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王媛

作品数：4 被引量：10H指数：2
供职机构：浙江中医药大学附属第一医院更多>>
发文基金：浙江省科技计划项目教育部“优秀青年教师资助计划”浙江省自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生

主题

  • 3篇幽门螺
  • 3篇幽门螺杆菌
  • 3篇螺杆菌
  • 2篇原核表达
  • 2篇免疫性
  • 2篇杆菌
  • 1篇定植
  • 1篇序列同源性
  • 1篇血清
  • 1篇血清抗体
  • 1篇遗传学
  • 1篇幽门螺杆菌C...
  • 1篇原核表达系统
  • 1篇致炎
  • 1篇致炎作用
  • 1篇融合基因
  • 1篇同源性
  • 1篇趋化
  • 1篇弯曲菌
  • 1篇细菌

机构

  • 4篇浙江大学
  • 2篇浙江省中医院
  • 1篇金华职业技术...
  • 1篇浙江中医药大...

作者

  • 4篇严杰
  • 4篇王媛
  • 1篇毛亚飞
  • 1篇王欢
  • 1篇胡玮琳
  • 1篇罗依惠
  • 1篇楼宏强

传媒

  • 2篇中华微生物学...
  • 1篇浙江大学学报...
  • 1篇浙江大学学报...

年份

  • 1篇2011
  • 3篇2005
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
CheA／CheY二元信号系统调控空肠弯曲菌体外趋化和体内定植的研究被引量：1
2011年
目的 探讨空肠弯曲菌CheA和CheY调控细菌体外趋化和体内定植中的作用及其机制.方法 分别以pET42a和E.coli BL21DE3为表达载体和表达宿主菌,构建空肠弯曲菌NCTC11168株cheA和cheY基因原核表达系统.制备重组表达的rCheA和rCheY兔抗血清并用DEAE-52离子交换法提取其IgG.采用pBiuescript-Ⅱ-SK构建自杀质粒,制备cheA基因敲除的cheA-突变株.采用基于脱氧胆酸钠硬琼脂法（DOC-HAP）的空肠弯曲菌体外趋化模型,检测cheA-突变株趋化能力的变化,同时分别观察rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠对细菌趋化的抑制作用.采用rCheA-IgG和CheY-IgG捕获法,测定DOC作用后空肠弯曲菌CheA和CheY磷酸化水平变化.采用小鼠感染模型比较cheA-突变株和野生株定植能力的差异.结果 所构建的原核表达系统能有效表达rCheA和rCheY.PCR和测序结果证实eheA-突变株染色体DNA中cheA基因被敲除.cheA-突变株丧失对DOC的趋化能力,rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠均对空肠弯曲菌野生株趋化有明显的抑制作用（P〈0.05）.在DOC作用下,空肠弯曲菌野生株CheA和CheY磷酸化水平迅速下降（P〈0.05）.cheA-突变株定植小鼠空肠的能力也明显不如野生株（P〈0.05）.结论 CheA/CheY组成了空肠弯曲菌趋化相关二元信号传导系统（Che-TCSS）,两者均去磷酸化被激活.Che-TCSS中CheA在空肠弯曲菌体外趋化和体内定植中发挥了关键作用,可作为研发抗空肠弯曲菌感染新药的靶标.
王媛楼宏强王欢胡玮琳严杰
关键词：空肠弯曲菌趋化定植
幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测被引量：3
2005年
　目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系。方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp。采用PCR检测109株HpcagA基因,并从临床菌株Y06中扩增2148bp的cagA基因片段(cagA1)。构建cagA1原核表达系统,用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况,用Westernblot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性。建立ELISA,检测109株HpCagA表达和相应患者血清中CagA抗体。分析CagA+Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系。结果:80.8%胃黏膜活检标本中分离出Hp(126/156),97.2%的Hp菌株(106/109)cagA基因阳性。与文献报道比较,所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%。所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30.0%。rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔产生双扩散效价为1∶4的抗体。92.6%菌株(101/109)可表达CagA,88.1%患者(96/109)血清CagA抗体阳性。消化性溃疡标本中CagA+Hp菌株分离阳性率(97.9%)高于胃炎标本(88.5%),但无统计学差异(χ2=3.48,P>0.05)。
