清华大学深圳研究生院生命科学与海洋生物学实验室
- 作品数：13 被引量：55H指数：4
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- 相关机构：大连大学生命科学与技术学院大连大学附属新华医院大连大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 过氧化氢对PC12细胞中硫氧还蛋白和APE/Ref-1基因表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的观察过氧化氢(H2O2)对硫氧还蛋白和APE/Ref-1基因表达的影响,探讨H2O2预处理对神经细胞具有适应性保护的分子机制。方法以PC12细胞作为神经细胞模型,以200和400μmol/L浓度的H2O2处理PC12细胞,用MTT法检测细胞的损伤程度,以Western blot方法测定硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达水平。结果200μmol/LH2O2促进PC12细胞的硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达,400μmol/LH2O2也促进PC12细胞的APE/Ref-1表达,但使PC12细胞的硫氧还蛋白表达显著降低。结论促进硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达可能是低浓度H2O2预处理对神经细胞具有适应性保护的分子机制。
- 谢振华刘长振王爱民马春
- 关键词：PC12细胞过氧化氢
- 用于哺乳动物细胞转染的高纯度质粒DNA的制备被引量：6
- 2007年
- 目的:建立简便高效、成本低廉和安全无污染的高纯度质粒提取方法。方法:在乙酸铵方法的基础上加以改进,主要改进之处在于增加了用聚乙二醇纯化质粒的步骤,并对溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的成分和具体实验参数也做了合理的改进,以最少的步骤,充分去除了残存杂质,保证了质粒的超纯状态。结果:用本方法提取的质粒与用QIAGEN plasmid midiKit提取的质粒在理化指标上没有差别,对哺乳动物胞具有同样的转染效率。结论:本方法可完全取代QIAGEN公司的试剂盒用于提取超纯质粒。
- 谢振华史小军蔡国平
- 关键词：质粒转染
- PC12细胞中氧化还原因子-1对过氧化氢和谷氨酸损伤的不同反应
- 目的通过研究 PC12细胞抗氧化应激的氧化还原因子-1(apurinic/apyrimidimic endonuclase/redox factorl, APE/Ref-1)分子在过氧化氢和谷氨酸损伤过程中表达水平的变化...
- 谢振华刘长振王爱民马春
- 关键词：PC12细胞APE/REF-1H2O2
- 文献传递
- 人重组t-PA突变体与β2糖蛋白Ⅰ的相互作用被引量：4
- 2007年
- 利用重组DNA技术和原核表达,得到了人体组织型纤溶酶原激活剂t-PA的缺失型突变体r-PA和Kringle2功能区,并在变性条件下通过金属螯合层析纯化得到纯度较高的r-PA和Kringle2重组蛋白.用纤维蛋白活性平板检测到复性的r-PA和Kringle2都具有体外纤溶活性,并且β2糖蛋白Ⅰ(β2-glycoprotein Ⅰ,β2GPⅠ)对r-PA的体外纤溶活性有显著的促进作用:在β2GPⅠ浓度为1μmol/L和4μmol/L时,r-PA的纤溶活性分别提高1.8和2.1倍.ELISA方法检测发现,β2GPⅠ与r-PA,Kringle2均有特异性结合,并且随着β2GPⅠ浓度的增加,它与包被在酶标板上的重组蛋白r-PA和Kringle2的结合都有趋于饱和的趋势,但其饱和浓度却均远高于β2GPⅠ与t-PA结合的饱和浓度.
