张悦
- 作品数：24 被引量：40H指数：4
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 红细胞携氧促进多层平板型生物反应器中肝细胞氧供被引量：4
- 2010年
- 目的生物人工肝作为肝功能衰竭的一种有效支持手段，近年来得到不断的改进，如何解决反应器中的氧供问题成为目前人们研究的焦点。本研究拟通过在循环培养液中加入红细胞为这一问题提供可能的解决方案。方法将新鲜分离的原代猪肝细胞接种于笔者自主构建的新型生物反应器内。实验分为两组，对照组在反应器内仅加入RPMI1640培养液直接循环；实验组在培养液中同时加入猪红细胞（2．5×10^11／L）进行循环，两组循环液均经过膜肺进行氧合。采用血气分析仪检测反垃器中氧耗情况，同时检测反应器中葡萄糖消耗及肝细胞的功能表达。结果实验组反应器中肝细胞氧耗率为对照组的1．5倍，葡萄糖消耗为对照组的2倍。同时，实验组肝细胞的白蛋白分泌及尿素合成各项功能均明显高于对照组。结论在培养液中加入红细胞能显著改善反应器中肝细胞的氧供，从而提高反应器中细胞的葡萄糖代谢及各种肝特异功能的表达。该方法简便易行，效果明显，有望成为解决反应器中氧供的有效手段。
- 褚薛慧施晓雷顾劲扬许海云张悦丁义涛
- 关键词：生物人工肝氧供红细胞肝细胞
- IL-6在猪肝细胞与骨髓间充质干细胞共培养中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的探索IL-6在猪肝细胞与骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）体外共培养中的作用。方法自中华实验猪髂前上棘抽取骨髓（3只），采用密度梯度离心法分离单个核细胞，贴壁传代培养至第3代；原位两步胶原酶法分离猪肝细胞后与MSCs按照2：1比例使用Millicell小室培养，检测共培养中肝细胞功能，观察IL-6、TNF—α、TGF-α的分泌水平变化。结果肝细胞活率〉95％：共培养组肝细胞自蛋白分泌水平和尿素合成能力均显著高于单纯肝细胞组（P〈0．05）．共培养组IL-6浓度显著高于对照组（P〈0．01）。中和IL-6后共培养体系白蛋白、尿素合成水平明显下降（P〈0．01）：结论MSCs通过分泌IL-6改善共培养体系中肝细胞功能：
- 顾劲扬施晓雷张悦丁义涛
- 关键词：白细胞介素6间质干细胞肝细胞
- 新型生物人工肝系统安全性的实验研究被引量：4
- 2012年
- 目的对本研究所构建新型生物人工肝体外支持系统（BAL）应用中，猪内源性逆转录病毒（PERV）的安全性进行验证。方法正常比格犬接受新型BAL治疗6h，定时收集BAL系统中的血浆及比格犬的全血。提取外周血单核细胞（PBMCs）和血浆中的DNA和RNA进行PCR和RT-PCR检测PERV和猪细胞色素B序列。检测血浆中的逆转录酶（RT）活性以及血浆的体外感染能力。结果比格犬治疗期间均体征平稳并生存至治疗后6个月。仅在BAL内含反应器的循环3中查出PERVRNA和RT活性阳性，包括PBMCs和其他血浆在内的其余样本均未见PERVRNA，PERVDNA和RT活性。在体外感染实验中并无HEK293细胞感染病毒。结论新型BAL并不会导致PERV传播。
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- 关键词：内源性逆转录病毒肝细胞骨髓祖代细胞
- 需求导向宣教联合支持性心理疗法在老年2型糖尿病患者中的应用
- 2024年
