夏苗苗
- 作品数：16 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 代谢工程改造嘌呤合成途径以提高核黄素产量
- 2022年
- 核黄素又名维生素B_(2),是人体必不可少的营养物质之一,而鸟苷三磷酸则是核黄素合成的重要前体。为在高产菌株的基础上进一步提高核黄素产量,该研究以高产核黄素的枯草芽孢杆菌S1为出发菌株,利用CRISPER/Cas9介导的基因组碱基编辑技术对嘌呤合成途径阻遏蛋白基因以及鸟嘌呤核苷酸(guanylate,GMP)还原酶基因进行失活,并利用质粒过表达的方法进行了一系列的代谢工程改造。结果显示,guaC基因的失活阻断了GMP到肌苷酸的回补途径,使GMP得到积累,使核黄素产量达到3.04 g/L,而purR基因的失活没有效果;使用PvegI启动子过表达希瓦氏菌来源的ribA后,核黄素产量提高到3.33 g/L。将失活guaC基因与PvegI启动子过表达希瓦氏菌ribA结合,最终使核黄素产量达到3.43 g/L,较出发菌株核黄素产量提升22%,转化率提升25.8%。
- 谷振宇夏苗苗苏媛刘川罗华军张大伟
- 关键词：核黄素过表达
- 核糖核苷酸还原酶转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B2中的应用
- 本发明公开了一种核糖核苷酸还原酶转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B<Sub>2</Sub>中的应用。其中所述突变体的氨基酸序列相对于SEQ ID No.3所示序列存在下述突变：第26位氨基酸替换为H。对枯草芽...
- 张大伟夏苗苗刘川孙宜文
- 文献传递
- 一株高产核黄素工程菌株及其应用
- 本发明公开了一种核黄素工程菌及其构建方法，其保藏编号为：CGMCC NO.16132。通过基因工程手段构建核黄素营养缺陷型菌株，随后染色体整合表达解淀粉芽孢杆菌解调的核黄素操纵子，恢复了菌株的核黄素生产能力，并通过表达载...
- 张大伟夏苗苗刘川付首颖孙宜文
- 文献传递
- 筛选脱氮假单胞菌启动子提高维生素B_(12)产量被引量：3
- 2017年
- 维生素B_(12)(VB_(12)/钴胺素)具有多种生理学功能,广泛应用于制药、食品等行业。脱氮假单胞菌是维生素B_(12)常用工业菌株之一。通过筛选高表达启动子来过表达VB_(12)合成途径基因,能有效提高菌株的VB_(12)生产能力。通过对脱氮假单胞菌中某些编码热激蛋白和分子伴侣基因前含启动子在内的非编码序列用启动子在线预测软件进行分析,选取P_(ibpA)、P_(cbpA)、P_(dnaJ)、P_(htpG)、P_(dnak)、P_(grpE)的非编码区与编码绿色荧光蛋白的GFP报告基因相连,通过酶标仪检测GFP的荧光信号值,对编码热激蛋白和分子伴侣基因前的非编码区所含有的启动子的表达强度进行评估,以获得高表达的启动子对VB_(12)合成途径的基因进行过表达。结果表明,含有启动子P_(dnak)的非编码区,其表达的GFP荧光值最高。进而构建强启动子P_(dnak)与维生素B_(12)合成途径基因cobA的过表达重组菌,发酵数据表明,与对照菌株相比重组菌株维生素B_(12)产量提高21.5 mg/L。筛选高表达启动子用于维生素B_(12)合成途径关键基因的表达,是一种有效的提高维生素B_(12)产量的方法。
- 王玲玲夏苗苗董会娜朱蓓薇张大伟
- 关键词：强启动子维生素B12GIBSONASSEMBLY
- 核糖核苷酸还原酶转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B2中的应用
- 本发明公开了一种核糖核苷酸还原酶转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B<Sub>2</Sub>中的应用。其中所述突变体的氨基酸序列相对于SEQ ID No.3所示序列存在下述突变：第26位氨基酸替换为H。对枯草芽...
- 张大伟夏苗苗刘川孙宜文
- 文献传递
- 核黄素工业菌株高通量筛选方法的建立和应用被引量：2
- 2020年
- 枯草芽孢杆菌是主要的核黄素工业生产菌之一,高通量筛选技术是选育获得高产核黄素菌株的关键环节。为实现工业菌种选育与高通量筛选技术相结合,对流式细胞分选、液滴微流控分选和96孔板筛选在核黄素工业菌株筛选中的应用进行了研究,并对96孔板筛选方法进行了优化。在流式细胞分析中,来源于同一株工业菌的低产菌株P1与高产菌株R1的细胞荧光与核黄素产量不成正相关。在液滴微流控分析中,P1和R1的发酵液上清荧光与核黄素产量成正相关,然而液滴分选后活细胞的数量很少。在96孔板筛选实验中,振荡培养后P1和R1的发酵液荧光分别为22 264 a.u.、28 647 a.u.;静置培养后荧光分别为7 095 a.u.、10 189 a.u.,核黄素产量与荧光成正相关,且二者荧光差异显著。利用96孔板静置培养的方法对工业菌株S1的突变体库进行筛选,得到的优选菌株核黄素产量为2.53 g/L,相比S1提高了15%。这些结果表明96孔板静置培养-荧光检测筛选可以应用于核黄素工业生产菌产量的提高。
- 付首颖夏苗苗张祎凝刘川涂然张大伟
- 关键词：核黄素枯草芽孢杆菌荧光检测
- 一种苜蓿中华根瘤菌株及其组合物与应用
- 本发明公开了一种能够用于发酵生产维生素B<Sub>12</Sub>的苜蓿中华根瘤菌，其保藏号CGMCC No. 9638。本发明还公开了苜蓿中华根瘤菌发酵生产维生素B<Sub>12</Sub>的生产和制备方法，包括菌株的...
- 张大伟李莎董会娜夏苗苗房欢周文娟郑平
- 文献传递
- 一株高产核黄素工程菌株及其应用
- 本发明公开了一种核黄素工程菌及其构建方法，其保藏编号为：CGMCC NO.16132。通过基因工程手段构建核黄素营养缺陷型菌株，随后染色体整合表达解淀粉芽孢杆菌解调的核黄素操纵子，恢复了菌株的核黄素生产能力，并通过表达载...
- 张大伟夏苗苗刘川付首颖孙宜文
- 文献传递
- 一种苜蓿中华根瘤菌株及其组合物与应用
- 本发明公开了一种能够用于发酵生产维生素B<Sub>12</Sub>的苜蓿中华根瘤菌，其保藏号CGMCCNo.9638。本发明还公开了苜蓿中华根瘤菌发酵生产维生素B<Sub>12</Sub>的生产和制备方法，包括菌株的发酵...
- 张大伟李莎夏苗苗房欢周文娟郑平
- 文献传递
- 过氧化物转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B2中的应用
- 本发明公开了一种过氧化物转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B<Sub>2</Sub>中的应用。其中所述突变体的氨基酸序列相对于SEQ ID No.3所示序列存在下述突变：第71位氨基酸替换为V。对枯草芽孢杆菌染...
- 张大伟孙宜文夏苗苗刘川
- 文献传递
