耿超
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：长江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省农业科技创新中心资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 日本乙型脑炎病毒NS3蛋白的真核表达及鉴定被引量：1
- 2019年
- 为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体p EGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程(上海)股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞(BHK21细胞),观察24 h后应用Western-blot和IFA法进行鉴定。结果表明:PCR克隆获得的基因片段大小约为1 370 bp,NS3基因片段与HW1株同源性为100%;BHK21细胞密度在70%~80%时质粒转染效果最佳,质粒质量与转染试剂体积的比例为1∶3;Western-blot鉴定融合蛋白成功表达,分子质量约为79 ku;IFA鉴定融合蛋白成功表达,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强,pEGFP-C3-NS3与NS3阳性血清反应显红色荧光。说明在BHK21细胞中成功表达出NS3蛋白。
- 王双双赵红梅周丹娜蔡行耿超
- 关键词：日本乙型脑炎病毒真核表达转染IFAWESTERN-BLOT
- 日本乙型脑炎病毒NS5rdrp蛋白的真核表达及鉴定
- 2019年
- 为了探究日本乙型脑炎病毒( Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机理和研制以 JEV 复制复合体为靶标的药物,试验以 GenBank 中收录的 JEV HW1 株基因序列为模板,设计针对 NS5rdrp 的特异性引物,提取 JEV RNA,反转录得到 cDNA,以其为模板使用 PCR方法克隆得到 NS5rdrp 基因片段;利用 T4DNA 连接酶构建重组质粒 pcDNA3. 1-NS5rdrp,并对产物测序;提取去除内毒素的重组质粒,用转染试剂 X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent 转染 BHK21 细胞,转染 24 h 后观察结果;最后利用 Western-blot 技术检测 NS5rarp 蛋白的表达情况。结果表明: PCR扩增得到大小约为920 bp的 NS5rdrp 基因片段;测序结果经 NCBI 上 BLAST 比对分析,克隆得到的 NS5rdrp 基因与 HW1 株的同源性为 100%;转染时细胞的最佳密度区间为 70%~ 80%,转染试剂与转染质粒的比例为 3 ∶ 1;经过Western-blot 检测,重组质粒在细胞内正常表达,NS5rdrp 蛋白的分子质量约为 37 ku。说明试验通过真核表达成功获得 NS5rdrp 蛋白。
- 耿超赵红梅周丹娜蔡行王双双
- 关键词：日本乙型脑炎病毒蛋白真核表达聚合酶链式反应细胞免疫印迹分析
- 猪A群轮状病毒Hu B2020株的分离与基因型分析
- 2023年
- 本研究采集湖北省某猪场腹泻发病仔猪的肠道内容物,并对其进行分离与遗传进化分析。将病样接种MA-104细胞,分离获得1株能产生明显细胞病变的病毒,命名为HuB2020。对分离毒株进行多重RT-PCR方法检测,并对分离毒株的VP6和VP7基因进行扩增测序及遗传进化分析。结果表明,HuB2020分离株为猪A群轮状病毒,VP6基因(I5型)与山东分离株DZ-1的同源性最高(97.82%);VP7基因(G9型)与四川分离株SWU-1C的同源性最高(95.51%)。近几年,猪轮状病毒的G9基因型增多,该病有再次流行暴发的潜在威胁。
- 耿超耿超赵红梅杨克礼郭锐袁芳艳刘威高婷刘泽文陆泓宇高扬周丹娜田永祥
- 关键词：猪轮状病毒基因型分析
- 氟安定对小鼠镇痛作用的试验研究被引量：1
- 2017年
- 为了了解氟安定对小鼠的镇痛作用,试验采用小鼠热板法和温浴法测小鼠痛阈的变化,并试验了纳洛酮对氟安定是否有颉颃作用。结果表明:100,200 mg/kg的氟安定能明显延长镇痛反应潜伏期,小鼠灌胃1 h后有效,灌胃2 h痛阈到达高峰;100,200 mg/kg氟安定能明显抑制小鼠温浴法甩尾反应,注射氟安定2 h左右痛阈达到高峰;氟安定+纳洛酮组相对对照组的痛阈提高百分率比氟安定+生理盐水组相对对照组的痛阈提高百分率有所降低,氟安定的镇痛作用有减弱趋势。说明氟安定对小鼠具有较好的镇痛作用,纳洛酮对氟安定有颉颃作用。
- 耿超赵红梅张婷
- 关键词：热板法镇痛作用纳洛酮颉颃作用
- 猪流行性腹泻病毒HB2018的分离鉴定及致病性被引量：3
- 2021年
- 在湖北省开展猪流行性腹泻病毒(PEDV)的收集与分离鉴定,并对其进行遗传进化分析。将7份RT-PCR检测为阳性的病样接种Vero细胞,通过挑斑纯化及PCR鉴定,获得1株PEDV,命名为HB2018。通过Reed-Muench法测定其毒价为106.7 TCID50/mL。该毒株S基因的遗传分析结果显示,其属于GⅡa亚群,与传统疫苗毒株CV777同源性只有93.76%;与目前的商品化疫苗株DR13、AJ1102与LW/L的同源性分别为93.52%,97.40%,97.00%。PEDV 4 mL/头接种26日龄断奶仔猪,均出现腹泻症状,接种3 d后,直肠拭子均检测到病毒RNA,小肠肠壁薄而透明,肠腔积液。结果表明,分离株为新型变异株,且有较强的致病性。
- 耿超陆泓宇梁婉周丹娜杨克礼郭锐袁芳艳刘威高婷刘泽文赵红梅赵红梅
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因遗传进化分析
