张静
- 作品数：14 被引量：63H指数：5
- 供职机构：四川农业大学林学院更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划四川省教育厅重点项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一株内生拮抗细菌的分离鉴定及其抗菌机理研究被引量：19
- 2016年
- 本研究通过平板稀释法、平板对峙法从核桃根部皮层筛选出一株对核桃根腐病有拮抗作用的内生菌株1A,通过形态特征测定、理化特性分析和16SrDNA序列分析鉴定该菌为芽胞杆菌(Bacillus sp.),GenBank序列登录号为KJ865856;其抑菌特性研究结果表明:该拮抗菌对核桃根腐病菌有显著的抑制效果,抑菌率达63.33%;此外,该菌对板栗疫病菌等几种不同的林木病原菌均有较强的抑制作用。抗生机理研究结果表明,该菌株通过分泌蛋白酶和纤维素酶降解真菌细胞壁中蛋白质和纤维素,破坏病菌菌丝,病菌生长受到抑制。该拮抗菌能够显著抑制核桃根腐病菌菌丝生长和孢子萌发,孢子萌发抑制率达74.89%,病菌菌丝表现为菌丝扭曲、断裂,分支增多并缠绕,菌丝颜色加深等。盆栽生防效果研究显示,该拮抗菌对各组核桃根腐病具有显著的防治效果,采用该拮抗菌预处理具有相对较好的生防效果。
- 刘洋朱天辉郑磊张静兰浩洋郭志斌
- 关键词：内生细菌芽胞杆菌抗菌机理
- 基于ITS与factor1-alpha序列桉树焦枯病菌的双重PCR快速检测被引量：3
- 2015年
- 桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病的PCR快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段。试验以桉树焦枯病原菌(Calonectria morganii)DNA为模板,分别以ITS和factor 1-alpha序列为靶区域,针对Calonectria属和C.morganii设计了CYS1/CYS2和EF-S-1/EF-A-1两对特异性引物,建立了基于属和种的双重PCR快速检测技术。利用引物CYS1/CYS2可以从全部Calonectria属的供试菌株中扩增出一条351bp大小的条带,单独用特异性引物EF-S-1/EF-A-1进行PCR扩增,仅病原菌扩增出197bp的条带,同时使用2对引物时,病原菌可扩增出两条明亮条带。当体系退火温度为53℃时,DNA灵敏度检测限度达到450fg/μL。野外田间时效检测结果显示,该体系能准确检测出不同发病程度桉树组织上的病原菌,完全符合田间检测的要求。这是关于桉树焦枯病快速检测的首次报道。
- 张静麻文建朱天辉
- 关键词：桉树焦枯病PCR扩增
- 绛红褐链霉菌的根际定殖能力动态监测被引量：2
- 2015年
- 腐皮镰刀菌(Fusarium solani)是铁核桃(Juglans sigllata Dode)根腐病的重要致病菌,绛红褐链霉菌YSSPG3(Streptomyces purpeofuscus)对其具有较强的拮抗作用。为了监测该生防菌在根际土壤中的定殖动态及在其作用下病原菌(F.solani)的动态变化,以盆栽铁核桃为研究对象,研究了S.purpeofuscus对接种F.solani植株的生防效果,并用实时荧光定量PCR技术分别对生防菌S.purpeofuscus和病原菌F.solani在铁核桃根际土壤中动态变化进行研究。结果表明,S.purpeofuscus对病原菌F.solani有较为明显的生防效果。监测结果表明:接种短期内S.purpeofuscus迅速生长繁殖,20 d其相对表达量达到最高值,随后呈下降趋势,40 d后趋于稳定;接种S.purpeofuscus后,F.solani的相对生长量显著下降,60 d时降低了11 500%,进一步表明S.purpeofuscus对F.solani生防效果显著,可以作为铁核桃根腐病的前景生防菌。
- 谯天敏郑磊张静朱天辉陈慧
- 关键词：实时荧光定量PCR定殖能力生物防治
- 桉树焦枯病菌巢式聚合酶链反应快速检测方法的建立与应用
- 2015年