- 观察需求导向宣教联合支持性心理疗法在老年2型糖尿病患者中的应用效果。方法 选择2021年1月至2022年12月于我院治疗的2型糖尿病老年病例60例为观察样本,以随机数字表法将60例2型糖尿病老年病例分为30例试验组以及30例对照组,对照组按2型糖尿病常规式护理法提供照护服务,试验组接受需求导向宣教结合支持性心理疗法干预,对两组干预后疾病自我管理评分、不良心境评分以及血糖控制数据等各观察指标进行比较。结果 试验组2型糖尿病老年病例自我管理评分高于对照组,心境测评指标与血糖控制测评指标优于对照组,(P<0.05)。结论 将震求导向宣教与支持性心理疗法联用于老年2型糖尿病病例之中,利于其疾病自我管理水准的上升、不良心境的改善以及血糖控制结局的优化,可考虑于2型糖尿病老年病例血糖控制及心理干预领域施行推广应用。
- 张悦
- 关键词：2型糖尿病老年
- 猪内源性逆转录病毒透过生物人工肝的影响因素被引量：3
- 2012年
- 目的病毒安全性是猪源性生物人工肝（BAL）不可忽略的安全问题。本研究旨在探讨影响BAL中猪内源性逆转录病毒（PERV）透过的因素。方法构建双循环的新型猪源性BAL。两循环间采用膜孔径为10nm、20nm、30nm和35nm的血浆成分分离柱以及500nm膜孔径的血浆过滤柱分隔两循环。反应器内填充共培养的猪肝细胞-骨髓间充质肝细胞或原代猪肝细胞并连续循环72h。每12h抽取内、外循环内培养液检测PERVRNA、逆转录酶（RT）活性以及其体外感染性。结果血浆过滤柱组中，内外循环内PERV检测结果完全相同，提示500nm血浆滤过柱对PERV并无阻隔作用。在血浆成分交换柱各组中，各时间点内循环中均能检出RNA和RT活性，但是外循环中并未检出RT活性，而且随着膜孔径减小，RNA的检出时间逐渐延迟，且内循环RNA水平逐渐增加。各培养液均未发现能够体外感染HEK293细胞。结论膜孔径、循环时间以及内循环病毒浓度是影响BAL中PERV透过的主要原因。
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- 关键词：猪内源性逆转录病毒生物人工肝膜孔径
- 肝再生发生及其相关机制的研究进展被引量：1
- 2009年
- 肝脏再生是指因手术、创伤、中毒、感染、坏死等致部分肝细胞功能丧失后，肝细胞重新修复的过程。对于肝再生的发生及其内在机制的认识和研究，大致可分为三个阶段：（1）最初认为可能存在一种特定的激素类物质决定肝再生的过程。（2）随着研究的深入人们又猜测肝再生的过程可能是由一条包括多种因素参与的信号通路决定的。（3）近年来学术界比较一致的观点：肝再生是由多条通路、多种因素共同参与的一种复杂的生理过程。此过程涉及细胞因子、生长因子的大量分泌，细胞外基质的重建以及一些促进或抑制肝再生过程的正负反馈机制。
- 张悦顾劲扬施晓雷丁义涛
- 关键词：肝脏再生关机信号通路细胞外基质肝再生
- 基于纳米支架材料的新型多层平板型生物反应器的构建被引量：3
- 2009年
- 目的为体外生物人工肝支持系统构建一种新型的多层平板型生物人工肝细胞反应器，从而提高反应器中细胞的活性及功能。方法自主设计组装一种新型的多层平板型生物反应器，平板表面采用静电纺丝纺上一层壳聚糖纳米纤维膜，新鲜分离的原代猪肝细胞接种于纳米纤维支架表面，用培养液进行循环式培养。定期检测反应器中细胞的活性及功能，并观察细胞与纳米材料结合情况。结果反应器中的细胞能与纳米支架材料很好的结合，每12h分泌的白蛋白的量维持在100～139ug，尿素合成量为5．11～7．76mg／dl，而氯化铵清除率则保持在44—60umol／h。培养过程中，仅有少量的酶（AST、LDH）漏出。结论初步构建的新型多层平板型生物反应器，符合生物人工肝基本的要求。其内培养的细胞能保持良好的活性，并具有相应的功能。
- 施晓雷褚薛慧顾劲扬许海云张悦丁义涛
- 关键词：生物反应器纳米共培养肝细胞
- 新型多层平板型生物人工肝治疗急性肝功能衰竭犬的疗效被引量：2
- 2011年