王媛罗依惠严杰
关键词：CAGA基因
幽门螺杆菌napA基因原核表达系统构建及其表达产物的免疫性和致炎作用被引量：6
2005年
目的　构建幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)napA基因的原核表达系统 ,了解表达产物rNAPA免疫性和致炎作用。方法　采用PCR从Hp临床菌株Y0 6株DNA中扩增napA全长基因片段 ,T A克隆后测序 ,构建napA基因原核表达系统pET32a napA E .coliBL2 1DE3。采用SDS PAGE估计不同浓度IPTG诱导下rNAPA表达产量 ,Ni NTA亲和层析收集rNAPA。采用Westernblot和免疫扩散试验鉴定rNAPA的免疫性。采用ELISA分别检测 1 0 9株Hp临床菌株NAP(neutrophil activatingprotein)表达、1 2 5例Hp感染者血清中NAP抗体和rNAPA诱导人脐静脉内皮EVC 30 4细胞分泌IL 1、IL 8、TNF α和ICAM 1的作用。结果　所克隆的napA基因与报道的相应核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 94 .8%和 96 .9%。所构建的napA基因原核表达系统rNAPA表达量高达细菌总蛋白的 5 0 %以上。Hp全菌抗体商品 (DAKO)能识别rNAPA并与之结合 ,rNAPA兔抗血清的免疫扩散试验效价为 1∶8。 95 .4 %Hp临床菌株 (1 0 4 1 0 9)表达NAP ,92 .8%Hp感染者 (1 1 6 1 2 5 )血清中存在rNAPA抗体。 1～1 0 μg的rNAPA均可诱导人脐静脉内皮细胞株EVC 30 4IL 1、IL 8、TNF α和ICAM 1的分泌明显增加 (P<0 .0 5～ 0 .0 1 )。结论　成功地从Hp临床菌株Y0
王媛严杰毛亚飞
关键词：幽门螺杆菌致炎作用免疫性基因原核表达临床菌株序列同源性
ltB-ureB融合基因原核表达系统的构建及其产物免疫性和佐剂活性的鉴定
2005年
构建lt B- ure B融合基因原核表达系统并对其表达产物的免疫性和佐剂活性进行鉴定.采用PCR和T- A克隆法从幽门螺杆菌(H elicobacter pylori,Hp)临床菌株Y0 6和大肠杆菌4 4 85 1株DNA中获得了ure B和lt B全长基因扩增片段及其克隆,并构建了lt B- ure B融合基因及其原核表达系统p ET32 a- lt B- ure B- E.coli BL2 1DE3.在E.coli BL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达,并用Hp全菌抗体的Western blot、EL ISA以及GM1 -EL ISA分别证实了目的重组蛋白(r L TB- Ure B)的免疫性和佐剂活性.与报道的相关序列比较,所克隆的ure B和lt B核苷酸序列同源性分别为96 .88%～97.82 %和99.12 %～99.71% ,氨基酸序列同源性为99.6 5 %～99.82 %和97.5 8%～99.19% . 0 .1～1.0 mm ol/ L 的IPTG均能有效地诱导目的重组蛋白r L TB- Ure B的表达,该蛋白主要以包涵体形式存在,其产量约为细菌总蛋白的35 % .Western blot结果证实r L TB- U re B不仅能与商品化的Hp全菌抗体结合,免疫家兔后也能产生特异性抗体,表明r L TB- U re B有良好的免疫反应性及抗原性.GM1 - EL ISA结果显示r L TB- Ure B能与牛GM1 结合,表明r L TB- Ure B有佐剂活性.以兔抗r L TB- U re B为一抗,发现所检测的10 9株Hp临床分离菌株均表达Ure B;以r L TB- U re B为包被抗原,发现所检测的12 5例Hp感染者血清中均存在U re B抗体;表明U re B广泛存在于不同的Hp菌株中,并有很强的抗原性,也提示r L TB- Ure B确有自然表达U re B的抗原特异性.本文成功地构建了L TB- Ure B融合基因原核高效表达系统,所表达的L TB- U re B融合蛋白有良好的免疫性和佐剂活性,为Hp基因工程疫苗的产业化奠定了坚实的基础.
王媛严杰
关键词：幽门螺杆菌大肠杆菌LTB基因融合基因
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