- 桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段。本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(beta-tubulin)基因上保守序列极强的靶基因区域序列进行特异性引物BT-S-1/BTA-1的设计和通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A的合成,分别利用常规PCR和巢式PCR技术对引物特异性和灵敏度进行检测和比较,同时本研究也对所建立的巢式PCR用于桉树焦枯病原菌快速检测的田间时效性进行验证。试验结果表明:利用beta-tubulin基因序列通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A对全部供试菌株进行扩增,所有参试菌株均可扩增出1条约500bp的条带;而单独使用特异性引物BT-S-1/BT-A-1进行常规PCR扩增时仅病原菌能够扩增出1条148bp的明亮条带;当利用通用引物作为第1轮引物,以稀释10倍后的第1轮PCR产物作为第2轮PCR模板,利用特异性引物进行巢式PCR扩增时,也可扩增出上述148bp大小的明亮条带,且巢式PCR的扩增效果较常规PCR具有明显的视觉优越性;灵敏度检测试验表明,巢式PCR的灵敏度可检测到5fg/μL,较常规PCR可以扩增出的极限(DNA质量浓度为5pg/μL)至少提高了103倍;田间时效检测试验也说明巢式PCR较常规PCR具有更高的准确度和灵敏性,可达到田间检测的要求。本研究建立的巢式PCR检测技术可有效应用于桉树焦枯病的早期诊断。
- 谯天敏张静麻文建朱天辉郑磊
- 关键词：巢式聚合酶链反应桉树焦枯病
- 铜绿假单胞菌与长枝木霉对杂交竹梢枯病的协同增效生防研究被引量：8
- 2015年
- 铜绿假单胞菌和长枝木霉均对杂交竹梢枯病菌具有明显的拮抗作用。通过室内抗生素、紫外诱变和杀菌剂胁迫培养,获得铜绿假单胞菌和长枝木霉突变菌株,此突变体在形态特征、平板抑菌活性上与原始菌株差异不显著,且具有长期稳定的抗药性。田间喷施突变菌株菌悬液或孢子悬液可以使其成功定殖到杂交竹叶表面。铜绿假单胞菌和长枝木霉的亲和性研究显示,二者浓度低于108cfum L,均无明显抑制作用,具有高度亲和性,这有利于2菌株在杂交竹梢枯病生物防治中协同作用的发挥。利用铜绿假单胞菌悬液和长枝木霉孢悬液进行梢枯病菌田间协同防治试验,结果表明:预先接种拮抗菌防效最高,其次是同时接种,后施拮抗菌防效最低,说明铜绿假单胞菌和长枝木霉均有良好的防病作用。另外,2菌株的联合使用在3种处理中防效均最优,尤其是在先接种病原菌的处理中,协同防效得到很大提高,说明二者联合使用有良好的梢枯病治理作用。
- 谯天敏张静朱天辉
- 关键词：铜绿假单胞菌梢枯病生物防治
- 铜绿假单胞菌发酵条件优化及抗菌物质研究被引量：9
- 2014年
- 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)及其代谢产物对撑×绿杂交竹梢枯病病原菌暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum(Corda)M.B.Elli)具有较好的拮抗作用。采用单因素试验和正交试验对铜绿假单胞菌的培养基和发酵条件进行优化,并对其产生的抑菌活性物质的特性进行了初步研究。结果显示:优化培养基配方为蔗糖5 g,蛋白胨10 g,氯化钠2.5 g,水1 000 mL;最佳发酵条件为温度25℃,初始pH7.5,接种量1 mL,瓶装量150 mL于300 mL三角瓶中,发酵时间60 h。粗活性物质检测试验表明:其分子质量小于1 000 u;代谢产物中大分子蛋白质的生物活性远远低于小分子非蛋白成分;该菌粗提物中具有生物活性的成分大多是极性较小的物质,且在有机溶剂中溶解性较好,三氯甲烷为最佳萃取剂。
- 谯天敏张静赵芳朱天辉
- 关键词：铜绿假单胞菌抗菌物质发酵条件
- 双重PCR检测板栗疫病菌的研究
- 2015年
- 由板栗疫病菌(Cyphonectria parasitica)引起的板栗疫病是板栗栽培区的主要病害,也是全国林业危险性有害生物。为建立C.parasitica的快速分子检测技术,根据C.parasitica与Gen Bank中同属其他物种的ITS序列差异设计了引物CP1/CP2,扩增了大小为285 bp的目的片段。进一步用RAPD技术从供试菌株中标记出C.parasitica的特异性片段,通过对RAPD特异片段克隆、测序后设计引物SC1/SC2,扩增的目的片段大小为389bp,实现了RAPD标记向SCAR标记的成功转化。采用引物对组合方式将引物CP1/CP2和SC1/SC2组成双重PCR,优化PCR反应条件并检测引物的特异性和灵敏度。双重PCR能从C.parasitica扩增出285 bp和389 bp的两条特异条带,而其他供试菌株及阴性对照均无条带,检测灵敏度达到300 fg/μL的基因组DNA。利用双重PCR能成功检测出自然条件下已发病板栗及处于潜伏期病害中的C.parasitica。
