国家自然科学基金(30800735)
- 作品数：17 被引量：91H指数：6
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- 线虫surface coat proteins提取方法的建立与双向电泳分析被引量：1
- 2010年
- 目的:建立一套适用于蛋白质双向电泳体系的线虫surface coat proteins(SCPs)样品制备技术,为今后研究线虫surfacecoat蛋白质组学及线虫病理生理学奠定基础。方法:以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为研究材料,对比和分析不同的蛋白提取沉淀方法,进而采用SDS-PAGE电泳技术和双向电泳技术对所提蛋白进行评价。结果:通过35%乙醇结合TCA-丙酮沉淀法获得的质量较好的线虫SCPs,在12%的SDS-PAGE分析中该法提取的蛋白背景浅,蛋白条带多且清晰尖锐,含有丰富的蛋白信息量。通过双向电泳分析,可从提取的蛋白中鉴定出清晰蛋白点400多个。随机选择5个蛋白斑点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定,鉴定得到高度匹配的已知线虫蛋白质2个。结论:所建立的方法可为今后研究线虫surface coat蛋白质组学及线虫病理生理学提供重要工具。
- 黄薇田宝玉郭菁蔡婉玲高媛媛柯崇榕黄建忠
- 关键词：线虫SURFACECOAT蛋白提取双向电泳MALDI-TOF质谱
- 蛋白酶底物特异性改变对白鲢鱼肉蛋白酶解效率和产物抗氧化性的影响被引量：1
- 2013年
- 通过对比水产品加工蛋白酶及其底物特异性位点突变酶E156S、E156N和E156D对白鲢鱼肉蛋白水解能力及其酶解产物抗氧化性的差异,探讨底物特异性改变对酶的酶解效率和产物活性的影响.结果表明,突变酶E156D的终水解度最高(15.22%),其次为E156S(13.60%),远高于E156N与原酶的9.37%.原酶和突变酶E156S酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性无明显差异,分别为83.79%和84.05%.而突变酶E156N酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性为76.6%;E156D酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性最低(50.05%).说明枯草蛋白酶BPN底物特异性相关的156位点突变对蛋白酶水解鲢鱼蛋白能力和产物活性都具有重要影响.
- 田宝玉赖丽蓉蔡婉玲黄薇郭菁蓝灿华宋永康
- 关键词：蛋白酶鲢鱼蛋白酶解抗氧化性
- 果胶酶高产菌种的紫外诱变选育及其培养条件的响应面法优化被引量：6
- 2010年
- 以果胶酶产生菌黑曲霉EIM6为出发菌株,初始果胶酶活为14 539 U/mL,经紫外诱变反复处理,摇瓶复筛和遗传稳定性试验,最终获得一株果胶酶高产菌株EIMU2。EIMU2菌株的形态特征发生了明显的改变,相较于原出发菌株EIM6,孢子色泽更黑,孢子团也较出发菌株大,菌丝与孢子上凝结有更多的液珠。复筛后EIMU2酶活为32 161 U/mL,较原出发菌株提高了1.212倍。进一步通过响应面法对EIMU2菌株的液体发酵培养条件进行优化。优化后的培养条件为甜菜渣1.83%,花生饼粉1.69%,(NH_4)_2SO_4 0.5%,K_2HPO_4 0.3%,CaCO_3 0.2%,MgSO_4 0.15%(w/v),接种量6%(v/v),装液量21.36 mL。优化的突变菌株产酶活性进一步提高至98 794.3 U/mL,提高了2.07倍。
- 林伟铃田宝玉秦勇吕睿瑞王春香强慧妮黄建忠
- 关键词：果胶酶黑曲霉诱变育种响应面
- 杀线虫细菌W3胞外体壁降解蛋白酶的纯化及部分特性被引量：1
- 2009年
- [目的]为筛选和开发高效新型生物杀线虫剂提供依据。[方法]以土壤中筛选的1株具有明显杀线虫活性的细菌菌株W3为供试菌种,对其进行发酵培养,采用硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子柱层析等方法从发酵液中分离W3菌株的杀线虫活性成分,并对各活性成分的杀线虫活性进行测定。[结果]W3菌株粗蛋白处理线虫4 h后,虫体活动异常,部分虫体静止不动,处理36 h后大部分虫体不活动,部分虫体体壁断裂现象,最终所有线虫被完全消解;从发酵液中纯化出1种能降解线虫体壁的胞外蛋白酶,该酶的分子量约为45KDa,其作用的最佳pH值为7～8,最佳温度为45℃。[结论]W3菌株胞外蛋白酶具有明显的杀线虫活性和线虫体壁降解活性。
- 田宝玉蓝灿华江贤章柯崇榕黄薇黄建忠
- 关键词：胞外蛋白酶
- 蛋白酶产生菌的筛选和紫外诱变育种被引量：17
- 2011年
- 目的:筛选水产品加工用蛋白酶产生菌,为酶的的分子改造和水产品加工提供材料基础。方法:通过在富含水产品蛋白的场所的针对性采样,菌落平板筛选结合发酵上清液平板验证以及Folin-酚试剂定量检测确认筛选结果,并通过紫外诱变提高产中性蛋白酶菌株的产酶能力。结果:从12份土样中分离187株具有明显蛋白酶活性的单菌落。在挑取的11株透明圈明显的蛋白酶产生菌中,菌株W9在所有菌株中可以稳定产生较高的蛋白酶酶活力,约为1 594U/ml。通过对其进行紫外诱变后,在突变株中筛选得到一株酶活约为1 845U/ml的W9UV突变株,比野生菌株酶活提高了15.6%。结论:突变菌株W9UV可稳定产生较高的蛋白酶酶活力,发酵性能优良。
