
- 熊嘉琦贾梦乐杨领弟王毅豪孙静婷王婷黎美凤孔令保孔令保
- 关键词：猴痘病毒原核表达免疫原性
