于林洋
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 供职机构：华南农业大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：“十二五”国家科技计划农村领域国家科技支撑计划广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒华南株GDjm全基因组测序与遗传进化分析被引量：1
- 2020年
- 为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)基因变异情况,对广东地区某猪场患有猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)仔猪的肺脏样品进行检测及病毒分离,在猪肺泡巨噬细胞(PAM)上成功分离1株病毒并命名为GDjm株,然而分离的毒株不能感染Marc-145细胞。全基因组进化分析、同源性比对及重组分析结果显示,GDjm属于重组毒株,与GDZS2016的同源性为96.2%,与中国高致病性毒株HUN4同源性为96.0%,与美洲型经典毒株VR-2332的同源性为87.4%,与NADC30同源性为82%,与欧洲型毒株Lelystad-virus同源性为57.9%。NSP2序列比对和同源性分析结果显示,GDjm与高致病性毒株HUN4、JXA1、JXwn06相似,在511、534~562位存在氨基酸缺失。GP5序列比对以及同源性分析结果显示,GDjm毒株在GP5抗原表位存在氨基酸突变。经重组分析得出GDjm株为高致病性毒株HUN4与华南地区流行毒株GDZS2016的重组毒株,重组区域为6723~9521 bp、11998~15019 bp。
- 张驰董建国于林洋王爽云范兰兰张乐宜刘燕玲王磊宋长绪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传进化
- 猪流行性腹泻病毒nsp1、nsp5和N蛋白的重组腺病毒载体的构建及免疫原性比较
- 2024年
- 为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将其连接到腺病毒穿梭载体上,构建重组穿梭质粒。将3个重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体共转染至HEK-293A细胞中获得第1代重组腺病毒,分别命名为rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N。用第1代3株重组腺病毒接种HEK-293A细胞,连续传代,通过RT-PCR和Western-blot方法鉴定第3代重组腺病毒,并采用Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID_(50))。以3株重组腺病毒的第3代病毒液免疫小鼠,收集血清并检测特异性IgG抗体水平。结果表明:试验成功构建出带有nsp1、nsp5、N基因的重组穿梭质粒;分别用重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N感染正常HEK-293A细胞,可产生典型的细胞病变并观察到荧光信号;目的基因正常转录后得到的目的蛋白可正确表达;3株重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N的TCID_(50)依次为1×10^(-8.35)/mL、1×10^(-8.50)/mL、1×10^(-7.66)/mL;免疫小鼠后均可产生针对目的蛋白的特异性抗体。说明试验成功构建的3株正常表达目的蛋白的重组腺病毒均具有免疫原性。
- 杨霞王爽云于林洋徐舸郑继豪王志朋张歆明刘燕玲张乐宜徐铮宋长绪
- 关键词：重组腺病毒免疫原性
- 2016年-2017年广东省部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析被引量：6
- 2017年
- 为研究广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株ORF5基因的遗传演化情况,采用RT-PCR方法对2016年-2017年采自广东省地区猪场疑似PRRS猪肺脏组织样品中的PRRSV ORF5基因进行了扩增,并对这些毒株的核苷酸和氨基酸序列进行了生物信息学分析。结果表明,成功扩增出12株PRRSV流行毒株的ORF5基因片段。遗传演化分析表明,扩增出的毒株有10株与国内高致病性毒株亲缘关系较近,属于同一分支;2株与广东地区新报道的毒株QYYZ和GM2亲缘关系较近,属于同一分支。氨基酸序列比对结果表明,新分离的毒株在GP5抗原表位上存在广泛的变异。结果表明,该地区PRRSV毒株已经发生广泛变异。研究结果不仅揭示了广东地区流行的PRRSV ORF5基因的遗传演化特性,也为该地区PRRS的防控提供了科学依据。
- 于林洋董建国张乐宜张乐宜刘燕玲梁鹏帅王磊
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因
- 2019—2020年广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和NSP2基因遗传进化分析被引量：1
- 2021年
- 为了了解2019—2020年广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对采集到的331份疑似感染PRRSV的临床样品进行病原检测,并对能同时检测到GP5和NSP2基因的阳性样品进行测序,再通过分子生物学软件将测序结果与GenBank中的参考毒株进行遗传进化和核苷酸序列同源性分析。结果表明:检测的331份样品中有65份呈阳性,阳性率为19.6%,PRRSV在广东省具有较高的感染率。对能同时检测出GP5和NSP2基因的阳性样品进行测序,最终获得11株PRRSV的GP5和NSP2基因序列。对11株毒株的GP5基因进行遗传进化分析,有3株属于Lineage 8.7(JXA1和CH-1a)亚群,1株属于Lineage 5.1亚群,3株属于Lineage 1(NADC30)亚群,4株属于以QYYZ为代表的Lineage 3亚群,11株PRRSV毒株的GP5基因核苷酸序列同源性为78.9%~99.2%。对11株PRRSV毒株的NSP2基因进行遗传进化分析,有3株属于以JXA1毒株为代表的Lineage 8.7亚群,1株属于以QYYZ毒株为代表的Lineage 3亚群,2株属于以欧洲型代表株LV为代表的亚群,5株属于以NADC30为代表的Lineage 1亚群,11株PRRSV毒株的NSP2基因核苷酸序列同源性为32.1%~98.4%。说明2019—2020年广东省的PRRSV主要流行毒株属于Lineage 3、Lineage 1(NADC30)和Lineage 8.7(JXA1和CH-1a)亚群。
