国家自然科学基金(30972131)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：霍贵成刘飞谷春涛于微郭文奎更多>>
- 相关机构：东北农业大学丹尼斯克(中国)有限公司教育部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学生物学更多>>
- H^+-ATPase弱化菌株的筛选及其应激性研究被引量：2
- 2012年
- 利用新霉素作为筛选压力,筛选H+-ATPase缺陷的德氏乳杆菌保加利亚亚种自发突变株,筛选出一株突变菌株,命名为KLDS1.9201-11。比较亲本菌株KLDS1.9201与突变菌株KLDS1.9201-11的生长情况,发现KLDS1.9201-11的生长活力较亲本菌株差且产酸能力弱;在pH 3.0的MRS液体培养基中经过3 h酸应激后,亲本菌株和突变菌株的活菌数分别降低86.98%和99.98%,酶活分别降低13.33%和21.15%;在冻干后,亲本菌株和突变菌株的活菌数分别降低76.71%和4.88%,亲本菌株的酶活降低4.27%,而突变菌株的酶活上升29.71%。结果表明,突变菌株较亲本菌株具有更强的酸敏感性和冷适应性,可以用于弱后酸化酸奶发酵剂的制备。
- 霍贵成崔兰刘飞
- 关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种冷应激
- 弱后酸化保加利亚乳杆菌突变株与亲本菌株H^+-ATPase基因的相似性比较被引量：2
- 2013年
- 为了确定德氏乳杆菌保加利亚亚种H+-ATPase的调控机制,以H+-ATPase缺陷的德氏乳杆菌保加利亚亚种突变菌株和亲本菌株KLDS1.9201作为研究对象。首先分别提取亲本和突变菌株的基因组DNA,随后利用PCR的方法扩增出H+-ATPase蛋白的全部编码基因并测序,最后利用DNAMAN软件比较亲本和突变菌株的H+-ATPase的相似性。结果表明亲本和突变菌株H+-ATPase编码基因的相似性为100%。H+-ATPase缺陷的德氏乳杆菌保加利亚亚种突变菌株KLDS1.9201-11和亲本菌株KLDS1.9201的H+-ATPase活力之间的差异并不是由于编码基因发生了突变,可能是转录水平的降低导致H+-ATPase酶蛋白的表达量降低,进而影响酶活力。为进一步研究德氏乳杆菌保加利亚亚种H+-ATPase的调控机制奠定了基础。
- 刘飞焦月华郭文奎于微谷春涛霍贵成
- 关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种后酸化
- 重组NADH氧化酶对乳酸脱氢酶乳酸氧化活性的影响被引量：1
- 2013年
- [目的]考察当存在其他利用NADH途径时,发酵型乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)催化乳酸氧化能力的改变。[方法]PCR扩增乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)中生成H2O的NADH氧化酶基因noxE,将其连接至表达载体并在大肠杆菌中过量表达;对亲和纯化的产物进行SDS-PAGE分析、光谱扫描和活性测定,考察纯化产物是否具有生物学活性;以2,4-二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶的乳酸氧化活性,考察添加NoxE重组蛋白对其活性的影响。[结果]重组NoxE蛋白是种黄素蛋白,具明显的生物学活性,说明noxE表达载体构建成功;添加NoxE后,LDH的乳酸氧化活性提高了3.84倍。[结论]在NADH经呼吸链代谢掉的生理条件下,LDH催化乳酸氧化的能力会明显提高。
- 赵蕊霍贵成
- 关键词：乳酸菌乳酸脱氢酶
- 德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原的表达及抗体制备
- 2013年
- 利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便用于Western blot分析。首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,利用大肠杆菌pQE 40原核表达系统表达重组atpA抗原,镍柱亲和层析纯化表达蛋白后,常规免疫两只新西兰长耳白兔。利用ELISA检测兔血清的效价来制备多克隆抗体,然后用Protein A纯化抗体。最后得到的atpA抗体进行Western blot检测验证抗体的特异性。结果表明,两只新西兰长耳白兔的血清效价分别为1∶20 000和1∶80 000;Western blot检测表明,制备的抗体能够与H+-AT-Pase蛋白进行特异性的结合。本研究成功的在大肠杆菌中表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种的atpA蛋白,并利用其制备了效价较高的多克隆抗体,该抗体可作为一抗用于Western blot分析。
- 刘飞焦月华郭文奎于微谷春涛霍贵成
- 关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种蛋白表达抗体制备
