陕西理工大学生物科学与工程学院中德天然产物研究所
- 作品数：15 被引量：43H指数：5
- 相关机构：阜阳师范大学生物与食品工程学院更多>>
- 发文基金：陕西省教育厅科研计划项目陕西省科学技术研究发展计划项目国家重点引智项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 嗜水气单胞菌外膜蛋白AH6169的生物信息学分析及其原核表达被引量：5
- 2021年
- 为嗜水气单胞菌外膜蛋白AH6169亚单位疫苗的研究奠定理论基础,采用生物信息学方法分析了AH6169的理化性质、结构与功能;分子克隆构建AH6169表达菌株,正交试验筛选其最佳诱导表达条件;通过包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化AH6169蛋白;小鼠免疫蛋白制备多克隆抗血清;Western blotting鉴定抗血清特异性与效价;酶联免疫法体外模拟AH6169抗血清与重要水产病原菌的相互识别作用。结果表明,AH6169属跨膜蛋白,无规则卷曲占全序列46.79%,延伸25.49%,α-螺旋22.69%;不同种类的气单胞菌AH6169蛋白保守性较高;成功构建AH6169表达菌株,最佳表达条件为诱导时菌液浓度OD600=0.8,IPTG浓度0.1 mmol·L^(-1),32℃诱导8 h;纯化获得AH6169蛋白,制备的AH6169小鼠抗血清具有较好的特异性,且效价达到1∶1 600;AH6169蛋白抗血清与嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌和溶藻弧菌存在相互识别作用。说明AH6169蛋白有较好的抗原性,AH6169可为不同种类的气单胞菌提供交叉免疫保护作用,并且其细胞表位较为丰富,可能是一种潜在的疫苗候选成分。
- 康超荣娜简思杰孙薇刘祥陈琛陈春琳
- 关键词：嗜水气单胞菌抗原性
- 抗菌肽SMAP-29在大肠杆菌中表达条件的优化及纯化研究被引量：3
- 2018年
- 将前期构建的含有pSUMO-SMAP-29的重组质粒转入宿主菌Escherichia coli BL21,对表达菌株的表达条件进行优化,考察诱导剂IPTG浓度、诱导温度和诱导时间对融合蛋白SUMO-SMAP-29表达的影响,用SDS-PAGE电泳、Quantity One及SPSS软件进行分析,并将融合蛋白通过Ni柱进行亲和纯化。研究结果表明,IPTG终浓度为0.50 mmol/L、诱导温度为30℃、诱导表达时间为3 h时融合蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的11.35%。确定重组融合蛋白SUMO-SMAP-29的最优表达条件并纯化得到融合蛋白SUMO-SMAP-29。
- 吴三桥赵冠杰万健陈琛
- 关键词：抗菌肽大肠杆菌原核表达
- 嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的原核表达、纯化与免疫原性研究被引量：1
- 2023年
- 【目的】评价嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的免疫学功能,为探索嗜水气单胞菌渔用疫苗候选抗原提供理论依据。【方法】通过生物信息学分析AHA2991氨基酸序列,揭示不同菌株间的亲缘关系;分子克隆构建AHA2991表达菌株并确定最佳诱导条件;包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化获得AHA2991并免疫红鲫;Western blotting检测AHA2991红鲫血清的特异性与效价;ELISA模拟AHA2991红鲫血浆与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)测定与细胞吞噬作用评价AHA2991非特异性免疫功能;组织病理学切片探究AHA2991免疫对红鲫内脏的影响情况。【结果】AHA2991蛋白家族在不同菌株间具有同源性,不同菌株间亲缘关系较近,尤其在气单胞菌间亲缘关系更近;AHA2991的最佳诱导条件为:菌液浓度OD600=1.0,IPTG终浓度0.1 mmol/L,在28℃下诱导8 h。红鲫AHA2991抗血清具有良好的特异性,其效价为1∶800;体外AHA2991血浆对嗜水气单胞菌具有识别作用,滴度可达1∶3200;ACP、AKP指标及细胞吞噬作用均显示AHA2991激活红鲫非特异性免疫;组织病理学切片表明AHA2991免疫对红鲫内脏结构无影响。【结论】嗜水气单胞菌AHA2991具有良好的免疫原性,有望成为嗜水气单胞菌渔用疫苗的候选抗原成分。
- 简思杰晁嘉孙薇陈春琳陆娟刘勇刘祥
- 关键词：嗜水气单胞菌组织病理学主动免疫
- 鱼类致病荧光假单胞菌外膜蛋白LolB多克隆抗体制备、鉴定与免疫活性分析
- 2023年
