黑龙江省发展高新技术产业专项资金(FW11C201)
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 相关作者：蓝兴国李玉花曹领改魏德强聂玉哲更多>>
- 相关机构：东北林业大学大庆麦伯康生物技术有限公司东北林业大学大庆生物技术研究院更多>>
- 发文基金：黑龙江省发展高新技术产业专项资金中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DNA去甲基化机制的研究进展被引量：5
- 2012年
- DNA甲基化作为动植物体内一种重要的表观遗传修饰形式,在调控基因表达、维持基因组的稳定性等方面发挥重要的生物学作用。固有DNA甲基化水平和模式的变化会导致生物的表型异常甚至死亡。而5-甲基胞嘧啶的水平和模式是由DNA甲基化和去甲基化共同决定的。DNA去甲基化可以分为主动去甲基化与被动去甲基化,而基因组甲基化模式的形成主要依赖于主动去甲基化。本文综述了生物体内DNA主动去甲基化五种潜在机制:DNA转葡糖基酶参与的碱基切除修复途径、脱氨酶参与的碱基切除修复途径、核苷酸切除修复途径、氧化作用去甲基化与水解作用去甲基化。
- 曹领改张旸蓝兴国李玉花
- 关键词：碱基切除修复核苷酸切除修复
- 抗人CA125单克隆抗体的制备、鉴定及化学发光体系的建立
- 2014年
- 目的制备抗人糖抗原125（CA125）单克隆抗体（mAb），并建立化学发光免疫分析法检测体系。方法将人CA125抗原免疫小鼠，通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株。经细胞扩大培养及纯化获得mAb，鉴定其特异性、纯度、亚型及效价，并建立双抗体夹心ELISA。分别对包被缓冲液、包被浓度和加样模式进行优化和选择后，建立化学发光免疫分析法检测体系，并对其进行评估和血样的测定。结果获得3株抗人CA125的杂交瘤细胞株（30—1—4、31—1-5、43—1-6），不与CA199、CA50、CA724交叉，效价在1：10。以上，用30-1．4和31—1—5建立的化学发光免疫分析法经优化后，检测范围为0～1000U／mL，最低检测限为0．72U／mL，与罗氏试剂检测结果的相关系数大于0．90。结论成功制备了抗人CA125mAb，建立并优化了人CA125的化学发光免疫分析法检测体系，为CA125检测及卵巢癌的诊断奠定了基础。
- 冯玥蓝兴国张晓磊李玉花
- 关键词：CA125单克隆抗体夹心ELISA化学发光免疫分析法
- 抗人CA15-3单克隆抗体的制备、鉴定及化学发光检测体系的建立被引量：5
- 2014年
- 目的获得抗人CA15-3单克隆抗体（mAb），建立CAl5-3双抗体夹心化学发光检测体系。方法人CAl5-3糖抗原免疫小鼠后，通过细胞融合，筛选到阳性杂交瘤细胞。杂交瘤细胞扩大培养后，纯化获得抗CAl5-3的mAb。对抗体进行纯度、效价、表位和亚型的鉴定并建立双抗体夹心检测CAl5—3化学发光体系，对该体系进行准确度、最低检测限、线性、重复性与特异性评估。结果获得5株阳性信号较强的杂交瘤细胞（分别为#3-1-3、#5-2-2、#11-2-2、#12—1—3和#16-1-3）。其分泌的抗体效价均大于10qg／mL，轻链均为K链，重链#3—1-3为IgG2a、#5-2-2与#12-1-3为IgG2b、#11-2-2与#16—1-3为IgG3。双抗体夹心体系在（0。300）U／mL范围内线性关系良好，其准确度的回收率为97．45％；最低检测限为0．59U／mL；线性相关系数为0．9978；低高值的变异系数（cy）均小于10％；与肿瘤标志物AFP、CEA、CAS0、CAl9-9和CA72-4均不交叉。结论成功制备了抗人CAl5-3mAb，建立了双抗体夹心检测CAl5-3化学发光体系。
- 曹领改蓝兴国魏德强李玉花
- 关键词：肿瘤标志物单克隆抗体化学发光免疫分析
- 抗人CA50单克隆抗体的制备、鉴定及其应用被引量：2
- 2015年
- 目的制备抗人糖抗原50（CA50）单克隆抗体（m Ab）,鉴定其免疫学特性并建立化学发光免疫分析法检测体系。方法将人CA50抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选后得到稳定分泌抗CA50抗体的杂交瘤细胞株。经细胞扩大培养及纯化获得m Ab后,建立化学发光免疫分析法检测体系,并对其线性范围、准确度、灵敏度、重复性进行评估,同时进行血样的测定。结果筛选出4株抗人CA50的杂交瘤细胞株,效价均在1∶108以上,2株配对抗体不与CA125、CA153、CA199、CA724交叉。建立的化学发光免疫分析法检测范围为0~500 U/m L,回收率为107.08%,灵敏度为0.83 U/m L,重复性CV值〈10%,与参比试剂检测血样的结果比较符合率为96.7%,Kappa值为0.911。结论成功制备了抗人CA50m Ab,建立了人CA50的化学发光免疫分析法检测体系。