- 麻文建张静郑磊朱天辉
- 关键词：板栗疫病菌分子检测双重PCRITSSCAR标记
- 铜绿假单胞菌抗菌色素的结构鉴定及稳定性检测被引量：1
- 2015年
- 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）产生的拮抗物质对撑×绿杂交竹梢枯病病原菌具有明显的抑制作用。铜绿假单胞菌发酵液预处理后,采用三氯甲烷萃取得到活性粗提物,后经硅胶柱色谱分离及紫外洗脱检测,得到抑菌活性最强的黄色油状活性物质。经核磁共振和红外光谱检测,得出该活性物质是一种有芳香环的吩嗪类化合物,化学式为C14H10O2N2。色素稳定性的研究表明,光照、温度对活性色素的稳定性影响甚微;低浓度的氧化剂和还原剂对活性色素的稳定性影响较小,高浓度对其影响较大;色素在偏中性或碱性条件下（p H7~8）活性最大,当p H≤3时,色素性质不稳定,抑菌活性几近消失;金属离子对色素稳定性有不同程度的影响,其中Na＋、K＋、Ba2＋、Ca2＋、Ag＋对色素的影响较小,Mg2＋、Zn2＋、Ni2＋、EDTA-Na2对色素稳定性有较大的影响,而Al3＋、Cu2＋、Fe3＋、Pb2＋对色素活性影响很大,色素几乎失去活性。
- 谯天敏张静赵芳朱天辉
- 关键词：铜绿假单胞菌拮抗物质色素稳定性
- 腐皮镰刀菌对不同品种核桃抗性生理指标的影响被引量：5
- 2016年
- 为分析腐皮镰刀菌(Fusarium solani)引起的核桃根腐病对寄主抗性生理指标的影响,该研究以铁核桃、绵阳早熟、新疆2号3个核桃品种为材料,研究各品种受腐皮镰刀菌侵染后,不同时期的发病情况以及丙二醛(MDA)、可溶性糖含量以及过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的动态变化。结果表明:接种病原菌50 d后,铁核桃100%发病,属高感品种,绵阳早熟和新疆2号发病率分别为23.33%和16.67%,属抗病品种;在50 d监测范围内,各品种对照组各项叶部生理指标仅出现上下波动且差异不显著;然而,各品种核桃接入腐皮镰刀菌后,可溶性糖含量随时间迅速下降,MDA含量和POD活性总体表现为先上升趋势,SOD、PPO活性总体则表现为先上升后下降的变化趋势,并且5个指标品种间差异显著,而CAT活性变化无规律。相关性分析表明,可溶性糖、MDA含量、SOD、POD、PPO活性可以作为核桃品种抗性评价指标。该研究结果为深入研究由腐皮镰刀菌引起的核桃根腐病发病机制以及通过诱导等措施提高其抗性的研究提供了理论基础。
- 郑磊张静麻文建彭燕朱天辉
- 关键词：根腐病核桃抗性生理指标
- 一种快速检测桉树焦枯病菌(Cylindrocladium scoparium)的LAMP体系的建立及应用被引量：4
- 2015年
- 【目的】建立桉树焦枯病快速有效的环介导等温扩增反应LAMP检测技术。【方法】以桉树焦枯病原菌Cylindrocladium scoparium为研究对象,利用Primer Explorer V4.0设计软件,针对C.scoparium的Beta-tubulin gene特异保守区域设计了一套LAMP特异性引物组(内引物FIP/BIP,外引物F3/B3,环引物Loo PF/Loo PB),优化并建立了桉树焦枯病原菌的LAMP快速检测体系。【结果】LAMP反应体系为(50μL):Bst DNA polymerase(8 U)1μL;甜菜碱溶液(5 mol/L)3.0μL;d NTPs(2.5 mmol/L)3.5μL;10×ThermopolⅡ2.5μL;Mg Cl2(100 mmol/L)2μL;FIP/BIP(40μmol/L)各1μL;F3/B3(10μmol/L)各0.5μL;Loo PF/Loo PB(10μmol/L)各1μL;DNA模板2μL;用dd H2O补足体积至50μL。反应程序为:65°C水浴锅中反应45 min,90°C灭活5 min结束反应。特异性检测结果显示,供试的12个样本菌株LAMP产物可以采用肉眼观察、紫外灯照射、添加荧光染料SYBR Green I以及电泳检测条带4种不同的形式予以区分。DNA灵敏度检测结果显示,建立的LAMP体系检测灵敏度可达到40μg/L,完全符合田间检测的要求。野外田间时效检测结果显示,无论是利用紫外检测还是电泳检测均可成功地检测出各地区不同生理小种的桉树焦枯病原菌C.scoparium,且检测效果明显。【结论】该LAMP检测是一项能够作为野外基层田间检测的重要技术。
- 张静麻文建朱天辉
- 关键词：桉树
