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雷奈酸锶通过骨形态发生蛋白-2/Smad通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化被引量：13: 2013年; 目的探讨骨形态发生蛋白-2（BMP-2）/Smad通路在雷奈酸锶（Sr）促进大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为成骨细胞过程中的作用。方法体外分离培养大鼠BMSCs,根据实验目的加入不同浓度Sr、BMP-2的拮抗剂noggin及Smad1小干扰RNA（SiRNA）。酶标法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,茜素红染色检测钙结节,Western blotting法检测磷酸化Smad1/5/8及Runt相关转录因子-2（Runx2）蛋白的表达。结果应用0.1~10 mmol/L Sr处理BMSCs细胞1 h后,细胞内磷酸化Smad1/5/8表达增高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到高峰;在Sr处理BMSCs前,应用BMP-2拮抗剂noggin预处理细胞2 h能抑制Sr对磷酸化Smad1/5/8表达的上调作用;应用0.1~5 mmol/L Sr处理细胞6 h后,细胞内Runx2表达增高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到高峰;在Sr处理BMSCs前,应用Smad1 SiRNA转染细胞后能下调Smad1/5/8、磷酸化Smad1/5/8的表达,并抑制Sr对Runx2表达的上调作用,还拮抗Sr对ALP活性及钙化结节形成的促进作用。结论 BMP-2/Smad通路参与了Sr促进BMSCs成骨分化。; 吕辉珍黄晓丹靳思思郭润民吴文; 关键词：雷奈酸锶骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白-2 小RNA干扰 SMAD1

雷奈酸锶通过TGF-β_1/Smad通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化被引量：9: 2013年; 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路在雷奈酸锶(strontium ranelate,Sr)促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化中的作用。方法:在大鼠BMSCs向成骨细胞的诱导分化过程中,用Sr处理细胞,用Western blotting法检测磷酸化Smad2(phosphorylated Smad2,p-Smad2)和Runx2的表达。用TGF-β1特异性阻断剂SB431542或Smad2小干扰RNA(Smad2-siRNA)预处理BMSCs后加入Sr,再观察p-Smad2和Runx2表达的改变。应用试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及钙结节水平。结果:在大鼠BMSCs向成骨细胞的诱导分化过程中,Sr可增加p-Smad2和Runx2的表达,Sr浓度为1 mmol/L、作用1 h时,p-Smad2表达最多;Sr浓度为1 mmol/L、作用5 d时,Runx2表达最多;用SB431542或Smad2-siRNA预处理BMSCs后再加入Sr,不仅可以抑制p-Smad2和Runx2的表达,且ALP活性与钙结节数量也受到明显的抑制。结论:Sr可通过TGF-β1/Smad通路促进大鼠BMSCs向成骨细胞分化。; 黄晓丹吕辉珍靳思思郭润民吴文; 关键词：雷奈酸锶骨髓间充质干细胞转化生长因子Β

Shh在雷奈酸锶促进骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用被引量：5: 2014年; 目的：研究SonicHedgehog（Shh）在雷奈酸锶（strontiumranelate，Sr）促进大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨细胞分化中的作用。方法：采用全骨髓贴壁培养法分离、纯化、培养大鼠BMSCs，取第3-5代BM．SCs加入成骨诱导液诱导成骨分化，再加入不同浓度sr及Shh拮抗剂cyclopamine（Cy），分别观察它们对BMSCs向成骨细胞分化的影响。酶标法检测成骨细胞分化早期标志物碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）的活性；茜素红染色检测细胞钙化水平；Westernblotting法检测Shh和Runx2蛋白的表达情况。结果：Sr（3mmol／L）可以使细胞ALP活性增高，钙结节形成增加。Sr（0．1-5mmol／L）作用BMSCs7d，可明显促进Shh和Runx2蛋白的表达，且Shh蛋白在1mmol／LSr作用时表达最多，而Runx2在3mmol／LSr作用时表达最多。1mmol／LSr作用BMSCs不同时间（1、3、5、7d），呈时间依赖性地上调Shh和Runx2蛋白的表达。cy（10Iμmol／L）不仅拮抗sr对Shh和Runx2表达的上调作用，还抑制sr对ALP和钙结节形成的促进作用。结论：sr可通过上调Shh蛋白及成骨特异性转录因子Runx2的表达促进BMSCs向成骨细胞分化。; 靳思思胡洁芬吴文; 关键词：雷奈酸锶骨髓间充质干细胞成骨细胞

Hedgehog/Gli1通路在雷奈酸锶促进骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用被引量：3: 2015年; 目的：探讨Hedgehog/Gli1信号通路在雷奈酸锶（strontium ranelate,Sr）促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨细胞分化中的作用。方法：体外分离培养大鼠BMSCs,诱导其成骨分化,根据实验目的加入不同浓度的Sr、Hedgehog受体拮抗剂cyclopamine（Cy）及Gli1小干扰RNA（Gli1-siRNA）。用Western blotting法检测Gli1及Runx2的表达,酶标法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,茜素红染色法检测钙结节水平。结果：应用不同浓度的Sr（0.1-5 mmol/L）处理BMSCs细胞7 d后,细胞内Gli1蛋白表达增高,Sr的浓度为3 mmol/L时,Gli1表达达到高峰;使用Cy与Sr共处理BMSCs 7 d,能拮抗Sr对Gli1蛋白表达的上调作用;应用Gli1-siRNA转染细胞后,能下调Gli1蛋白的表达,并抑制Sr对Gli1下游Runx2蛋白表达的上调作用,还可拮抗Sr对ALP活性及钙化结节形成的促进作用。结论：Hedgehog/Gli1通路参与了Sr促进骨髓间充质干细胞向成骨分化的过程。; 胡洁芬廖静秋张伟杰许翎智喜梅林凯吴文; 关键词：雷奈酸锶骨髓间充质干细胞 GLI1蛋白

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广东省科技计划工业攻关项目(2011B031800002)