国家自然科学基金(30070721)
- 作品数：28 被引量：99H指数：7
- 相关作者：李柏青陈勇吕合作侯彦强胡建国更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院安徽医科大学中国科学技术大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD28协同刺激信号传导的研究进展被引量：5
- 2002年
- T细胞表面分子 CD2 8介导的协同刺激信号在 T细胞的激活、增殖、抗凋亡及促进多种细胞因子的分泌中起重要作用。有关其活化信号在 T细胞内的传导已成为免疫学研究的热点。近年的研究表明 ,CD2 8在 T细胞内可通过多种信号传导分子 ,如 PI3K、Grb2、A- SMase、PKC- θ等传导活化信号 ,亦可通过 Itk、MKP等传导活化抑制信号 ,从而调控 T细胞的活化。
- 钱峰吴俊英李柏青
- 关键词：CD28信号传导协同刺激信号信号转导T淋巴细胞活化
- 纯化的结核杆菌多肽抗原刺激人γδT细胞的效应分析被引量：10
- 2004年
- 目的 :探讨从结核杆菌多肽抗原 (Mtb Ag)纯化的多肽 (C主肽 )对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法 :采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC ,培养 10天时经流式细胞仪检测细胞表型 ;另外以γδT细胞活化标志分子CD6 9的表达为指标 ,分析C主肽对已被Mtb Ag激活扩增 13天的γδT细胞再次刺激的激活效应。同时以MTT法检测C主肽的再刺激对已活化扩增的γδT细胞的促增殖活性。结果 :结核杆菌C主肽对人新鲜的γδT细胞具有显著扩增效应 ;当C主肽再刺激已经活化的γδT细胞时 ,可使其显著表达CD6 9分子 ,同时对γδT细胞具有显著促增殖活性。结论 :结核杆菌C主肽可能是Mtb
- 陈勇吕合作李柏青王伟张海峰
- 关键词：ΓΔT细胞结核杆菌多肽抗原增殖活性CD69
- 单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)作为T细胞活化标志的探讨被引量：1
- 2005年
- 目的:比较、分析单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)和CD69分子在人外周血γδT和CD3+T细胞上的表达规律。方法:用抗CD3单克隆抗体(mAb)和结核杆菌抗原(MtbAg)等刺激剂分别刺激人外周血单个核细胞(PBMC),部分实验组同时使用信号转导途径阻断剂处理。用流式细胞术检测不同时相γδT和CD3+T细胞上GM1和CD69分子的表达率。结果:MtbAg刺激PBMC后0.5h,γδT细胞上即表达GM1,随着时间的推移表达水平持续升高;而CD69的表达出现在刺激后的3h,于24h达高峰,然后逐渐下降,72h明显降低,6d时已接近静止状态。抗CD3mAb刺激的CD3+T细胞上,GM1和CD69表达的规律类似于γδT细胞。PD98059和LY294002均能够阻断MtbAg刺激所致的γδT细胞上GM1的表达,PMA能够促进GM1的表达。结论:GM1可作为一种新的T细胞活化的标志,其与早期短暂表达的CD69分子有不同的表达规律。GM1的表达可能与RasErk通路、PI3K和PKC有关。
- 吕合作李柏青
- 关键词：单唾液酸四己糖神经节苷脂CD69ΓΔT细胞活化
- MAPK信号转导途径在Mtb-Ag激活的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用被引量：4
- 2005年
- 目的: 探讨MAPK信号转导途径在结核杆菌抗原(Mtb- Ag)活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用。方法: 用Mtb- Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增, 并用磁珠阳性分选法分离高纯度的γδT细胞; 用MTT比色法测定γδT细胞对肿瘤细胞系K562和Raji的细胞毒活性, 并观察MEK/Erk特异性抑制剂PD98059和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580, 对细胞毒活性的阻断作用。用流式细胞仪检测肿瘤细胞诱导γδT细胞上CD69的表达, 并观察PD98059和SB203580对CD69表达的抑制作用。结果: 新鲜分离的PB- MC, 用Mtb Ag刺激培养第 10天, 用磁珠阳性法分离的细胞中γδT细胞的比率, 分别为 3. 56%、74. 63%和 98. 20%。PD98059可抑制γδT细胞的杀瘤活性, 且对γδT细胞杀伤Fas低表达的K562细胞的抑制率(39. 27% )高于对γδT细胞杀伤高表达Fas的Raji细胞的抑制率 ( 26. 58% )。PD98059还能明显抑制肿瘤细胞诱导γδT细胞表达CD69; 而SB203580对γδT细胞的杀瘤活性和肿瘤细胞诱导的CD69的表达均无影响。结论: MAPK途径中的Erk通路 (而不是p38通路 )参与了γδT细胞对肿瘤细胞细胞毒活性的启动, 且可能对γδT细胞的颗粒外吐作用较大, 而对Fas/FasL介导的细胞毒活性的作用较小。MAPK途径的Erk通路可能还参与肿瘤细胞诱导γδT细胞的?
