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何芸: 作品数：13 被引量：30H指数：2; 供职机构：重庆医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目国家科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞泡沫化氧化损伤后血管紧张素转化酶2的表达变化及意义被引量：1: 2016年; 目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化后血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达变化与氧化应激损伤的关系,探讨ACE2的抗氧化作用。方法用不同浓度ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7泡沫化,油红O染色观察巨噬细胞内脂质堆积变化,并定量分析细胞内脂滴含量,通过检测细胞上清中丙二醛(MDA)含量鉴定细胞氧化损伤程度,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测ACE2及MAS m RNA表达,化学比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性与还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果不同浓度(20、40、60、80mg/L)ox-LDL处理巨噬细胞24 h,油红O染色可见巨噬细胞变大、变圆,胞质内脂滴含量呈剂量依赖性增加;用60mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫化模型组中MDA含量较对照组明显升高(P<0.01);Real-time PCR结果显示,模型组ACE2和MAS m RNA表达水平较对照组显著减少(P<0.05);与对照组比较,模型组中SOD活性与GSH含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论巨噬细胞泡沫化氧化损伤进程与ACE2及其下游受体MAS表达下调密切相关,提示ACE2具有一定的抗氧化作用,其机制可能与SOD及GSH有关。; 袁颖琳何芸张琴杨发建杨俊霞; 关键词：氧化低密度脂蛋白巨噬细胞血管紧张素转化酶2 实时定量聚合酶链反应

重庆地区鼻咽癌患者血浆EBV-LMP1基因检测及缺失变异分析被引量：1: 2008年; 目的:研究重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆EB病毒潜伏膜蛋白l(EBV-LMP1)基因存在情况及碱基缺失变异状况,探讨其在鼻咽癌发生中的作用。方法:收集重庆籍鼻咽癌患者外周血48例,非鼻咽癌对照者外周血40例,提取DNA后,采用PCR特异性地扩增LMP1基因N端(包含Xho I酶切位点)和C端(包含30 bp缺失的区域),N端PCR产物进行Xho I酶切。用8%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离分析酶切及PCR产物,用双脱氧终止法对部分PCR产物进行测序,用DNAssist软件对序列进行碱基缺失变异分析。结果:48例鼻咽癌外周血中,全部扩增出特异性LMP1基因条带,阳性率为100%。40例非鼻咽对照者外周血中,38例扩增出特异性条带,阳性率为95%。与B95-8原型LMP1比较,电泳分离、酶切分析、测序及软件序列分析,48例鼻咽癌患者和38例非鼻咽癌对照者外周血未发现1例存在LMP1基因N端Xho I酶切位点和C端30 bp的缺失变异。结论:我国重庆地区鼻咽癌患者和非鼻咽癌对照者血浆携带的EBV为非缺失型(原型);LMPl基因缺失变异与鼻咽癌发病的确切关系还需进一步研究。; 杨玉成王袆琴钱迪何芸洪苏玲; 关键词：鼻咽肿瘤疱疹病毒4型潜伏膜蛋白1

EBV-LMP1C端RNA的体外转录合成及其靶脱氧核酶的初步筛选被引量：6: 2006年; 目的探讨用体外转录方法制备EBV-LMP1C端RNA并用该RNA对其靶脱氧核酶进行初步筛选。方法用巢式PCR方法从绒猴淋巴细胞系B95-8细胞中扩增EBV-LMP1exonc,重组入pGEM-11zf载体,并用T7RNA聚合酶对其进行体外转录制备EBV-LMP1C端RNA。根据该RNA的一、二级结构设计合成3种靶向10～23脱氧核酶,据体外剪切效率筛选高效特异的靶向脱氧核酶。结果成功地构建含EBV-LMP1exonc基因的重组质粒,用体外转录方法用1μg质粒转录出40.25μg高纯度的EBV-LMP1C端RNA,有1种脱氧核酶DZ1对该RNA体外剪切效率达89%。结论用T7RNA聚合酶体外转录方法成功制备了高纯度的EBV-LMP1C端RNA,经体外剪切筛选出高效特异的1种脱氧核酶,为进一步研究奠定了基础。; 杨玉成王袆琴钱迪何芸黄江菊洪苏玲; 关键词：体外转录脱氧核酶

