苏州大学医学部生化工程研究所
- 作品数：23 被引量：37H指数：3
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- 健忆口服液对老年小鼠全脑组织重量、单胺类神经递质和β淀粉样蛋白作用的实验研究被引量：1
- 2005年
- 目的观察健忆口服液对老年小鼠脑组织重量、单胺类神经递质和β淀粉样蛋白(Aβ)的作用.方法设昆明种老年小鼠(18～20月龄)中药治疗组(健忆口服液20 g·kg-1·d-1)及对照组;另设8～10月龄小鼠为青年对照.灌胃给药,疗程为4周.观察指标:1、小鼠脑重量;2、全脑组织去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量;3、全脑组织Aβ含量.结果老年鼠的脑重量及脑组织NA、DA、5-HT和Aβ含量变化均较青年小鼠有非常显著差异(P＜0.01);服药四周后治疗组上述指标变化,与对照组比较均有显著差异(P＜0.05),但与青年鼠比较仍有显著差异(P＜0.05).结论健忆口服液对老年小鼠脑组织Aβ具有明显降低治疗作用,提示可能对阿尔茨海默病相关指标具有相似治疗作用;其对老年小鼠脑萎缩和单胺类神经递质下降也有明显改善治疗作用,提示可能具有多水平、多靶点的治疗作用.
- 王纯庠吴士良江国荣张露蓉王建义何焕荣
- 关键词：单胺类神经递质Β淀粉样蛋白老年小鼠小鼠脑组织灌胃给药
- 健忆口服液对老年小鼠脑内β淀粉样蛋白和Tau蛋白的作用
- 2005年
- 目的观察健忆口服液对老年小鼠脑组织中β淀粉样蛋白(Aβ)和Tau蛋白的作用及其与单胺类神经递质的相关性.方法设昆明种老年小鼠(18～20月龄)为中药治疗组(健忆口服液20g·kg-1·d-1)和对照组;另设昆明种小鼠(8～10月龄)为青年对照组.灌胃给药2～4周.检测:小鼠全脑组织Aβ、Tau蛋白、去甲肾上腺素(NA).结果青年与老年鼠相比全脑组织NA、Aβ和Tau蛋白含量水平差异均有高度显著性(P<0.01);服药2周后,治疗组Aβ含量变化较对照组差异有显著性(P<0.05);疗程4周时,NA、Aβ和Tau蛋白含量变化,在治疗组与对照组之间差异均有高度显著性(P<0.01),但与青年鼠比较差异仍有显著性(P<0.05);老年小鼠脑组织NA含量与Aβ、Tau蛋白含量之间,在对照组和治疗组均无显箸相关性.结论健忆口服液对老年小鼠脑组织Aβ和Tau蛋白具有明显改善治疗作用,提示可能对阿尔茨海默病相关指标具有相似治疗作用;NA与Aβ、Tau蛋白无相关性,不能相互替代检测.
- 王纯庠吴士良江国荣张露蓉王建义何焕荣
- 关键词：老年小鼠Β淀粉样蛋白TAU蛋白小鼠脑组织昆明种小鼠脑内
- β3GnT8基因对HL60细胞体外侵袭能力的影响被引量：1
- 2014年
- 目的：初步探讨β3GnT8/GalT7基因对HL60细胞体外侵袭的作用。方法通过脂质体介导将实验室构建好的β3GnT8真核正义表达载体pEGFP-C1-T8-Sense和反义表达载体pEGFP-C1-T8-AntiSense转染入HL60细胞；RT-PCR和Western blot检测浸润转移相关的功能基因TGFβ1、MMP2、MMP14在mRNA水平和蛋白质水平的表达变化；Transwell侵袭实验检测β3GnT8对HL60细胞侵袭转移能力的影响。结果随着β3GnT8表达上调，细胞侵袭能力高于对照组（P＜0.05），MMP2、MMP14在mRNA和蛋白质水平的表达上调，而TGFβ1表达下调；随着β3GnT8表达下调，细胞侵袭能力下降，MMP2、MMP14在mRNA和蛋白质水平的表达下调，而TGFβ1表达上调。结论β3GnT8可在体外增强HL60细胞的侵袭能力，而该作用可能源于它能够诱导肿瘤侵袭相关蛋白的表达变化。
- 行书丽董永书吴士良
- c-jun siRNA的构建及其对胃癌细胞株SGC7901中β3GnT8基因表达的影响
- 2012年
- 目的 构建c-jun干扰载体,有效沉默胃癌SGC7901细胞株中的c-jun基因表达,研究其对胃癌SGC7901细胞株中β3GnT8基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对c-jun基因的靶序列设计合成四条siRNA,将四条siRNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的c-jun siRNA载体质粒pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1949、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1050、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1111、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1276通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染SGC7901细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,通过RT-PCR法检测c-jun和β3GnT8基因mRNA的表达.结果 ①成功构建了四条正确的c-jun siRNA表达质粒;②成功筛选出一条对c-jun有明显抑制作用的siRNA干扰质粒,阻断c-jun表达后,糖基转移酶β3GnT8的表达受到明显抑制.结论 构建的c-jun siRNA表达质粒可以有效抑制胃癌SGC7901细胞株的c-jun基因表达,同时抑制糖基转移酶β3GnT8的表达,为研究胃癌的分子机制提供了一定的理论基础.
