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廖翠玲

作品数：1 被引量：1H指数：1
供职机构：暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系更多>>
发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇荧光
  • 1篇荧光抗体
  • 1篇荧光抗体技术
  • 1篇肉瘤
  • 1篇肉瘤细胞
  • 1篇自噬
  • 1篇细胞
  • 1篇抗体
  • 1篇抗体技术
  • 1篇克隆
  • 1篇骨肉瘤
  • 1篇骨肉瘤细胞
  • 1篇分子

机构

  • 1篇暨南大学
  • 1篇浙江大学
  • 1篇浙江大学医学...

作者

  • 1篇章淼锋
  • 1篇叶招明
  • 1篇邹飞雁
  • 1篇孙继红
  • 1篇廖翠玲

传媒

  • 1篇中华骨科杂志

年份

  • 1篇2017
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
大鼠LC3B荧光融合表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的自噬检测应用被引量：1
2017年
目的构建三种rLC3B融合表达载体，探究其在骨肉瘤细胞中的自噬检测应用。方法采用PCR扩增大鼠LC3B基因序列，克隆至pEGFP-C1和pmCherry—C1，分别构建pEGFP-rLC3B和pmCherry-rLC3B融合表达载体；随后以pEG-FP-rLC3B为模板经PCR得到EGFP—rLC3B序列，克隆至pmCherry-C1并构建pmCherry-EGFP—rLC3B融合表达载体。将上述三种质粒转染至U-2OS细胞后，采用饥饿和Rapamycin激活自噬，或Chloroquine和Baf-A1抑制自噬，通过激光共聚焦显微镜观察自噬体和自噬溶酶体的形成。采用Westernblot检测Rapamycin、Chloroquine和Baf-A1作用下的内源性LC3B和外源性EGFP-rLC3B、mCherry，rLC3B及mCherry—EGFP-rLC3B，验证外源性rLC3B的正确表达和自噬检测功能；采用West-erablot检测游离EGFP表达，从而精确检测细胞内的自噬性降解水平。结果经酶切鉴定和测序验证：成功构建三种融合表达载体。采用饥饿和Rapamycin激活自噬，或Chloroquine和Baf-A1抑制自噬，并在激光共聚焦显微镜下观察到明显的自噬体或自噬溶酶体。Westernblot同时检测到内源LC3B和外源rLC3B的表达，并且游离EGFP蛋白的表达随着饥饿时间增加而明显上调，12h组比对照组增加1．05倍，24h组比对照组增加1．56倍，显示自噬性降解水平升高。结论EGFP-rLC3B载体可检测自噬体的形成和反应细胞内的自噬性降解水平；mCherry-rLC3B载体可同时显示自噬体和自噬溶酶体，但不能区分这两者；mCherry-EGFP-rLC3B载体可同时显示和区分自噬体和自噬溶酶体，是检测自噬流的最佳方法。
廖翠玲章淼锋孙继红董江军朱园园叶招明邹飞雁
关键词：自噬克隆分子荧光抗体技术
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