- 以荧光假单胞菌的外膜蛋白LolB为研究对象,评价其免疫学功能。生物信息学分析各菌株间LolB的亲缘关系;分子克隆构建LolB蛋白的表达菌株并确定最佳诱导表达条件;SDS-PAGE切胶纯化LolB蛋白并免疫红鲫;Western blotting检测红鲫LolB血清的特异性与效价,ELISA体外模拟红鲫LolB血清与荧光假单胞菌的相互识别作用,免疫因子(ACP、AKP、LZM、IgM)与细胞吞噬作用测定,抗氧化因子(CAT、SOD、MDA、GSH-Px)、炎症因子(IL-1β、TNF-α)表达分析及组织病理学探究LolB蛋白的免疫保护作用。结果显示,LolB在假单胞菌属间同源性和亲缘性更近,LolB抗血清可能提供交叉免疫保护作用。原核表达纯化LolB蛋白,获得最佳诱导表达条件。红鲫LolB抗血清具有较好特异性,效价达1∶200;且抗血清与荧光假单胞菌在体外存在相互识别作用;免疫因子以及细胞吞噬作用均呈上升趋势,表明LolB激活红鲫的非特异性免疫。红鲫免疫LolB蛋白攻毒荧光假单胞菌后,抗氧化因子以及炎症因子呈下降趋势,表明LolB蛋白具有抗氧化和消炎作用;组织病理学切片显示LolB蛋白保护红鲫的肾脏、脾脏、肠道的完整性。荧光假单胞菌LolB具有良好的免疫原性,有望成为渔用疫苗的候选抗原。
- 晁嘉简思杰孙薇陈锐丁锐丁锐刘祥
- 关键词：荧光假单胞菌主动免疫组织病理学红鲫
- 鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白P5的原核表达、免疫保护及抗血浆杀菌作用研究被引量：5
- 2021年
- 研究鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白P5的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。采用生物信息学方法分析P5的理化性质;分子克隆构建P5表达菌株并确定其最佳诱导表达条件,包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化P5蛋白,并免疫小鼠制备P5抗血清;Western blotting检测抗血清特异性与效价,免疫酶联法模拟P5抗血清对嗜水气单胞菌的体外识别;P5抗血清被动免疫红鲫,攻毒以评价P5蛋白的免疫保护功能;Western blotting分析P5蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用。结果表明:P5蛋白在气单胞菌属间同源性较好,进化保守。成功克隆表达、纯化P5蛋白,其最佳表达条件为:诱导时菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG浓度0.5 mmol/L,32℃诱导8 h。Western blotting验证P5抗血清特异性较好,效价达到1∶1600,ELISA显示P5抗血清与嗜水气单胞菌存在识别作用,表明P5蛋白具有较好的免疫原性与抗原性。被动免疫显示P5抗血清对红鲫的免疫保护率为显著性的56%,具有良好的免疫保护作用。Western blotting发现P5蛋白可通过表达下调有效抵抗鱼血浆的杀菌作用,表明其可能与细菌抗血浆杀菌有关。综上,嗜水气单胞菌外膜蛋白P5是一种保护性抗原,有望作为防治嗜水气单胞菌感染的疫苗候选成分。
- 荣娜简思杰孙薇康超伍娜娜刘祥
- 关键词：嗜水气单胞菌被动免疫
- 绿原酸的提纯分析技术及策略被引量：9
- 2019年
- 绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝、降糖降脂、调节免疫、神经保护、降压、抗氧化等多种生物活性,临床上可用于抗菌解毒、消炎利胆。绿原酸具有易氧化、稳定性差,同分异构体较多且性质差异小,提取纯化难度大,导致绿原酸的提取率低,成本高,因此绿原酸的高效提制是天然产物研究中一个热点之一。重点概述了绿原酸的提取方法,包括传统提取法、物理提取法、酶解法、超临界流体萃取法。绿原酸的纯化方法,包括膜分离、聚酰胺柱层析、大孔吸附树脂分离、高效液相色谱、高速逆流色谱法,并分析了各种方法的优缺点和应用效果,提出了绿原酸提取纯化的技术方案,为建立高效低廉的高纯度绿原酸提取纯化提供参考。
- 徐尤美蔺蓓蓓郑红星陈琛
- 关键词：绿原酸纯化生物活性
- 探针药物法评价不同羟基位点苯乙酸对4种肝微粒体酶的代谢影响被引量：1
- 2021年
- 通过钙沉淀法制备大鼠肝微粒体,将3-羟基苯乙酸、4-羟基苯乙酸、3,4-二羟基苯乙酸与4种亚型酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4)的特异性探针药物(非那西丁、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、睾酮)在体外孵育,应用高效液相色谱法检测探针底物浓度,间接获得相对酶活性和计算半数抑制浓度(IC 50),从而对不同羟基位点苯乙酸对大鼠肝微粒体主要的CYP450酶系活性进行评价。发现不同羟基位点苯乙酸对大鼠肝微粒体主要的4种CYP450酶无抑制作用,药效作用安全,可为药物合成奠定基础。
- 康超郝督简思杰荣娜刘祥丁锐
