李斌
- 作品数：12 被引量：25H指数：3
- 供职机构：第三军医大学基础部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗人Endoglin胞外段单链抗体噬菌体表面呈现文库的构建/筛选及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建抗人Endoglin胞外段的特异性单链抗体(single chain variable fragment,scFv)噬菌体表面呈现文库。方法用重组人Endoglin(recombinant human Endoglin,rhEndoglin)胞外段蛋白免疫Balb/c小鼠,提取脾脏组织mRNA,经RT-PCR分别扩增出VH(heavy chain variable region)、VL(light chain variable region)基因,经Linker连接成scFv基因,再把scFv基因重组到噬菌粒载体pCANTAB5E,转化到大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7拯救后建成噬菌体呈现文库。用rhEndoglin对文库进行5轮吸附-洗脱-富集panning淘筛,选择ELISA结果最强的克隆提取质粒并测序。结果经过筛选,随机挑取94个克隆进行ELISA检测,37个克隆呈阳性。序列分析表明,该scFv DNA全长738bp。其中VH基因366bp,编码122个氨基酸残基,VL基因327bp,编码109个氨基酸残基,它们之间通过(Gly4Ser)3组成的15肽连接。结论成功构建了抗人Endoglin胞外段scFv噬菌体表面呈现文库,并筛选获得一个能与Endoglin特异结合的重组噬菌体克隆。
- 赵泽文梁志清史常旭常青李军李斌
- 关键词：ENDOGLIN单链抗体
- 双氢青蒿素对CpG ODN诱导小鼠RAW264.7细胞释放细胞因子的影响被引量：4
- 2005年
- 目的:观察双氢青蒿素对CpG ODN诱导小鼠RAW 264.7细胞释放细胞因子的影响。方法:体外培养小鼠RAW 264.7细胞,用CpG ODN刺激小鼠RAW 264.7细胞分泌TNF-α、IL-6,用不同浓度双氢青蒿素进行拮抗,ELISA法检测培养上清中促炎细胞因子的含量。结果:双氢青蒿素可抑制CpG ODN刺激小鼠RAW 264.7细胞释放TNF-α和IL-6,并呈一定的量效关系,其中对IL-6最大抑制率可达到66.5%,而对TNF-α释放的最大抑制率仅为7.2%,其影响细胞因子释放的作用与细胞毒作用无关。结论:双氢青蒿素呈浓度依赖性地抑制CpG ODN刺激小鼠RAW 264.7细胞释放TNF-α和IL-6,但对TNF-α的影响较小。
- 李斌张乐之王俊郑江余双江罗平周红
- 关键词：双氢青蒿素细胞因子RAW264.7细胞细胞释放小鼠
- 综合教学方法的实施与效果的初步分析被引量：1
- 2004年
- 周红陈晓红张乐之李斌李福涛
- 关键词：教学方法教育目标医学教育
- MRSA临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆、表达及鉴定
- 目的对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的 mecA 基因片段进行克隆、表达。方法从临床上分离鉴定出 MRSA,根据基因文库收录的 mecA 基因的编码序列,针对编码 PB...
- 董燕丁国富李斌和生琦颜伟周红王仙园
- 文献传递
- 青蒿素合用氨苄西林对活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用
- 周红张乐之王俊郑江刘玮程娟李斌鲁永玲王良喜罗平
- 青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用被引量：5
- 2007年
- 目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,培养体系中预先加入不同浓度AS2h后,观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果:AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由100%降低至50%(P<0.05)。预先加入的AS能明显抑制热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论:AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。
- 张蓉李斌张乐之李军丁国富和生琦罗平周红
- 关键词：青蒿琥酯小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-6
- 青蒿琥酯通过降低TLR4和TLR9 mRNA表达保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠
- 目的：观察抗疟药青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠的保护作用,探讨其保护作用可能的机制。方法：采用热灭活大肠杆菌建立脓毒症小鼠模型,观察青蒿琥酯对小鼠生存率的影响;采用 ELISA 法和鲎试剂动态浊度法在体研究青蒿琥酯对脓毒症小鼠...
- 李斌周红
- 文献传递
- 甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆表达及鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的 应用基因重组技术对编码甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株青霉素结合蛋白2a（PBP2a）的mecA基因片段进行克隆、表达。方法 从临床样本巾分离鉴定出MRSA，根据基因文库收录的mecA基因编码序列，针对编码PBP2a第25～668位氨基酸的mecA基因片段设计引物，扩增目的基因片段，克隆至pQE30载体，经酶切鉴定、测序后，再转化E．coliM15（pREP4）。采用1mmol／L的异丙硫半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达及鉴定。结果重组表达质粒pQE30-mecA构建成功，基因测序结果显示，扩增的mecA基因DNA片段全长为1932bp，其巾有9个碱基突变。IPTG诱导后6h，聚丙烯酰胺凝胶电泳显示，M15（pQE30-mecA）出现一条相对分子质量约74×10^3的蛋白条带，且一部分以可溶性形式存在；M15（pQE30）未出现特异性蛋白条带。经诱导表达和鉴定证实，表达出的可溶性目的蛋白为PBP2a。结论 利用本技术可成功表达MRSA临床分离株中的可溶性PBP2a。
- 董燕丁国富李斌和生琦颜伟周红王仙园
- 关键词：基因表达甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌
- 青蒿素防治细菌脓毒症的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的 革兰阴性菌细胞外膜成分脂多糖／内毒素（Ljpopolysaccharide／endotoxin）和存在于革兰阴性、阳性细菌的基因组DNA（CpGDNA）是导致细菌脓毒症发生的主要致炎因子：但细菌脓毒症仍缺乏有效的治疗措施。本课题旨在明确青蒿素防治细菌脓毒症的作用及机制，为青蒿素的老药新用提供实验依据？方法①体外培养小鼠RAW264，7细胞，观察青蒿素对CpGDNA、LPS和热灭活大肠杆菌诱导RAW264．7细胞释放TNF—α和IL-6的抑制作用；②建立小鼠脓毒症模型，观察青蒿素对CpGDNA、LPS和热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用；
- 周红王俊李斌郑江罗平余双江张乐之
- 关键词：细菌脓毒症青蒿素RAW264.7CPGDNA革兰阴性菌大肠杆菌
- 抗人Endoglin胞外段单链抗体的可溶性表达和鉴定
- 2008年
- 目的用E.coli HB 2151表达抗人Endoglin胞外段单链可变区片段(single chain variable fragment,scFv),并鉴定其抗原结合活性,为卵巢癌的体内诊断和治疗研究提供靶向载体分子。方法用呈现scFv抗体的重组噬菌体感染E.coli HB 2151进行抗体的可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定可溶性scFv的表达,竞争性ELISA检测可溶性scFv的抗原结合活性。结果抗人Endoglin胞外段scFv得到了可溶性表达,表达产物主要位于周质腔中,其分子量约为29kD。该周质提取物中scFv能与抗Endoglin单克隆抗体竞争性结合同一抗原表位,且竞争作用随scFv浓度增加而加强。结论用E.coliHB2151成功表达了具有抗原结合活性的抗人Endoglin胞外段scFv,为其应用研究奠定了基础。
- 赵泽文史常旭梁志清常青李军李斌
- 关键词：ENDOGLIN单链抗体噬菌体