- 蓝兴国冯玥魏德强李玉花
- 关键词：CA50单克隆抗体化学发光免疫分析法
- 抗人CA19-9单克隆抗体的制备和鉴定及化学发光检测体系的建立被引量：3
- 2014年
- 目的制备抗人糖抗原19-9（CA19-9）单克隆抗体（mAb）,建立双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。方法 CA19-9免疫小鼠后,通过细胞融合技术,获得抗CA19-9的mAb。鉴定其抗体的纯度、效价、特异性和配对,建立双抗体夹心化学发光体系。在包被缓冲液、包被浓度及加样模式上优化化学发光体系,对该体系进行准确度、最低检测限、线性、重复性评估以及血清样本的检测。结果获得4株名称为#1-1、#2-1、#3-1和#4-1的mAb。抗体效价均大于10^-8,与CA125、CA15-3、CA72-4均无交叉反应。其中#3-1 mAb与#2-1-HRP建立的双抗体夹心体系经优化后,其检测范围为0~1 000 U/mL;最低检测限为2.0 U/mL;线性相关系数为0.9999。与罗氏试剂检测结果对比,Kappa系数大于0.75;相关系数大于0.9。结论成功制备了抗人CA19-9 mAb,建立了双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。
- 蓝兴国曹领改魏德强赵洪梅李玉花
- 关键词：CA19-9单克隆抗体酶联免疫吸附分析化学发光免疫分析
- 抗HBsAg表位单克隆抗体的制备及HBV血清型夹心ELISA的建立被引量：2
- 2014年
- 目的制备抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位单克隆抗体(mAb),建立HBV血清型夹心ELISA检测方法。方法将HBsAg亚型蛋白分别免疫小鼠,通过细胞融合、高通量筛选ELISA(HTS-ELISA)筛选后得到杂交瘤细胞株并在无血清培养基中扩大培养。采用蛋白A对抗体进行纯化并测定抗体亲和力、亚型、特异性,最后建立双抗体夹心ELISA。结果HBsAg的亚型蛋白ad、adr及ayw分别免疫小鼠后,其血清效价达到1∶105。细胞融合及HTS-ELISA筛选后获得4株杂交瘤细胞株。经过纯化后得到的mAb分别命名为#2-4,#18-3,#7-7,#56-5,亲和力都在1×109L/mol以上。间接ELISA结果显示,#2-4,#18-3,#7-7,#56-5分别特异性地与HBsAg的"d,y,r,w"表位结合。用抗HBsAg"a"表位的mAb#3-11分别与这4株抗体组合,进行夹心ELISA检测。结果显示,不同的ELISA组合能特异性地检测HBsAg的"d,y,r,w"表位。结论成功制备了亲和力高、特异性好的抗HBsAg 4个表位的mAb,建立了检测HBV血清型的双抗体夹心ELISA。
- 张晓磊聂玉哲蓝兴国李玉花
- 关键词：乙型肝炎表面抗原单克隆抗体表位夹心ELISA
- 抗人Apo B_(100)单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 目的:制备抗人载脂蛋白B100(Apo B100)单克隆抗体(mAb),建立人Apo B100双抗体夹心ELISA检测方法。方法:将人Apo B100抗原免疫小鼠,通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株。将细胞株用无血清培养基扩大培养并纯化上清获得抗体,测定抗体亲和力、亚型、特异性及表位,最后建立双抗体夹心ELISA方法。结果:获得4株抗人Apo B100的杂交瘤细胞株(4-1-2、4-2-2、4-3-2、4-6-3),其分泌的抗体不与其他相关蛋白交叉反应,亲和力达到1×109L/mol。用4-3-2和4-6-3建立的双抗体夹心法的检测范围为(1.3～80)ng/mL,灵敏度1.24 ng/mL,批内变异系数均小于10%,批间变异系数均小于15%,回收率在90%以上。结论:成功制备了抗人Apo B100mAb,建立了定量检测人Apo B100的双抗体夹心ELISA方法,为Apo B100检测及疾病的诊断奠定基础。
- 张晓磊聂玉哲蓝兴国李玉花
- 关键词：单克隆抗体夹心ELISA