- 关键词：苯乙酸细胞色素P450肝微粒体
- 大肠杆菌免疫蛋白OmpA生物信息学分析及表位多肽疫苗设计被引量：4
- 2019年
- 为进一步提高大肠杆菌外膜蛋白(OmpA)的免疫效果,对大肠杆菌的OmpA进行生物信息学分析并设计其表位多肽重组疫苗。运用DNAMAN 8.0和MEGA 5.0分别对OmpA进行同源性及系统发生分析,通过ExPASy-ProtParam对OmpA的理化性质进行分析,分别采用Signal P 4.1与TMHMM Serverv.2.0对OmpA进行信号肽和跨膜结构预测,应用SOPMA和SWISS-MODEL对OmpA进行二级结构和三级结构预测,通过String进行蛋白质互作网络分析,使用BepiPred 1.0和ABCpred方法预测OmpA的B细胞抗原表位,利用神经网络法与MHC-Ⅱ类分子结合肽在线预测程序预测OmpA的CTL和Th细胞抗原表位,采用DNASTAR.Lasergene.v 7.1拼接获得优势抗原表位。进化关系结果显示,OmpA在肠道菌属间遗传进化关系较近,OmpA抗体可能为不同种肠道细菌的感染提供交叉免疫保护。OmpA为亲水性蛋白质,第1—21位氨基酸为信号肽位置,具跨膜结构。OmpA的二级结构中以无规则卷曲(45.66%)、α-螺旋(31.79%)、β-片层(16.18%)和β-转角(6.36%)为主,其三级结构为桶状结构。OmpA与par、coa蛋白之间存在互作。OmpA可能有4个B细胞抗原表位,1个CTL细胞抗原表位,1个Th细胞抗原表位,且重组获得抗原性较好的OmpA表位多肽。
- 伍娜娜荣娜康超刘祥陈琛陈春琳丁锐吴三桥
- 关键词：大肠杆菌OMPA生物信息学分析
- 大肠杆菌外膜蛋白F的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析被引量：8
- 2019年
- 为获得大肠杆菌外膜蛋白OmpF并对其耐药性功能进行研究,通过分子克隆技术构建OmpF蛋白重组表达菌株,利用正交试验法获得OmpF菌株的最佳培养条件和表达条件,采用SDS-PAGE电泳切胶纯化方法获得OmpF蛋白,免疫小鼠获得OmpF蛋白多克隆抗体,Western blotting方法检测多克隆抗体的特异性,使用DNAMAN 8.0与MEGA 5.0软件对OmpF蛋白进行同源性和系统发生分析。结果显示,PCR扩增获得1 089 bp的ompF基因,成功构建pET-32a-ompF载体,其诱导表达产物分子质量为38 ku,与预期大小一致。正交试验获得OmpF菌株的最佳培养条件为葡萄糖浓度为0,转速为230 r/min,装液量为50 mL;最佳表达条件为诱导时菌液OD_(600)为0.5,IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为8 h,温度为28℃。SDS-PAGE切胶纯化获得高纯度的OmpF蛋白后,利用Western blotting证实OmpF蛋白抗血清具有较好的特异性。OmpF蛋白序列系统发生分析发现,OmpF蛋白在不同种类的细菌中具有较高的同源性,OmpF蛋白产生的抗体可能为不同种细菌的感染提供交叉免疫保护作用,并且不同种类细菌中OmpF蛋白可能具有相似的分子功能。
- 伍娜娜康超荣娜刘祥陈春琳陈琛丁锐吴三桥
- 关键词：原核表达正交试验生物信息学分析
- 重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究被引量：2
- 2019年
- 为获得铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能。本研究采用分子克隆构建OprD蛋白重组表达菌株,用正交试验设计方法获得OprD菌株的最优表达条件和培养条件,通过SDS-PAGE切胶的方法纯化OprD蛋白,小鼠免疫制备OprD多克隆抗血清,蛋白质印迹法检测抗血清的特异性。使用DNAMan和MEGA软件对OprD蛋白进行同源性和系统发生分析。结果表明,OprD重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果、OprD蛋白表达与纯化条带大小分别与预测相符。正交试验获得OprD菌株的最优培养条件为:葡萄糖浓度为0,转速230r/min,装液量为50mL;最优表达条件为:菌液OD600=0.8时加入终浓度为0.3mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),37℃诱导12h。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得纯度较高的OprD蛋白。蛋白质印迹法证实OprD蛋白抗血清具有较好的特异性。OprD蛋白序列系统发生分析发现,同菌属细菌存在较高的同源性,并且亲缘关系较近的细菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能。
- 伍娜娜荣娜康超刘祥陈琛陈春琳马心怡吴三桥
- 关键词：铜绿假单胞菌多克隆抗体