- 蔡婉玲田宝玉郭菁蓝灿华黄薇黄建忠
- 关键词：中性蛋白酶酶活紫外诱变
- 水产品蛋白酶解工艺的正交设计优化
- 2012年
- 试验以草鱼鱼肉蛋白为原料,采用蛋白酶突变株166水解,在单因素试验的基础上,以抗氧化性为考察指标,对反应时间、加酶量、反应pH及反应温度等因素进行正交试验,确定蛋白酶突变株166水解草鱼蛋白获得活性物质的最佳操作条件:酶解时间120 min,酶解温度65℃,pH 7.5,加酶量4 000 U/g,在此条件下,水解产物的抗氧化性可达到52.07%。
- 蓝灿华吕晔明黄薇蔡婉玲郭菁黄建忠田宝玉
- 关键词：蛋白酶解产物单因素试验正交设计
- 不同地区森林土壤降解天然木质纤维素能力的分析评价被引量：2
- 2010年
- 目的:分析不同地区森林土壤样品的木质纤维素分解能力,为分离和挖掘新的土壤木质纤维素分解酶系及微生物奠定基础。方法:测定来源于不同气候类型和植被的土壤样品的纤维素酶和木聚糖酶活性的变化以及对天然木质纤维素的降解能力。结果:土壤样品具有较高的初始木聚糖酶活,相反许多样品的纤维素酶活未测到。富集后,除个别样品酶活性稍有下降之外其余均明显提高,其中木聚糖酶活增长最多达118.58u.g-1,纤维素酶活涨幅最多达110.00u.g-1。各样品木质纤维素的降解量从24.4mg到93.1mg不等,降解效率最高55.35%。结论:来源于不同气候条件和不同类型土壤样品在天然木质纤维素降解能力以及相关的纤维素酶和木聚糖酶活性上表现出了广泛的多样性差异。
- 吕睿瑞田宝玉高媛媛林伟铃王春香黄建忠
- 关键词：土壤土壤酶活
- 侧孢短芽孢杆菌碱性蛋白酶基因BLG4在枯草芽孢杆菌WB600中的高效表达被引量：11
- 2011年
- 侧孢短芽孢杆菌G4菌株在侵染线虫的过程中可以分泌蛋白酶,降解线虫体壁,从而帮助细菌侵入宿主体内.在本文中,侧孢短芽孢杆菌的胞外蛋白酶BLG4基因经克隆后插入到改造后的枯草芽孢杆菌表达载体pWT22中,构建重组表达质粒pWT22-BLG4.构建成功的重组质粒通过化学转化法转入枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株WB600中,转化子pWT22-BLG4/WB600在IPTG(1.0 mmol.L-1)的诱导下,发酵液上清中的蛋白酶活可达到620 U.mL-1,高于出发菌株G4的BLG4酶活(240 U.mL-1).经SDS-PAGE分析,重组子pWT22-BLG4/WB600产生了一条分子质量约为30 ku的条带,该条带的大小与侧孢短芽孢杆菌G4上清发酵液中BLG4条带的大小一致.而未经IPTG诱导的重组子pWT22-BLG4和经IPTG诱导的WB600则未出现该条带.结果证明侧孢短芽孢杆菌G4的碱性蛋白酶基因BLG4已在枯草芽孢杆菌WB600中获得了成功表达.重组蛋白酶具有与侧孢短芽孢杆菌G4产生的BLG4蛋白酶同样的酶学性质.同时,重组蛋白酶具有明显的杀线虫和体壁降解能力,表明其在线虫生物防治中将有广泛的应用前景.
- 郭菁田宝玉蔡婉玲黄薇江贤章黄建忠
- 关键词：侧孢短芽孢杆菌枯草芽孢杆菌酶学特性线虫
- 线虫生防细菌W3对线虫侵染活性的测定被引量：1
- 2009年
- 目的:筛选以体壁穿透方式进入线虫体内而引起宿主致病的杀线虫细菌,为开发新的植物寄生线虫生防战略奠定基础。方法:通过毒性测试和平板法筛选杀线虫细菌,利用显微镜和扫描电镜研究观察细菌对线虫的作用方式和侵染过程。结果:筛选获得的杀线虫细菌菌株W3具有明显的侵染活性。生测结果表明,细菌培养上清液和上清蛋白粗提物对腐生线虫致死率分别达到95%和100%。在平板测试中,测试线虫体壁被严重破坏,在48h内超过80%的线虫被杀死和降解。扫描电镜观察可以明显的看到细菌穿透线虫体壁后在线虫体壁上留下的孔。结论:细菌W3具有显著的杀线虫活性和线虫体壁降解活性,其杀线虫活性物质主要存在于细菌培养上清液中。
- 田宝玉黄薇柯崇榕江贤章舒正玉黄建忠
- 关键词：扫描电镜侵染生物防治
- 碱性蛋白酶高产菌株EIM-8的筛选鉴定及其液体发酵条件优化
- 2011年
- 筛选分离得到一株高产碱性蛋白酶菌株EIM-8,并基于16S序列进行分子系统进化分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。同时,采用响应面法对Bacillus subtilis EIM-8的产酶条件进行了优化。首先通过单因素试验,筛选出最适碳源为玉米淀粉,最适氮源为牛肉膏。在此基础上,采用Plackett-Burman试验设计筛选出影响酶活的三个主效因子——玉米淀粉、装液量和初始pH值。再通过最陡爬坡实验逼近最大响应区域,用Box-Behnken试验设计和嵴岭分析确定主效因子的最优水平。优化后酶活可达10232.2 U/mL,较优化前提高了2.53倍。
- 秦勇柯崇榕
- 关键词：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶响应面法