- 胡建国侯彦强李柏青
- 关键词：ΓΔT细胞肿瘤细胞细胞毒活性MAPK途径
- 人γδT细胞TCR分子与结核杆菌多肽抗原特异性结合的证据
- 目的探讨γδT细胞对结核杆菌抗原(Mtb-Ag)识别的分子机制。方法采集人外周血(PB),分别经抗TCRγδ-PE和FITC标记的Mtb-Ag及其纯化的不同组分,结核杆菌高分子量蛋白组分(Mtb-HW-Ag)、低分子量多...
- 陈勇姚春艳吕合作李柏青
- 关键词：ΓΔT细胞结核杆菌抗原激光共聚焦显微镜
- 文献传递
- 刺激人γδ^+ T细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的纯化与活性鉴定被引量：14
- 2003年
- 目的:纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗 原。方法:采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱,对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离。将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰,分别再经FPLC Mono Q离子交换层析柱进一步纯化,并且采用流式细胞仪对获得的Mtb-LW-Ag进行刺激γδ+ T细胞增殖活性的测定。结果:Mtb-Ag经FPLC S-100柱可分离出1个大分子蛋白峰A和3个M,低的多肽峰(B,C,D)。Mr低的多肽峰分别经Mono Q柱层析,鉴定出B峰含有6个主峰,C峰含有1个主峰,D峰含有8个主峰。对Mtb-LW-Ag及其纯化多肽进行活性检测,发现多肽峰B和C以及纯化多肽B-Ⅲ和C-主肽均可显著刺激γδ+ T细胞扩增。结论:利用FPLC法可快速高效地从Mtb-Ag中纯化出多种Mr低的多肽,而且其中的B-Ⅲ多肽和C-主肽可能是促进γδ+ T细胞活化增殖的主要多肽。
- 陈勇吕合作胡建国候彦强张海峰李柏青何海辉
- 关键词：结核杆菌多肽抗原纯化活性鉴定
- 成人外周血细胞中Th2功能亚群分化的体外实验研究
- 2004年
- 目的 :研究在中性条件和Th2极化条件下CD3单克隆抗体 (CD3mAb)激活的人外周血αβT细胞Th1/Th2型细胞因子的表达。方法 :用CD3mAb、IL 2刺激人外周血单个核细胞 (PBMC) ,作为CD3mAb激活的T淋巴细胞 (CD3AT)的中性条件培养 ;用CD3mAb、IL 2、rhIL 4和抗人IL 12抗体 ,作为Th2极化条件。分别收集PBMC和培养后第 7、14和 2 1天细胞 ,加PMA、ionomycin和monensin作用 6h后 ,用多色荧光抗体标记 ,在流式细胞仪上检测αβT细胞中胞内IFN γ或IL 4产生细胞的比例。结果 :PBMC中IFN γ+ 或IL 4 + αβT细胞分别为 2 3.6 %、2 .4 %。与中性条件相比 ,Th2极化条件下培养 3周 ,αβT细胞中IFN γ产生细胞明显减少 (P <0 .0 0 1) ,IL 4 + 产生细胞显著增加 (P <0 .0 0 1) ;同时产生IFN γ+ IL 4 + 细胞从 3.6 %增加至 6 .1%。结论
- 朱安友陈礼文李柏青
- 关键词：ΑΒT细胞TH1/TH2细胞因子
- 可激活人γδT细胞的结核杆菌耐热多肽抗原的初步纯化与活性鉴定被引量：12
- 2002年