- 张春娥孙石静蔡国平
- 关键词：T-PA纤溶活性ELISA
- 硫氧还蛋白和氧化/还原因子的融合荧光蛋白载体的构建及在293T细胞中的分布
- 2008年
- 目的构建硫氧还蛋白和氧化/还原因子的融合荧光蛋白真核表达载体,并在293T细胞中得到表达和定位。方法以RT-PCR方法从PC12细胞中克隆氧化/还原因子(APE/ref-1)的cDNA,然后亚克隆构建APE/ref-1-GFP融合真核表达载体。以PCR方法将质粒pQE30-TRX上的硫氧还蛋白cDNA亚克隆到pDsred1-1质粒上,然后将硫氧还蛋白-DsRed融合基因序列亚克隆到pCMV5质粒上,构建硫氧还蛋白-DsRed融合真核表达载体.通过磷酸钙转染293T细胞,以荧光显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果成功构建了硫氧还蛋白-DsRed和APE/ref-1-GFP融合表达载体,并在293T细胞中得到表达,APE/ref-1-GFP融合蛋白定位在293T细胞核内;硫氧还蛋白-DsRed融合蛋白定位在293T细胞质和细胞核内。结论为进一步研究硫氧还蛋白和APE/ref-1之间的动态相互作用奠定基础。
- 谢振华
- 关键词：硫氧还蛋白绿色荧光蛋白红色荧光蛋白
- 蜘蛛毒素的研究进展及其相关应用被引量：12
- 2009年
- 蜘蛛毒素含有多种化学成分,除毒性作用外这些物质对机体产生多重影响并具有多种活性。近年来,大量新的毒性组分不断被分离纯化,其结构和功能性作用被广泛深入研究,蜘蛛毒素成为了生物毒素领域新的研究热点。本文对蜘蛛毒素在离子通道作用机制方面的最新研究进展进行了阐述,同时还探讨了蜘蛛毒素在医学实践中新的应用和发展。
- 王梧霖史小军米锡阳侯天德
- 关键词：蜘蛛毒素离子通道
- 快捷提取能经受过夜酶切的质粒DNA被引量：3
- 2006年
- 利用醋酸铵进行小量质粒提取,该方法不但快捷、经济和环保,所提质粒纯度能经受过夜酶切。
- 谢振华史小军蔡国平
- 关键词：质粒酶切
- 在单个PCR管内快捷完成定点突变被引量：8
- 2006年
- 采用大引物方法,利用质粒多克隆位点两侧的普通测序引物作为旁侧引物,在单个PCR管内,经2个步骤共34个循环进行定点突变.该方法通过优化模板和引物的量达到降低PCR循环次数,通过加入10个在68℃复性条件下的PCR循环达到增加突变效率而无需胶纯化.本方法达到平均62%的突变效率,而且全长扩增产物的产率很高.
- 谢振华史小军蔡国平
- 关键词：定点突变PCR
- 癌细胞膜流动性与蛋白激酶C相关性的初步探讨被引量：1
- 2010年
- 细胞膜流动性是细胞的重要物理性质,与细胞功能密切相关。为深入认识细胞膜与细胞功能的关系,研究癌症机理及寻找预防治疗的方法提供新的视角和实验数据,采用荧光漂白后恢复技术检测皮肤癌A431细胞和正常HACAT细胞的膜流动性,同时测定蛋白激酶C的活性及mRNA的表达。通过激光扫描共聚焦显微镜的荧光恢复曲线计算得知A431细胞的荧光恢复率和扩散系数均低于HACAT细胞,即A431细胞膜流动性低于HACAT细胞;而蛋白激酶C活性、mRNA表达量却高于正常细胞。以上差异都有统计学意义(P<0.05)。由此推断癌细胞膜流动性与蛋白激酶C相互作用、相互影响,彼此之间存在密切的关系。
- 丁超高泽红史小军马国丽
- 关键词：细胞膜流动性癌症
- 小鼠脑缺血再灌注模型的构建及条件优化被引量：13
- 2010年
- 目的:构建小鼠的脑缺血再灌注模型,并对其进行优化。方法:通过对线栓法缺血再灌注脑损伤模型的各个因素的对比实验,在线拴位置、线径、进线深度、小鼠种类等方面对该方法进行了优化改进。结果:造模后的脑片经TTC染色,梗死区域清晰;神经功能评分的体征明显。现有条件下构建的小鼠MCAO模型,成功率可以达到80%以上,成活率可以达到90%以上。与对照组相比,小鼠MCAO模型组血清SOD活性及MDA水平有显著变化(P<0.01)。结论:经改进和优化,小鼠脑缺血再灌注模型的成功率和成活率大大提高且症状明显,对缺血缺氧性神经损伤研究具有一定的参考价值。
- 王梧霖史小军侯天德米锡阳
- 关键词：小鼠脑缺血再灌注模型