- 王爽云于林洋梁太润董建国杨霞刘燕玲张乐宜宋长绪
- 关键词：遗传进化分析GP5基因NSP2基因繁殖障碍
- 2018—2019年广东省猪流行性腹泻病毒S1、M和ORF3基因遗传进化分析被引量：5
- 2020年
- 为了了解2018—2019年广东省猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对采集到的69份样品进行PEDV抗原检测,并对部分阳性样品的S1、M和ORF3基因进行测序,再利用分子生物学软件对测序结果与NCBI中的参考毒株进行遗传进化树的构建、同源性分析及氨基酸序列比对。结果表明:经RT-PCR检测有38份样品为PEDV阳性,阳性率为55%,阳性率较高。在PEDV S1基因遗传进化分析中,检测毒株均位于G2分支,与VN-VAP1113核苷酸序列同源性较高,为96.0%~97.6%;主要有3个氨基酸缺失、5个氨基酸插入及多个氨基酸突变。在PEDV M基因遗传进化分析中,GDxh毒株位于G1-2分支,与DR13核苷酸序列同源性较高,为98.3%;GDhz-1毒株位于G2-1分支,与VN-VAP1113核苷酸序列同源性较高,为98.3%;其他12株毒株位于G2-2分支,与OH851核苷酸序列同源性较高,为97.4%~99.1%;主要有5个氨基酸突变和1个氨基酸插入。在PEDV ORF3基因遗传进化分析中,GDxh毒株与DR13核苷酸序列同源性为91.6%,主要有4个氨基酸突变和一段氨基酸缺失;其他检测毒株均位于G2分支,其中7株毒株与OH851核苷酸序列同源性为90.2%~92.0%,主要有5个氨基酸突变;另外5株毒株与VN-VAP1113核苷酸序列同源性均为87.6%,主要有11个氨基酸突变。说明2018—2019年广东省PEDV流行毒株主要为G1型和G2型,流行情况复杂,其S1和ORF3基因对应的氨基酸序列容易发生突变、插入或缺失,给该地区猪流行性腹泻的防治工作带来较大挑战。
- 范兰兰于林洋班艳芳董建国张驰王爽云刘献辉梁太润张乐宜刘燕玲宋长绪
- 关键词：抗原检测遗传进化分析
- 2016—2017年广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因遗传变异分析被引量：1
- 2018年
- 为了深入了解2016—2017年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP2基因的遗传变异情况,试验采用RT-PCR法对从广东省规模化猪场采集的106份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的肺脏病料进行鉴定,并对分离的PRRSV毒株NSP2基因构建遗传进化树,以及进行同源性分析和氨基酸序列比对。结果表明:经RT-PCR法检测有12份病料为阳性,阳性率为11.32%;分离毒株均为美洲型毒株,有11株毒株与高致病性猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(Highly-pathogenicPRRSV,HP-PRRSV)毒株在同一分支上,1株毒株与以NADC30为代表的毒株在同一分支上;同源性分析显示,PRRSVNSP2基因序列与VR-2332的同源性为53.0%~76.7%,与CH-1a的同源性为51.9%~92.5%,与HuN4的同源性为51.3%~98.2%,与JXA1的同源性为51.6%~98.3%,与NADC30的同源性为51.5%~92.2%,与JXA1-P80的同源性为50.9%~98.3%;氨基酸序列比对结果显示,与美洲型代表株VR-2332和低致病性毒株CH-1a相比,除GDth毒株外其余11株PRRSV毒株在高变区均有多处氨基酸位点发生突变。说明2016—2017年广东地区PRRSV流行株以高致病性毒株为主,并且出现NADC30样毒株。
- 王艳午覃燕灵董建国于林洋于林洋刘燕玲张乐宜宋长绪
- 关键词：肺脏病毒分离
- 猪繁殖与呼吸系统综合征病毒华南株GDgz的分离鉴定及遗传进化分析被引量：8
- 2017年
- 为了解华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异特性,用Marc-145细胞从广东省疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场采集的肺组织中分离得到1株PRRSV(命名为GDgz),该毒株能产生明显的细胞病变。全基因组进化分析和同源性比对分析结果显示,GDgz与中国高致病性毒株位于同一分支,与欧洲型毒株Lelystad-virus同源性最低、仅为60.3%,与美洲型经典毒株VR-2332的同源性为88.8%,与中国高致病性毒株JXA1和HuN4同源性为98.8% 和98.9%,与JXA1的疫苗株同源性为91.1%,与NADC30和NADC30-like毒株 CHsx1401和JL580同源性分别为84.5%、87.2%和83.6%。NSP2序列比对结果显示,GDgz在高变区存在30个不连续氨基酸缺失。GP5序列比对结果显示,GDgz在GP5抗原表位上有氨基酸突变,表明GDgz属于美洲型高致病性毒株传代致弱的疫苗株,且在抗原表位上有一定程度的突变。
- 于林洋董建国张乐宜刘燕玲梁鹏帅王磊宋长绪
- 关键词：繁殖与呼吸综合征病毒遗传进化
- 甘露糖-6-磷酸/胰岛素样生长因子Ⅱ受体介导PEDV感染作用的初步验证
- 2020年
- 为进一步研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染细胞的机制,本研究利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)和质谱(MS)技术筛选细胞内与PEDV相互作用的蛋白,初步鉴定细胞内源性蛋白甘露糖-6-磷酸/胰岛素样生长因子II受体(M6P/IGF2R)为候选蛋白。结果证实M6P/IGF2R蛋白与PEDV S2蛋白相互作用且在细胞内存在共定位现象,过表达M6P/IGF2R能够促进PEDV增殖,干扰M6P/IGF2R能够抑制PEDV增殖。PEDV S2蛋白通过与宿主细胞M6P/IGF2R蛋白互作促进PEDV侵入细胞,该结论为进一步开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用机制研究提供了重要理论依据。
- 班艳芳董建国范兰兰于林洋于林洋张鹏飞刘燕玲刘燕玲张乐宜王磊
- 关键词：猪流行性腹泻病毒共定位