- 邹士涛姜智周未吴士良
- 关键词：C-JUNSIRNA胃癌细胞SGC7901
- 人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研究
- 2006年
- 目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论:各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化。
- 杭赛宇吴士良
- 关键词：结构域系统进化树
- 抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建及瞬时表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建及瞬时表达抗人CD28鼠-人嵌合抗体。方法采用基因工程技术,从分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:2F5)中克隆出抗体重链和轻链可变区基因及相应信号肽编码序列。分别与人免疫球蛋白IgG1恒定区重、轻链基因拼接,构建含有重组基因的pIRES表达质粒pIRES/h2F5。转染293T细胞并用抗性药物G418选择培养。采用流式细胞术,检测瞬时转染细胞后嵌合抗体的表达情况。结果抗人CD28鼠人嵌合抗体得到表达并能与CD28分子特异性结合。结论抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建和瞬时表达是成功的,为后续构建稳定分泌抗人CD28鼠-人嵌合抗体的CHO基因转染细胞株奠定了基础。
- 程钢陈永井马震宇费敏孙中文徐耀瑜胡玲玲邱玉华
- 关键词：CD28单克隆抗体嵌合抗体
- 人类新型β3半乳糖基转移酶基因β3GalT7的克隆和鉴定被引量：8
- 2005年
- 从人肺cDNA文库中克隆到人类β3-半乳糖基转移酶家族中的一个新成员β3GalT7(AY277592,EC2.4.1.-),并对其进行了鉴定. 该基因定位在人类染色体19q13.2. 它包含一个1 191 bp的开放阅读框(ORF). 编码的蛋白质包括一个信号肽和一个半乳糖基转移酶结构域,分子质量和等电点分别为43.3 ku和8.37. 从原核表达中获得的融合蛋白的分子质量和预测相符. RNA印迹杂交显示β3GalT7在肺、喉和回肠组织中高表达,而在舌、乳房、子宫、睾丸等组织中表达较低. 此外半定量RT-PCR显示β3GalT7在人类不同的肿瘤细胞中转录水平有明显差异.
- 周嘉梁黄超群吴士良孙其昌雷伟金美芳姜智沈宏杰
- 关键词：克隆肿瘤细胞株
- 全反式维甲酸对HL60细胞株三种糖基转移酶家族表达的影响被引量：5
- 2006年
- 目的从mRNA水平检测HL60细胞株中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(polypeptide:Nacetylgalactosaminytra -nsferases,ppGalNAcTs)、N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶家族(UDP-N-acetylglucosamine:beta-galactose betal, 3-N-acetylglucosaminyltransferases,β3GnTs)及O-连接乙酰氨基葡萄糖转移酶家族(O-linked GlcNAc transferase,OGnT)的表达情况,研究全反式维甲酸(All-transretinoic acid,ATRA)培养对不同糖基转移酶表达水平的影响。方法采用Real time RT- PCR方法从mRNA水平上研究ppGalNAcTs、β3GnTs、OGnT的表达以及加入ATRA后表达水平的变化,用3H掺入试验检测加入ATRA对细胞增殖的影响,流式细胞仪观察细胞周期情况,激光共聚焦显微镜观察细胞形态的变化。结果加入ATRA 后HL60细胞株中β3GnT1、ppGalNAcT2表达量急剧增加,细胞阻滞在G2／M期,细胞的生长增殖受到抑制,细胞向粒系分化。结论加入分化诱导剂后细胞发生显著变化,提示β3GnT1、ppGalNAcT2与白血病细胞株的分化可能有一定关系。
- 杨静赵凝郭向红胡鹤娟杭赛宇吴士良
- 关键词：全反式维甲酸糖基转移酶HL60诱导分化
- BSP siRNA 的构建及其对成骨样细胞株MC3T3-E1相关基因表达的影响
- 2011年
- 目的 构建BSP干扰表达载体,有效沉默小鼠成骨样细胞MC3T3-E1 Subclone 14细胞的BSP基因表达,研究其对MC3T3-E1 Subclone 14增殖分化过程中OCN等成骨相关基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对BSP基因mRNA序列设计四条可能的小干扰RNA（siRNA）,将这四条小干扰RNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的BSP siRNA 表达载体pGPU6/GFP/Neo-siBSP-1、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-2、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-3、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-4通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染MC3T3-E1 Subclone 14细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,以RT-PCR 检测BSP和OCN等成骨相关基因mRNA的表达.结果 ①成功构建四条正确的BSP siRNA 表达载体;②成功筛选出一条对BSP有明显抑制作用的siRNA干扰载体,阻断BSP表达后,成骨相关基因cbfa1和OCN的表达均受到明显抑制.结论 构建的BSP siRNA 表达载体可以有效抑制MC3T3-E1 Subclone 14细胞的BSP基因表达,同时抑制相关基因cbfa1和OCN的表达,从而影响该成骨细胞形态与功能,为骨转移等相关疾病的治疗提供了一定的实验基础.
- 王建浩徐岚丁庆伟郑磊姜智吴士良
- 关键词：BSPSIRNA转染
- 人类β3-N-乙酰氨基葡萄糖基(β3半乳糖)转移酶β3GnT8/GalT7的抗体制备、免疫组化分析及其亚细胞定位
- 2009年
- 目的探讨β3GnT8(β3GalT7,AY277592,EC2.4.1.-)基因(人类β3-糖基转移酶家族中的一个新成员)的功能。方法原核表达该蛋白,以纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗血清;以Westernblot和免疫组化分析其在多种组织细胞的表达情况;并通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位。结果获得了较纯的表达蛋白和高效价、高特异性的抗血清,并且发现该蛋白大部分位于核膜周围的胞浆中;免疫组化分析显示肿瘤细胞和组织中该酶有较高的表达,与正常组织比较具有一定的差异性。结论该实验获得了β3GnT8/β3GalT7基因的蛋白质和相应抗体,并且对该蛋白进行了亚细胞定位,为对其生物学功能的进一步研究奠定了基础。
- 周嘉梁姜智孙其昌王修珍仇灏吴士良
- 关键词：抗血清免疫组化亚细胞定位