以Insig-2基因启动子为靶点的药物筛选模型的建立被引量：1: 2014年; 目的通过双荧光素酶报告基因检测系统建立以胰岛素诱导基因2(insulin-induced gene 2,Insig-2)启动子为靶点的药物筛选模型。方法将人Insig-2基因启动子序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建重组质粒pGL3-Insig-2并与内参质粒pRL-TK瞬时共转染工具细胞,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化反映Insig-2基因启动子启动转录的活性,并对共转染质粒比例、工具细胞选择等条件进行探索和优化,相关药物处理进行验证。结果成功构建了重组质粒pGL3-Insig-2;确认pGL3-Insig-2:pRL-TK共转染比例为4∶1,确定3T3-L1细胞为工具细胞;1,25-(OH)2D3、小檗碱和姜黄素均能明显增强Insig-2基因启动子活性。结论成功建立了以Insig-2基因启动子为靶点的药物筛选模型,为筛选新型调脂药奠定基础。; 张琴杨发建何芸杨俊霞; 关键词：启动子药物筛选调脂药

卡介苗多糖核酸对变应性鼻炎病人Th_1/Th_2失衡状态的调节被引量：16: 2005年; 目的　观察卡介苗多糖核酸(BCG PSN)治疗变应性鼻炎的机制及其疗效。方法　将60例变应性鼻炎病人随机分为BCG PSN治疗组和息斯敏对照组,治疗前后分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定患者外周血单个核细胞(PB MCs)培养上清液中的白细胞介素 4(IL 4) ,白细胞介素 5 (IL 5 ) ,干扰素γ(IFN γ) ,粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)。同时于治疗后1周、治疗后2个月进行疗效评定。结果　病人组PBMCs上清液中IL 4、IL 5、GM CSF含量显著增高,而IFN γ含量显著减少。BCG PSN治疗后病人组上清液IL 4、IL 5、GM CSF水平明显降低,而IFN γ含量显著升高,差异有显著性(P <0 0 1)。息斯敏对照组治疗前后,上述指标变化差异无显著性。治疗2个月后疗效评定,BCG PSN治疗组显效率为66 7% ,优于息斯敏对照组(4 0 % ) (P <0 0 5 )。结论　BCG PSN能纠正变应性鼻炎病人体内Th1 和Th2 细胞因子的失平衡状态,为治疗变应性鼻炎提供了理论依据,临床疗效也表明BCG PSN治疗变应性鼻炎疗效可靠。; 杨玉成洪苏玲黄江菊王祎琴孙荣钱迪董小琴何芸; 关键词：变应性鼻炎卡介苗多糖核酸 TH1/TH2

EB病毒LMP1C端原核表达质粒的构建: 2007年; 目的通过巢式PCR技术扩增EB病毒LMP1 C端,并构建其原核表达重组质粒,经诱导获得EB病毒LMP1C端蛋白。方法用巢式PCR技术,从B95-8细胞中扩增EBV-LMP1 exon c DNA,克隆至pET-32 a载体,转化入原核表达菌BL21,IPTG诱导重组菌株表达,用SDS-PAGE与W estern b lot对表达产物进行鉴定。结果巢式PCR扩增的LMP1exon c DNA长度为801 bp,测序结果与LMP1 C端cDNA序列吻合,诱导pET-32 a-LMP1 c重组原核表达菌株获得大小约48×103的LMP1 C端融合蛋白,W estern b lot表明重组蛋白能与LMP1单克隆抗体特异结合。结论通过巢式PCR成功构建了原核表达载体,获得的EB病毒LMP1 C端融合蛋白为制备国产LMP1单克隆抗体,研究LMP1致瘤机制奠定了基础。; 杨玉成王袆琴钱迪何芸黄江菊洪苏玲; 关键词：EB病毒 LMP1 原核表达