- 目的 评价新型多层平板型生物人工肝治疗急性肝功能衰竭动物的疗效.方法 以新鲜猪肝细胞及猪骨髓基质干细胞为细胞来源,共培养于新型多层平板型生物反应器内,从而构建一种新型的生物人工肝.采用D-氨基半乳糖给药方式构建犬急性肝功能衰竭模型,实验组（n=8）给予生物人工肝治疗;对照组（n=8）仅给予一般监护.观察和检测所有动物一般情况、生化指标及生存率.结果 实验组动物经生物人工肝治疗后,肝性脑病及一般精神状况均得到较明显改善,丙氨酸氨基转移酶从（ 1512±183） U/L降至（86±25） U/L;天冬氨酸氨基转移酶从（1472±365） U/L降至（46±1l）U/L;乳酸脱氢酶从（463±76） U/L降至（312±84）U/L;总胆红素从（28.8±6.2） μmol/L降至（12.5±3.6） μmol/L;血氨从（56±15）μmol/L降至（34±10） μmol/L,同时凝血功能及白蛋白水平亦得到改善.8条犬中,5条存活、3条死亡,治疗过程中未出现严重并发症.对照组动物一般情况未见明显改善,各项化验指标呈逐渐加重趋势,最终8条犬中5条死亡,3条存活.但两组生存率的差异无统计学意义（P=0.294）.结论 新型多层平板型生物人工肝对急性肝功能衰竭动物具有显著疗效,是治疗急性肝功能衰竭的一种有效支持手段.
- 施晓雷褚薛慧张悦韩冰顾劲扬肖江强檀家俊丁义涛
- 关键词：肝功能衰竭急性共培养
- 猪骨髓间充质干细胞对共培养肝细胞的作用及其机制被引量：7
- 2009年
- 目的探索细胞外基质（ECM）在猪肝细胞与骨髓间充质干细胞（MSCs）体外共培养中的表达与分布规律。方法自中华实验猪髂前上棘抽取骨髓，采用密度梯度离心法分离单个核细胞，贴壁传代培养至第3代；原位两步胶原酶法分离猪肝细胞后与MSCs随机混合培养，观察肝细胞形态和功能的变化情况。用免疫细胞化学染色法观察ECM的表达和分布情况。RNA干扰MSCs后继续观察共培养肝细胞的功能变化情况。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法。结果第3代MSCs纯度〉90％；肝细胞活率〉95％，纯度〉99％。共培养组肝细胞迅速黏附于MSCs表面，呈肝细胞岛样分布。共培养组肝细胞白蛋白分泌水平和尿素合成能力自共培养第1天起均明显高于单纯肝细胞组（P值均〈0．01），并在第2天达到高峰，分别为（457．71±22．62）ng和（69．05±2．12）μg。免疫细胞化学检测结果显示共培养组MSCs表达多种ECM；RNA干扰实验进一步证实ECM的存在与共培养中肝细胞的白蛋白分泌和尿素合成功能有关。结论骨髓MSCs通过分泌多种ECM改善共培养肝细胞的形态与功能。
- 顾劲扬施晓雷张悦丁义涛
- 关键词：肝细胞骨髓祖代细胞细胞外基质
- 骨髓间充质干细胞维持猪肝细胞形态与功能的实验研究被引量：5
- 2010年
- 目的建立猪肝细胞与骨髓间充质干细胞（MSCs）体外共培养体系，为生物人工肝的构建提供理想细胞来源。方法自中华实验猪（n=3）髂前上棘抽取骨髓，采用密度梯度离心法分离单个核细胞，贴壁传代培养至第3代；原位两步胶原酶法分离猪肝细胞后与MSCs随机混合培养，观察共培养肝细胞形态和功能的变化水平。结果第3代MSCs纯度〉90％，肝细胞活率〉95％，纯度〉99％。共培养组肝细胞迅速黏附于MSCs表面，在三维空间呈球形聚集生长，异质细胞间出现细胞连接，超微结构与正常肝细胞接近。共培养组肝细胞白蛋白分泌水平和尿素合成能力自第1天培养起均显著高于对照组（P〈O．05），并在第2天达到高峰。结论猪肝细胞与MSCs共培养可维持肝细胞形态与功能，使构建功能性生物人工肝成为可能。
- 顾劲扬施晓雷张悦丁义涛
- 关键词：肝功能衰竭猪肝细胞骨髓间充质干细胞共培养
