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牙鲆碱性磷酸酶cDNA序列分析与蛋白质高级结构预测被引量：8: 2007年; 为研究碱性磷酸酶(EC3.1.3.1;alkaline phosphatase,ALP)在牙鲆(Paralichthys Olivaceus)发育和变态中的作用,采用RACE的方法克隆了牙鲆ALP基因cDNA全长,通过生物信息学分析了核苷酸序列并进行蛋白结构预测.结果表明,牙鲆ALPcDNA全长为1811bp,能编码476个氨基酸的蛋白质,分子量为52293.1,等电点为7.67.编码区核苷酸GC含量在ALP同源基因中差异比较大,脊椎动物明显高于非脊椎动物和细菌.分子系统分析显示,牙鲆ALP和青黑斑河豚(Tetraodonnigroviridis)、斑马鱼(Danio rerio)的组织非特异性ALP有较高的同源性,分子进化树和物种进化树是一致的.在蛋白序列中的一些重要的功能位点,包括金属离子结合位点、N糖基化位点和丝氨酸磷酸化位点等表现了较高的保守性.牙鲆ALP和人胎盘ALP(PALP)在蛋白序列上有43%的相似性,其3D结构非常接近.通过氨基酸空间位置比较发现,牙鲆ALP中141和203位半胱氨酸对应于人PALP的121和183位半胱氨酸,推测能形成一个二硫键.在两者酶活性中心,3个金属离子结合的氨基酸残基非常保守,Zn离子周围的9个氨基酸中有2个不同;Mg离子周围的7个氨基酸也只有2个不同,包括一对类似的丝氨酸155和苏氨酸175.; 陈晓武施志仪; 关键词：牙鲆碱性磷酸酶蛋白质结构预测生物信息学

体外培养三角帆蚌外套膜细胞的生物学特性及有核珍珠培育被引量：12: 2007年; 通过光学显微镜、透射电镜、流式细胞仪等方法对体外培养的三角帆蚌(Hyriopsis cumingiiLea)外套膜细胞进行观察和检测,证明其具有与蚌体内细胞相同的生物学结构、分裂增殖能力和分泌珍珠质的生物活性。在此基础上,对三角帆蚌有核珍珠培育技术进行探讨。将培养细胞黏附在表面经过促黏壁物质处理的珠核表面,再插入育珠蚌体内培育,120 d后,蚌体内可形成完备的珍珠囊,并在珠核表面有明显的珍珠质沉积;6个月后,珍珠质可将整个珠核包裹起来形成有核珍珠。本研究初步证明了细胞法培育有核珍珠的可行性。[中国水产科学,2007,14(1):149-154]; 施志仪杨显祥李勇李巍; 关键词：三角帆蚌细胞培养生物学特性

牙鲆发育中ALP基因表达图式及功能分析被引量：7: 2007年; 为探讨研究碱性磷酸酶(ALP)在牙鲆发育变态中的表达与功能,采用组织学和分子生物学的方法对牙鲆ALP进行了研究。结果如下:1.组织化学染色显示原肠期胚体中即可以检测到ALP的活性。出膜后,在头和背部的活性比较强,而身体的内脏区域,活性较低,卵黄中没有表现出酶活性。仔鱼进食后,ALP开始在消化道中大量的表达,特别是在胃肠道粘膜层。2.牙鲆ALP cDNA全长为1 811 bp,预测能编码476个氨基酸的蛋白质。采用RT-PCR的方法在牙鲆卵到出膜后5天的时候不能检测到ALP基因表达,到变态前的仔鱼体内开始表达。在成鱼胃、肝、鳃、皮肤、皮下肌肉、肾中均能检测到ALP的表达。3.变态前的仔鱼身体总ALP活力约为出膜时的卵中酶活力的4倍,在变态期酶活力变化不大,但是在变态后期上升明显。甲状腺素(T4)在变态中对酶活力增加有明显的促进作用。作为甲状腺素合成抑制剂,硫脲(TU)能降低仔鱼体内酶活性。4.使用ALP的活性抑制剂左旋咪唑(TRM)处理的仔鱼消化功能和头部骨骼的发育受到一定的影响。消化道内食物很少,消化道上皮层中ALP免疫显色反应减弱。头部骨骼中发现较多骨细胞死亡而只留下一些细胞碎片,超过95%的仔鱼不能完成右眼的移位就发生死亡,变态比对照组迟缓。5.定量PCR结果表明,变态中期ALP基因表达量只有初期的1/2,变态后期却明显上升到变态初期的2.5倍,T4和TU处理对ALP基因表达产生影响的在中期和后期表现明显。中期T4组明显高于对照组和TU组,变态后期T4组和TU组均低于对照组。; 陈晓武施志仪顾一峰; 关键词：牙鲆碱性磷酸酶甲状腺素

