南通大学医学院江苏省神经再生重点实验室
- 作品数：13 被引量：21H指数：3
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- 大鼠陈旧性坐骨神经缺损修复期限的实验研究被引量：6
- 2008年
- 目的探讨大鼠陈旧性坐骨神经缺损的修复期限,观察自体神经移植对大鼠陈旧性坐骨神经缺损的修复作用。方法清洁级SD大鼠36只,随机分为6组,每组6只。切除大鼠左侧部分坐骨神经,制作神经缺损模型。神经损伤后1、3、6个月用对侧自体神经修复神经缺损作为A1、B1、C1组,不予修复作为对照A2、B2、C2组。术后每周观察步态、足趾皮肤及腿部肌肉的变化。第2次术后3个月,进行电生理检查、荧光金(fluorogold,FG)逆行示踪、腓肠肌Masson染色、再生神经亮绿-变色酸2R-磷钨酸法染色与透射电镜观察。结果神经损伤后各组大鼠均有足部溃疡、跛行等失神经表现,修复术后2个月,A1、B1组溃疡愈合,跛行改善,其余各组仍有溃疡、跛行。修复术后3个月,A1、B1、C1组的运动神经传导速度分别为(21.84±6.74)、(20.02±4.17)、(16.09±8.21)m/s,组间差异无统计学意义(P>0.05)。复合肌肉动作电位(compound muscle actionpotential,CAMP)波幅分别为(12.68±4.38)、(9.20±3.43)、(1.22±0.39)mV,A1、B1组与C1组比较差异有统计学意义(P<0.05);A2、B2、C2组未记录到CAMP。FG逆行示踪观察,A1组阳性细胞最多,胞体较大,B1组居中,C1组阳性细胞最少,胞体最小。腓肠肌Masson染色示A1、B1组腓肠肌纤维形态接近正常,C1、A2、B2、C2组肌纤维明显萎缩。A1、B1、C1组肌纤维横截面积为(340.73±118.46)、(299.88±119.75)和(54.33±53.43)μm2,A2、B2、C2组为(78.60±51.38)、(65.62±25.36)和(40.93±28.22)μm2。A1、B1组与C1、A2、B2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。神经形态观察,A1组再生有髓神经纤维数量多,直径粗,髓鞘厚;B1组再生神经纤维的数量和形态与A1组相似;C1组中再生的有髓神经纤维数量少,纤维细,髓鞘薄;A2、B2、C2组则仅见SC及增生的胶原纤维。结论自体神经移植能不同程度修复缺损1个月和3个月的大鼠坐骨神经,但对缺损6个月的大鼠坐骨神经修复作用不�
- 姚健林潇哲田竑施伟焦海山王晓冬
- 关键词：陈旧性损伤坐骨神经缺损自体移植
- 大鼠坐骨神经缺损半个月后人工组织神经移植物修复的实验研究被引量：2
- 2007年
- 为了观察人工组织神经移植物对大鼠坐骨神经非新鲜损伤的修复作用。我们在成年SD大鼠左侧股中部切除部分坐骨神经制造神经缺损模型。15d后,实验组(9只)用人工组织神经移植物修复神经缺损,自体神经修复作为阳性对照(6只),保持神经缺损为阴性对照(6只)。第二次手术后3个月,电生理学、形态学结果显示实验组的再生神经虽略差于自体对照组,但明显优于缺损对照组,腓肠肌的萎缩形态学指标变化则较接近自体对照组。实验结果表明人工组织神经移植物对已缺损15d的大鼠周围神经具有较好修复作用。
- 林巍巍姚健施伟焦海山李奕王晓冬
- 关键词：坐骨神经人工组织神经移植物神经再生
- 大鼠发育过程中脊髓组织CAPON与Dexras1 mRNA表达的实验研究被引量：2
- 2007年
- 为探讨大鼠发育过程中神经型一氧化氮合酶羧基末端PSD-95/DLG/ZO-1（PDZ）结合配体（carboxy-terminal PDZ ligandof nNOS,CAPON）与Dexras1 mRNA的表达及二者的相关性,本实验采用大鼠发育模型,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtime-PCR）及原位杂交组织化学（ISH）与免疫组织化学相结合的技术检测脊髓组织中CAPON及Dexras1 mRNA的表达变化。结果表明：在胚胎14~18d的脊髓组织中,CAPON mRNA呈低水平表达,生后1d表达升高并达到高峰。从形态上看,表达于尚未分化成熟的前角,随后呈逐渐下降趋势。在生后12w,表达于脊髓后角。而Dexras1 mRNA在胚胎14d呈低水平表达,16~18d时表达升高,同样在生后1d出现表达高峰并定位于尚未分化成熟的前角,随后表达逐渐下降。生后12w,在后角有表达。根据Real-time PCR结果作直线相关分析,在生后脊髓发育过程中CAPON与Dexras1 mRNA表达呈高度相关,于生后1d共定位于脊髓前角。形态学结果显示CAPON与神经型一氧化氮合酶（nNOS）表达于相同细胞,但亚细胞定位不同。本研究表明,大鼠发育过程中,脊髓组织中CAPON及Dexras1 mRNA存在共表达,提示CAPON可能通过调节nNOS,进而激活Dexras1,在神经元的分化、突触的可塑性及突触发生过程中发挥一定的作用。
