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欧洲山杨一号染色体显微分离、原位杂交分析及特异文库的构建被引量：11: 2006年; 以欧洲山杨（Populus tremula）根尖细胞为材料，采用玻璃针分离法，通过显微操作器成功地分离出一号染色体。将分离到的单条染色体去蛋白、Sau3A酶切，并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头，进行两轮PCR扩增，得到了200～3000bp的DNA扩增片段。以DIG-dUTP标记的欧洲山杨基因组DNA为探针进行Southern杂交，结果表明显微分离出的染色体扩增片段与欧洲山杨基因组DNA同源，从而证明一号染色体DNA确实已被成功地扩增。以一号染色体第2轮PCR产物为探针进行荧光原位杂交，发现荧光信号较密集的分布于一号染色体，但同时荧光信号也出现在其它染色体的着丝粒及端粒区域。对第2轮PCR产物进行克隆，构建单条染色体DNA文库，经分析，该微克隆文库包含约3×10^5个重组子。随机挑选160个重组子进行鉴定，证明该文库的插入片段主要介于230～2200bp之间，平均800bp。该文库的构建为欧洲山杨1号染色体特异探针的筛选、遗传图谱的构建、重要基因的克隆等研究奠定了基础。; 张守攻张勇刘博李秀兰宋文芹韩素英齐力旺; 关键词：欧洲山杨染色体显微分离荧光原位杂交

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张勇