国家自然科学基金(31201300)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：薛鹏孙黎明张公亮季晓彤王玲更多>>
- 相关机构：大连工业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省高等学校优秀人才支持计划辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程更多>>
- 海参组织蛋白酶K的部分酶学性质及其对海参自溶的影响被引量：6
- 2017年
- 采用特异性荧光底物法检测海参体壁组织蛋白酶K(CTSK)的酶学性质并初步探讨其对海参自溶的影响。结果表明:CTSK的最适pH为5.0,最适温度为50℃,在20~40℃之间酶活力稳定性较好;Zn^(2+)、Fe^(2+)、Fe^(3+)、Cu^(2+)均对CTSK产生一定抑制作用,抑制率均超过60%;而Ca^(2+)和Mn^(2+)对其活性影响不大,Mg2+可增强该酶活性、CA-074、Z-Leu-Leu-Leu-H(ZLLL)、碘乙酸、E-64、抗痛素、PMSF对CTSK的抑制率均在85%以上,EDTA和1,10-菲啰啉对该酶的抑制率分别为39.7%和16%,而DTT和L-Cys可将该酶活力分别提高至127.46%和238.3%。在海参匀浆物中分别加入特异性抑制剂CA-074和ZLLL,25℃水浴加热使其发生自溶,并通过SDSPAGE检测CTSK对海参蛋白降解的影响。结果显示ZLLL能够在一定程度上抑制海参蛋白的降解。CTSK是一种巯基氨基酸含量较高的半胱氨酸蛋白酶,具有一定的金属离子依赖性,但又易被多种金属离子抑制;CTSK有可能直接参与海参自溶过程中蛋白质的降解。
- 季晓彤王玲薛鹏年益莹周婉茹张元峰张公亮候红漫孙黎明
- 关键词：海参组织蛋白酶K酶学特性自溶
- 刺参体壁胰/类胰丝氨酸蛋白酶的性质及其在自溶中的作用被引量：1
- 2019年
- 以刺参体壁中丝氨酸蛋白酶为研究对象,对其部分酶学性质及其与刺参自溶的关系进行研究。采用Tris-HCl缓冲溶液提取、硫酸铵盐析、透析及超滤获得刺参体壁粗酶液。结果显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,粗酶液的丝氨酸蛋白酶活力最高;以其为底物,测得该类蛋白酶在pH值为6.2和8.5时呈现较强酶活力峰值,两者最适温度范围均为50~55℃;Cu^2+、Fe^3+、Pb^2+、Zn^2+强烈抑制该酶的活性,Ca^2+可提高该酶活力;邻菲咯啉、乙二胺四乙酸以及半胱氨酸修饰剂均能够部分抑制该酶活力。4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐、苯甲基磺酰氟、Na-对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮、(3S)-7-氨基-1-氯-3-磺酰氨基-2-庚酮盐酸盐、大豆胰蛋白酶抑制剂能够显著抑制蛋白酶的活力以及自溶过程中可溶性蛋白、三氯乙酸可溶性多肽的生成。上述结果表明,刺参体壁中存在至少2种具有一定的金属离子依赖性的胰/类胰丝氨酸蛋白酶,其活性中心或底物识别位点可能有半胱氨酸的参与,该类蛋白酶很可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。
- 徐锦华孟泽玲葛诗琪薛鹏张公亮张公亮侯红漫
- 关键词：刺参酶学特性自溶
- 刺参2种天冬氨酸蛋白酶的酶学性质及其对自溶的影响被引量：5
- 2018年
- 对刺参体内2种天冬氨酸蛋白酶——组织蛋白酶D(cathepsin D,Cat D)和组织蛋白酶E(Cat E)的酶学性质进行探讨,并考察两者可能在刺参自溶中的参与作用。先用Tris-HCl缓冲溶液提取刺参体壁中的粗酶,采用特异性荧光底物法测定Cat D和Cat E的酶学性质。结果表明,Cat D和Cat E的最适pH值分别为5.0和4.0,分别在60℃和40℃呈现最大酶活性,两者在20~40℃活性均较为稳定。Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)、Fe^(3+)、Mn^(2+)可抑制CatD的活性,抑制率分别为86%、76.3%、29.2%、56.5%和48.5%。Fe^(3+)、Fe^(2+)、Cu^(2+)可抑制Cat E的活力,抑制率分别为99.1%、82.2%和28.6%。Pepstatin A、Z-Leu-Leu-Leu-H、苯甲基磺酸氟、1,10-菲啰啉能够抑制两者活性,抑制率分别约为98%~99%、65%~78%、30%~35%、19%~23%。二硫苏糖醇、L-Cys和乙二胺四乙酸则可将两者活性分别提升30.4%~31.1%、7.58%~9.64%、6.6%~7.9%。结果表明,刺参Cat D和Cat E为2种具有一定金属离子敏感性和依赖性的天冬氨酸蛋白酶,其活性中心有丝氨酸和半胱氨酸参与其活性调节,且两者很有可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。
- 王玲年益莹薛鹏薛鹏崔钰婷季晓彤侯红漫孙黎明
- 关键词：刺参天冬氨酸蛋白酶组织蛋白酶D酶学性质自溶