海带褐藻糖胶的药理活性被引量：55: 2000年; 施志仪郭亚贞王慥; 关键词：海带褐藻糖胶药理活性

三角帆蚌外套膜细胞培养与组织培养的比较被引量：14: 2002年; 通过对三角帆蚌外套膜外表皮进行组织培养和细胞培养的比较研究 ,表明组织培养比细胞培养更易获得大量游离细胞。并且通过原子吸收光谱分析 ,证明体外培养的三角帆蚌组织和细胞皆能正常分泌珍珠质。; 施志仪李巍李松荣楼允东; 关键词：三角帆蚌外套膜细胞培养上皮细胞珍珠囊

海带褐藻糖胶组成结构与药理活性的研究: 郭亚贞施志仪王造严伯奋; 文献传递

三角帆蚌外套膜碱性磷酸酶与钙代谢的关系被引量：22: 2008年; 利用切片染色确定了碱性磷酸酶在三角帆蚌外套膜中主要分布在黏膜层。在培养的细胞中分别加入碱性磷酸酶激活剂、抑制剂和放线菌酮,并用原子吸收光谱仪检测钙离子的含量和碱性磷酸酶的活力,结果表明:当加入碱性磷酸酶激活剂时,其活力升高,钙离子浓度升高;而加入抑制剂时,其活力降低,钙离子浓度相应下降;加入放线菌酮时,碱性磷酸酶和钙离子浓度开始升高,后来下降,其结果与蛋白质抑制剂的作用相一致,综合上述结果,表明三角帆蚌外套膜的碱性磷酸酶有促进钙代谢的作用。; 施志仪李勇谢先中; 关键词：三角帆蚌碱性磷酸酶钙代谢激活剂抑制剂

牙鲆甲状腺激素受体TRαA蛋白的特征分析: 2012年; 属于核受体超家族成员的甲状腺激素受体TRαA在牙鲆骨骼肌和消化管上皮细胞中强烈表达,调节其组织特异性发育,在牙鲆变态中对其形态结构和生理功能变化起着重要的作用。为了预测TRαA蛋白的抗原表位、二级结构及三维结构,分析该基因的结构特征。我们以TRαA蛋白序列为基础,采用Garni-er-Robson方法、Chou-Fasman方法和Karplus-Schuhz方法预测TRαA蛋白质的二级结构;用Kyte-Dooht-tle方案预测蛋白质的亲水性;用Emini方案预测蛋白质的表面可能性;用Jameson-Wolf方案预测氨基酸的抗原性指数,利用PROSITE数据库在线网络服务器与SMART服务器、结合Cn3D软件分析牙鲆TRαA蛋白三维结构,为实验方法探索TRαA蛋白的抗原表位和制备多克隆抗体提供理论依据。; 王劲松刘华施志仪; 关键词：牙鲆基因结构分析

牙鲆Ⅰ型甲腺原氨酸脱碘酶基因片段的克隆及序列分析: 2006年; 在GenBank中查找到已知的斑马鱼、奥尼罗非鱼、金头鲷、爪蟾等物种的Ⅰ型甲腺原氨酸脱碘酶的基因序列并运用Primer Premier 5.0软件对这些物种的Ⅰ型甲腺原氨酸脱碘酶基因序列进行同源性分析。依据同源性较大的保守区基因序列设计一对引物,并提取变态期牙鲆仔鱼总RNA作为模板进行RT-PCR,得到一条cDNA片段。将产物连接到T载体中,转化、扩增重组质粒。提取大肠杆菌中的重组质粒进行DNA测序。将DNA测序所得到的基因序列翻译成蛋白序列和已知的奥尼罗非鱼、金头鲷、底鳉、斑马鱼的Ⅰ型甲腺原氨酸脱碘酶基因序列进行同源性分析。结果显示,利用RT-PCR的方法扩增出一条280 bp的目的基因片段,比对结果发现其和奥尼罗非鱼、金头鲷、底鳉、斑马鱼的Ⅰ型甲腺原氨酸脱碘酶基因的蛋白序列的同源性分别为85%,83%,81%,71%。对蛋白序列进行生物信息学分析发现整个蛋白序列中无信号肽,无糖基化位点,无跨膜结构域,但含有一个典型的T4_deiodinase结构。在N-端第69～70区段有β-折叠中心;第35～37区段可能形成转角或无规则卷曲;第8～13区段,第16～20区段等区段是柔性区域。D1蛋白N端第8～11区段,第47～55区段,第90～91区段为优势抗原表位区域。本实验所获得的基因序列是前尚未见报道的牙鲆Ⅰ型甲腺原氨酸脱碘酶基因序列的一部分,为进一步研究该基因的结构与生物学功能奠定了基础。; 刘华施志仪; 关键词：牙鲆克隆

牙鲆发育中ALP基因表达图式及功能分析: 为研究碱性磷酸酶(ALP)在牙鲆发育变态中的表达与功能,采用组织学和分子生物学的方法对牙鲆ALP进行了研究.结果如下,1.组织染色显示原肠期胚体中即可以检测到ALP的活性.出膜后,在头和背部的活性比较强,而在身体的中间内...; 陈晓武施志仪; 关键词：牙鲆碱性磷酸酶甲状腺素

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