国家重点基础研究发展计划(2011CB505003)
- 作品数：14 被引量：53H指数：4
- 相关作者：刘秀梵彭大新张文俊张妍李群辉更多>>
- 相关机构：扬州大学徐州生物工程职业技术学院江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 神经氨酸酶、碱性聚合酶2及非结构蛋白1影响A型流感病毒致病力的分子机制研究进展被引量：1
- 2011年
- 随着研究的不断深入,血凝素(HA)之外的其他蛋白在影响A型流感病毒的致病力甚至宿主特异性方面的重要作用逐渐受到关注。本文对神经氨酸酶(NA)、碱性聚合酶2(PB2)及非结构蛋白1(NS1)的相关进展作了综述,以期进一步阐明流感病毒的致病分子基础,并藉此探讨可能的宿主范围限定因素。
- 顾敏彭大新刘秀梵
- 关键词：NANS1致病力宿主范围
- 稳定表达人Siat7e基因的MDCK细胞系的建立和全悬浮细胞的驯化被引量：1
- 2011年
- 目的:现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求,有必要开发全悬浮培养的细胞系来满足大生产的需求。方法:我们通过转染稳定表达Siat7e基因的真核表达载体对MDCK细胞进行改造,并经过后期的驯化,筛选适应于全悬浮培养的MDCK细胞。结果:成功筛选到能稳定表达Siat7e基因并能适应全悬浮生长的细胞系。结论:该细胞系具有潜在的应用价值,为MDCK细胞的培养以及工业化大生产疫苗提供参考。
- 张妍张文俊李群辉刘晓文刘文博刘秀梵
- 关键词：MDCK疫苗生产
- 全球H5N1亚型流感病毒NA和NS基因进化趋势
- 2014年
- 为了探讨全球H5N1亚型流感病毒(IV)NA和NS基因的分子流行病学特点,本文从NCBI下载1996-2013年全球H5N1 IV的NA、NS基因序列并进行进化分析。结果显示NA和NS双基因部分缺失株在H5N1亚型IV中占有绝对的优势,NA和NS基因部分缺失能显著影响毒株间的遗传距离,2010年后分离的H5N1亚型IV的NA基因优势流行基因型是Group-6 like,NS基因优势流行基因型为Group-2 like。
- 李彦芳张治业宋庆庆顾敏陈素娟彭大新刘秀梵
- 关键词：H5N1亚型流感病毒NA基因NS基因
- Clade2．3．2H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建被引量：3
- 2012年
- 近年来Clade2.3.2H5N1亚型的禽流感病毒逐渐成为我国及越南等其他一些国家流行的优势毒株,并呈现出一定变化规律的氨基酸进化趋势。本研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV为内部基因供体,以Clade2.3.2H5N1亚型AIV A/chicken/Yangzhou/1117/2011(YZC3)为表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因供体,通过反向遗传操作,在符合人类疫苗生产标准的COS-1细胞中救获低致病性的疫苗毒株。结果成功拯救出1株重组病毒rYZC3,该病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,对SPF鸡和鸡胚无致病性。本研究为防控当代流行的H5亚型禽流感提供了良好的疫苗候选株。
- 张妍张文俊李群辉刘晓文刘文博刘秀梵
- 关键词：H5亚型禽流感病毒
- H5N1亚型禽流感病毒进化的研究进展被引量：2
- 2013年
- H5N1亚型禽流感病毒是重要的人兽共患病病原,其基因组为分节段的负股单链RNA,这种特殊的基因组结构使得流感病毒的进化机制跟其他病毒有所不同。本文对流感病毒的进化机制、H5N1亚型禽流感病毒的进化规律和生物信息学在流感病毒进化中应用等方面的研究进展予以综述。
- 李彦芳彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型进化生物信息学
- 一株鸭源H4N8亚型禽流感病毒的全基因测序及遗传进化分析被引量：8
- 2015年
- 【目的】禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)根据其表面糖蛋白血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸(neuraminidase,NA)的不同,可分为16种HA和9种NA亚型。根据其致病力的差异可分为高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)和低致病性禽流感病毒(low pathogenic avian influenza virus,LPAIV)。虽然H4亚型禽流感病毒为低致病性AIV,感染家禽表现为无症状感染,但其对禽类甚至是哺乳动物是一个潜在的威胁,因此必须要加强对H4亚型禽流感病毒的调查监控。【方法】为了探讨H4亚型禽流感病毒的分子特征及遗传演化规律,对2010年在中国华东地区某活禽市场进行流行病学监测时分离到的一株H4N8亚型禽流感病毒A/duck/Nanjing/1102/2010(简称DK/NJ/1102)进行了全基因组序列测定及遗传进化分析。