冯博
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：同济医科大学实验医学研究中心更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用核酸外切酶Ⅲ体外缺失法构建PTLIL-2△n系列缺失质粒被引量：3
- 1992年
- PTLIL-2是一个含有人白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)cDNA克隆的细菌质粒,含有该质粒的宿主菌虽然表达IL-2,但表达效率不理想。我们利用核酸外切酶在Ⅲ(exonucleaseⅢ,ExoⅢ),采用两种不同的方法,缺失IL-2 cDNA 3′端非编码顺序,获得了含有IL-2片段长度不同的系列缺失质粒PTLIL-2△n;并从中筛选出数个较高效表达IL-2的质粒。该两法简便易行,在基因工程领域中有一定推广价值。
- 张大军冯博皇甫永穆陈兆聪李东
- 关键词：基因缺失白细胞介素基因工程
- 双Tac启动子的构建及其对人白细胞介素2在大肠杆菌中表达的影响被引量：3
- 1993年
- 采用基因工程技术,在表达质粒 PTLIL-2中于人白细胞介素 2(interleukin 2,IL-2)cD-NA 片段前插入了来自质粒PDR540的含Tac 启动子的片段,并适当调整SD 序列与ATG 密码之间的距离,构建成含双Tac 启动子和双SD 序列的质粒 PTLIL-2DT。结果该重组质粒的IL-2 基因在大肠杆菌中表达效率提高了4倍。本文对重组 IL-2抽提和生物活性恢复的处理方法也作了探讨。
- 张大军冯博皇甫永穆
- 关键词：操纵子白细胞介素2基因表达
- 大肠杆菌JM1O3温度敏感突变型的分离及其对质粒拷贝数的影响被引量：1
- 1994年
- 通过紫外线诱变，得到32个在42℃不能生长的E.coliJM103温度敏感突变子。用PDTAIL-2△质粒转化16个突变菌株，分别得到16个不同的转化株。当从30℃转到42℃时，突变子和转化子均停止生长，而野生型则能继续生长。比较不同转化子在30℃和42℃培养条件下所携带质粒的拷贝数表明：16株中有6株质粒拷贝数提高5倍以上。本结果在DNA重组中有一定的应用价值。
- 李萍冯博李东王光惠皇甫永穆
- 关键词：大肠杆菌诱变性试验质粒
- 人白细胞介素2基因在大肠杆菌中表达水平的提高及产物初步纯化被引量：2
- 1994年
- 利用双Tac启动子和改造后的人白细胞介素2（IL－2）cDNA，提高了IL－2在大肠杆菌（E．Coli）中的表达水平，并经包涵体制备、分子重新折叠及分子筛层析等技术，对表达的IL－2进行了提取、活性恢复与纯化，纯度可达95％。本工作为用基因工程方法生产人IL－2积累了经验。
- 冯博王光惠李萍张大军李东皇甫永穆
- 关键词：基因表达大肠杆菌白细胞介素2
- 5-氟尿嘧啶及其与甲酰四氢叶酸合并用药对7402肝癌细胞株N-ras癌基因表达的影响被引量：1
- 1997年
- 为了探讨5－氟尿嘧啶（5-Fu）和5-Fu合并甲酰四氢叶酸（FH4）用药对7402肝癌细胞N-ras癌基因表达的影响。采用了异硫氰酸胍法从加有5-FU和5-FU与FH4。合用的7402肝癌细胞中分别提取总RNA，应用缺口平移法，用[α-(32)P]-dATP，dCTP标记N-ras癌基因DNA探针，与各实验组提取的7402肝癌细胞RNA进行斑点杂交。结果显示：单独使用5-FU，杂交斑点明显变小。5-Fu与FH4合并使用，杂交斑点完全消失。表明5-Fu可以明显抑制7402肝癌细胞N-ras癌基因的表达。5-Fu与FH4联合使用，其抑制效果更为明显。实验提示N-rasRNA降低并不是细胞毒作用而是药物对细胞DNA合成抑制的结果。
- 梁驹卿李东周火明冯博皇甫永穆
- 关键词：5-氟尿嘧啶甲酰四氢叶酸N-RAS癌基因