重庆市儿童变应性鼻炎流行病学调查及IL-12对新生儿脐血TH1//TH2功能平衡的影响: 目的变应性鼻炎/(allergic rhinitis,AR/)也称为过敏性鼻炎,为耳鼻喉科常见疾病,全球平均发病率在10/%-25/%左右,AR和哮喘的发病率有明显增加的趋势,尤其是在生活水平较高的工...; 何芸; 关键词：变应性鼻炎流行病学调查脐血; 文献传递

ACE2对脂多糖损伤人脐静脉内皮细胞的抗黏附作用被引量：2: 2015年; 目的观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导血管内皮细胞损伤后细胞黏附性改变与血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)的表达变化的关系,探讨ACE2对血管内皮细胞损伤所致黏附性增加的对抗作用。方法分别用不同浓度(0、10、100、1 000 ng/m L)LPS诱导人脐静脉内皮细胞(umbilical vein endothelial cell,HUVEC)致其损伤,人单核细胞白血病细胞(human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)黏附实验观察HUVEC的黏附性改变。本实验设置4个实验组,分别为未经任何处理的空白对照组、1 000 ng/m L LPS处理6 h的模型组、以10μmol/L氯沙坦钾预处理模型组的氯沙坦钾组及以10μmol/L A779预处理空白对照组的A779组(n=3)。Western blot及RT-PCR法分别检测ACE2的蛋白和基因表达,ELISA法检测细胞上清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素1-7(Ang1-7)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)的含量。结果单核细胞黏附实验可见黏附在HUVEC上的THP-1呈绿色荧光,黏附细胞数呈LPS诱导浓度及时间依赖性显著增加(P<0.01);Western blot结果显示,LPS诱导HUVEC损伤模型组中ACE2蛋白表达水平较空白对照组显著减少(37.33±3.50)%(P<0.01);RT-PCR结果显示,模型组中ACE2 mRNA表达水平较空白对照组显著减少(26.31±2.19)%(P<0.01);ELISA结果显示,模型组较空白对照组细胞上清Ang1-7显著降低(P<0.05),AngⅡ及ICAM-1均显著升高(P<0.01),氯沙坦钾处理组较模型组ICAM-1显著降低(P<0.01),A779处理组较空白对照组ICAM-1显著升高(P<0.05)。结论 LPS诱导损伤HUVEC细胞后其黏附性增加与ACE2表达下调密切相关,提示ACE2具有一定抗黏附作用。; 何芸袁颖琳张琴杨发健杨俊霞; 关键词：脂多糖 ACE2 脐静脉内皮细胞单核细胞

小檗碱对血管内皮细胞黏附的影响及其与ACE2-Ang(1-7)-Mas轴相关性研究: 目的：　　以LPS诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells， HUVECs），构建血管内皮细胞炎症损伤模型，研究小檗碱对HUVECs和人急性单核细胞白血病细胞（ ...; 何芸; 关键词：小檗碱血管内皮细胞炎症损伤

重庆地区鼻咽癌患者血浆EB病毒LMP1基因检测及N端XhoI酶切位点变异分析被引量：1: 2007年; 目的:研究重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆Epstein-Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白l(LMP1)基因存在情况及N端XhoI酶切位点变异状况,探讨其在鼻咽癌发生中所起的作用。方法:收集重庆籍鼻咽癌患者外周血48例,非鼻咽癌患者外周血40例,提取DNA后,用聚合酶链反应技术(PCR)特异性地扩增LMP1基因的N端区,PCR产物经XhoI酶切后用8%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离分析,用双脱氧终止法对部分PCR产物进行测序,用DNAssist软件对序列进行碱基缺失变异分析。结果:48例鼻咽癌外周血中,全部扩增出267bp的特异性LMP1基因条带,阳性率为100%。40例非鼻咽癌者外周血中,38例扩增出特异性条带,阳性率为95%。与B95-8原型LMP1比较,全部PCR产物酶切电泳分析、测序及软件序列分析未发现一例存在XhoI酶切位点缺失变异。结论:我国重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆携带的EB病毒LMP1基因XhoI酶切位点无缺失变异;LMP1基因N端XhoI酶切位点缺失变异与鼻咽癌发病的确切关系还需进一步研究。; 杨玉成王祎琴钱迪何芸洪苏玲; 关键词：潜伏膜蛋白1 鼻咽癌

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