通过常规的血清学试验确定其HA亚型,提取病毒总RNA,并通过RT-PCR方法分别扩增出其各基因片段,连接p GEM-Teasy载体上后进行序列测定。利用Gen Bank中的BLAST工具进行核苷酸序列的同源性分析,并与Gene Bank中的H4亚型流感病毒及其它相关序列进行遗传进化分析。【结果】DK/NJ/1102的HA基因与Mongolia分离株A/duck/Mongolia/274/2007(H4N3)的核苷酸同源性最高,为98.9%。推导的氨基酸剪切位点序列为"P-E-K-A-S-R-G",符合典型的低致病性禽流感病毒特征;NA基因与华东地区分离的鸭源毒株A/Duck/Eastern China/n91/2009(H3N8)核苷酸同源性最高,达99.4%;PB1、PA和NP基因均与H1亚型禽流感病毒亲缘关系最近;M基因与A/wild duck/Korea/CSM4-12/2009(H5N1)核苷酸同源性最高,高达99.9%;NS基因与韩国2009年分离的H7N7亚型流感病毒遗传距离最近。NS1蛋白的80-84处氨基酸没有发生氨基酸缺失。【结论】该H4N8亚型禽流感病毒基因组构成比较复杂,可能是一株多基因重组病毒。
- 赵晴晴李群辉朱杰钟蕾刘晶晶顾敏王晓泉刘文博刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒遗传进化分析
- 鸭源H5亚型禽流感全禽源分子标记疫苗候选株的构建被引量：3
- 2011年
- 为了开发用于南方水禽且适合血清学监测的H5亚型禽流感疫苗,作者通过反向遗传技术,删除A/mal-lard/Huadong/S/2005(H5N1,S株)病毒HA编码多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,分别与A/duck/Eng-land/1/1956(H11N6,E株)和A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2,F株)的NA组合,再以本室禽源高产病毒F株的6个内部片段为骨架,构建全部基因都来自禽流感的疫苗株。成功拯救出2株重组病毒,分别命名为rH5N6/F和rH5N2/F,并引入分子标记N6和N2。重组病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,且rH5N6/F更适合在鸡胚中生产,对SPF鸡和鸡胚无致病性。重组病毒在clade2.3.4毒株中具有很好的抗原代表性,引入的分子标记有利于血清学监测的区分,为防控水禽H5亚型禽流感提供了良好的疫苗候选株。
- 张文俊薛涛吴小伟唐应华彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒H5
- H5N1亚型禽流感病毒HA糖基化位点缺失突变株的构建及生物学特性被引量：4
- 2013年
- 不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因序列测定和免疫印迹分析证实已成功去除了特定糖基化位点。158位糖基化位点缺失突变株rS△158在鸡胚中的EID50和MDCK细胞上TCID50比野生型rS略低,空斑直径显著减小;而单独去除169位和290位糖基化位点的rS△169和rS△290的EID50和TCID50略高于野生型rS,空斑直径相近,但空斑数要比后者高出10倍以上。所有突变株及野生型病毒在CEF上增殖速率相同,对SPF鸡均是高致病性的。因此,糖基化位点可影响病毒的体外增殖,但结果因细胞而异。
- 张晓剑李彦芳熊丽平陈素娟彭大新刘秀梵
- 关键词：H5N1亚型禽流感HA
- 不同宿主来源H9N2亚型禽流感病毒生物学特性测定
- 引言H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)宿主谱广,除了能给家禽业造成严重的经济损失外,其还能感染猪和人等哺乳动物,是一种重要的人兽共患病。我们在对华东地区禽流感病毒监测时,从鸡和其它宿主体内分离到一种新的H9N2亚型重配病...
- 朱寅彪杨洋刘新杨达孙志豪陈素娟彭大新刘秀梵
- H5亚型禽流感疫苗变异候选株的构建被引量：1
- 2011年
- 本文就2008年在江苏某鸡场分离到的一株发生抗原变异的H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Huadong/4/2008(wt-DT株)开展如下研究:利用反向遗传技术,删除wt-DT株病毒血凝素(HA)基因多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,再与wt-DT株的神经氨酸酶(NA)基因组合,结合鸡胚高产病毒PR8株的6个内部片段骨架,构建针对此种变异H5亚型禽流感的疫苗株,结果成功拯救出重组病毒rH5N1/PR8。病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,相对于wt-DT株,rH5N1/PR8在MDCK细胞上的繁殖能力明显提高。rH5N1/PR8对SPF鸡和鸡胚无致病性,在鸡体内的免疫保护效果良好,符合疫苗候选株的标准。
- 张文俊薛涛吴小伟张妍钟蕾彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒H5亚型疫苗
