张冠文
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 汉滩病毒糖蛋白与人溶酶体相关膜蛋白重组真核表达载体的构建表达鉴定及作为基因疫苗的免疫安全性评价
- 2017年
- 目的:利用p VAX1真核表达载体构建汉滩病毒糖蛋白Gn及Gc与人溶酶体相关膜蛋白LAMP分子的重组真核表达载体,鉴定其在人真核细胞系He La中的表达.大量抽提去内毒素质粒,皮下注射Balb/c小鼠后初步对目标载体作为基因疫苗进行安全性评价.方法:利用PCR的方法分别以汉滩病毒编码糖蛋白M片段的c DNA为模板,扩增目的基因Gn和Gc,构建重组真核表达载体p VAX-Gn、p VAX-LAMP/Gn、p VAX-Gc和p VAX-LAMP/Gc,并进行酶切鉴定和Sanger测序.同时构建带有EGFP标签的四种重组质粒,LipofectamineTM2000脂质体将重组质粒瞬时转染He La细胞,通过荧光显微镜观察结合免疫荧光检测目的蛋白的表达.抽提高纯度去内毒素的重组质粒,采用皮下注射免疫小鼠,并取重要脏器进行组织学分析.结果:双酶切鉴定和测序结果证实目的基因Gn、LAMP/Gn、Gc和LAMP/Gc成功克隆入真核载体p VAX 1,基因与原序列一致.荧光显微镜观察连有EGFP的表达载体转染的He La细胞,可见明显的绿色荧光,瞬时转染后特异性抗体免疫荧光检测到目的蛋白的表达.安全性评价结果显示Balb/c小鼠耐受性良好,多次注射后无明显组织形态学改变.结论:成功构建了重组嵌合载体p VAX-Gn、p VAX-LAMP/Gn、p VAX-Gc和p VAX-LAMP/Gc,并在真核细胞系中表达出目的蛋白,免疫小鼠显示了良好的安全性,为后期对汉滩病毒的靶向基因疫苗的研究奠定了基础.
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- 关键词：安全性评价
- 汉坦病毒包膜糖蛋白Gn与Gc基因疫苗的免疫对比研究
- 背景:肾综合征出血热(HFRS)是以发热、出血、急性肾功能损伤为主要临床表现的自然疫源性疾病。其病原体主要为布尼亚病毒科汉坦病毒属的汉滩病毒(HTNV)。我国是世界上发病人数最多的国家,严重威胁疫区人民的生命财产安全。汉...
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- 关键词：汉滩病毒DNA疫苗
- 文献传递
- 汉滩病毒包膜糖蛋白嵌合DNA疫苗的细胞免疫评价及其优势表位的筛选
- 2017年
- 目的:筛选Gn和Gc抗原优势表位,为汉滩病毒疫苗研究提供方向.方法:通过构建汉坦病毒包膜糖蛋白Gn与Gc嵌合溶酶体相关膜蛋白的DNA疫苗pVAX-LAMP/Gn,pVAX-LAMP/Gc,利用酶联免疫斑点实验(ELISpot)长期评估了BALB/c小鼠体内的细胞免疫应答.结果:在刺激T淋巴细胞的短效与长效免疫中,pVAX-LAMP/Gc组的效应优于其他组,并筛选出优势抗原表位.结论:目前许多新型汉滩病毒疫苗研究缺少细胞免疫应答评价和记忆免疫应答评价.筛选出的Gn和Gc的抗原优势表位,可以为新型汉滩病毒疫苗的研制奠定良好的基础.
- 张锦鹏张冠文张冠文孟强孟强孟强张哲张正姜东伯杨琨
- 关键词：DNA疫苗