- 目的 对结核杆菌耐热多肽抗原（Mtb-Ag）的蛋白组成进行定性分析,并观察Mtb-Ag及其纯化组分刺激人外周血rδT细胞和αβT细胞增殖反应的量效关系。方法 用快速蛋白液相色谱仪（FPLC）定性分析Mtb-Ag的蛋白组成,并用不同剂量的Mtb-Ag及其纯化组分体外刺激健康人外周血PBMC,培养9d后经流式细胞仪检测细胞表型。结果 Mtb-Ag经FPLC MonoQ离子交换柱分析存在20种蛋白成分。Mtb-Ag在合适刺激剂量时对人rδT细胞发挥优势扩增;当剂量过大则对αβT细胞发挥优势扩增;其分离纯化的含大分子蛋白的蛋白峰I随着刺激剂量增加而对αβT细胞的扩增表现显著增强趋势;而其分离的含低分子多肽的蛋白峰Ⅱ随着刺激剂量增加则对rδT细胞扩增表现显著增强趋势,并且其活性明显高于蛋白峰I,同时其对αβT细胞的扩增效应并不明显,并显著低于Mtb-Ag和蛋白峰I。结论 Mtb-Ag刺激rδT细胞扩增时应选择合适的刺激剂量,其所含的低分子多肽抗原能特异性激活rδT细胞,而其所含的大分子蛋白抗原则特异性激活αβT细胞。
- 陈勇胡建国吕合作侯彦强张海峰李柏青何海辉
- 关键词：结核杆菌ΓΔT细胞抗原
- 单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)作为T细胞活化标志的探讨
- 目的比较和分析单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)和CD69分子在人外周血((T和CD3+T细胞上的表达动力学。方法用抗CD3单克隆抗体(mAb),结核杆菌抗原(Mtb-Ag),或PMA分别刺激人外周血单个核细胞(PBMC...
- 吕合作李柏青
- 关键词：单唾液酸四己糖神经节苷脂CD69ΓΔT细胞活化
- 文献传递
- 乙醇及二甲基亚砜对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 观察不同浓度的乙醇及二甲基亚砜 (DMSO)对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响。方法 分别用结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)、CD3单抗(CD3mAb)刺激正常人外周血单个核细胞 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (αβT细胞为主 )及CD3mAb激活的T细胞(γδT细胞为主 ) ;用不同浓度的乙醇及二甲基亚砜分别作用于γδT细胞和γδT细胞 4、2 4h后 ,应用Annexin V FITC/PI染色 ,流式细胞术检测不同T细胞亚群的凋亡 ,应用四唑盐(MTT)法检测T细胞的活性。结果 Mtb Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达 70 %～ 90 % ;CD3mAb激活的T细胞中γδT细胞比例 >90 % ;与对照组相比 ,除浓度为 1 0 %及 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 2 4h的诱导凋亡作用明显 (P <0 0 5 )及浓度为 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 4h对细胞活性抑制明显 (P <0 0 5 )外 ,低浓度乙醇及DMSO(≤ 2 0 % )对人γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均无显著性 (P >0 0 5 ) ;与对照组相比 ,除 5 0 %乙醇作用于γδT细胞 4h及 5 0 %DMSO作用于γδT细胞 4h诱导细胞凋亡作用不明显 (P >0 0 5 )外 ,高浓度乙醇和DMSO(5 0 % )对γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均增加 (P <0 0 5 )。结论?
- 梅传忠沈继龙陈勇李柏青
- 关键词：ΓΔT细胞ΑΒT细胞