- 李欣程纯赵剑陈梦玲牛淑琼高尚峰沈爱国
- 关键词：神经型一氧化氮合酶实时荧光定量PCR原位杂交
- 正常成年小鼠脊髓内部结构的三维重建
- 2009年
- 小鼠脊髓内部结构的三维重建对于“人工脊髓”生物材料的制备具有重要意义，因此，我们利用小鼠脊髓参照图谱和三维重建工具软件对小鼠脊髓内部结构进行三维重建。方法是获得小鼠脊髓参照图谱，并利用小鼠脊髓Nissl和LFB染色切片验证其可靠性，利用Photoshop软件对获得的图谱图片进行配准和批处理。利用3D—DOCTOR软件对小鼠脊髓内部的板层和主要传导束进行分割和三维重建。结果重建出小鼠脊髓外形、脊髓灰质、板层、皮质脊髓束、薄束、楔束等结构，重建的结构具有立体感，并能在PC机中任意角度观察。
- 吴辉群耿兴云蒋葵吕广明韩笑季达峰董建成
- 关键词：三维重建连续切片小鼠脊髓
- 切割穹隆海马伞后大鼠海马中83ku差异蛋白的质谱分析
- 2009年
- 目的:探讨切割穹隆海马伞海马中具有诱导神经干细胞向神经元分化生物活性的83 ku差异蛋白的组成成分及其功能。方法:切割SD大鼠穹隆海马伞后14 d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对83 ku差异蛋白进行检测和功能分析。结果:质谱分析找到了17组肽段,这些蛋白按照其功能可以分为:细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白。结论:切割穹隆海马伞海马83 ku差异蛋白可以通过参与Rho信号通路,调控神经干细胞向神经元分化。
- 朱蕙霞秦建兵金国华田美玲张新化黄镇
- 关键词：KU蛋白海马质谱分析
- 海马放射状胶质细胞激活后Rest和Runx1t1基因的表达变化被引量：2
- 2012年
- 目的探讨经切割穹隆海马伞侧海马提取液诱导而激活的海马放射状胶质细胞的基因表达变化。方法将分离、纯化后的海马放射状胶质细胞分别加入正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液,7d后利用免疫荧光法检测两组细胞的数量和生长情况;利用基因芯片分析细胞内基因表达情况;利用实时定量PCR分析神经干细胞向神经元分化的相关基因Rest和Runx1t1的转录情况。结果与正常组相比,切割组放射状胶质细胞的数量明显增多,胞体增大,突起增粗变长。基因芯片结果显示,在所检测的709个基因中,切割组中10个基因表达明显上调,10个基因明显下调;实时定量PCR结果表明,切割组Rest和Runx1t1的转录水平均显著高于正常组(P<0.05)。结论切割穹隆海马伞海马提取液可诱导海马放射状胶质细胞的激活,提高Rest和Runx1t1基因转录水平。
- 施金洪金国华李浩明张新化朱蕙霞田美玲秦建兵
- 关键词：海马REST免疫荧光
- 施万细胞对骨髓基质干细胞向神经组织细胞分化诱导的作用被引量：3
- 2009年
- 背景:骨髓基质干细胞具有向神经组织细胞分化的多潜能特性。以往实验以化学试剂作为诱导剂加入细胞培养液中,在体外成功地诱导出神经组织细胞。目的:观察大鼠施万细胞和骨髓基质干细胞体外共培养后,骨髓基质干细胞能否被诱导向神经组织细胞分化。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-09/2008-10在南通大学医学院组织学与胚胎学教研室及江苏省神经再生重点实验室完成。材料:SPF级新生1～3d龄SD大鼠用于制备施万细胞,SPF级成年雄性SD大鼠用于制备骨髓基质干细胞,动物均由南通大学实验动物中心提供。方法:将传2代培养的骨髓基质干细胞和施万细胞分别以1×105和1×106的密度接种于transwell双层6孔细胞培养板的皿底和板底,两种细胞间隔以PET膜,其膜孔径为0.4μm,于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中进行非接触性共培养14d。另外,将施万细胞培养上清作为条件培养基,培养骨髓基质干细胞14d。主要观察指标:光镜下观察共培养后骨髓基质干细胞的形态变化;MTT检测共培养前后骨髓基质干细胞的活性;免疫荧光染色鉴定共培养后骨髓基质干细胞S-100蛋白的表达,流式细胞仪测定S-100蛋白阳性率;免疫荧光染色检测条件培养基培养后骨髓基质干细胞S-100,P75,GFAP的表达。结果:共培养后的骨髓基质干细胞形态发生改变,原来宽大扁平的胞体开始收缩,细胞胞体呈梭形,部分细胞类似施万细胞呈线性排列。共培养前后及条件培养基培养后,骨髓基质干细胞的活力无明显差异(P>0.05)。共培养14d后,骨髓基质干细胞表达施万细胞表面标记S-100蛋白,阳性率达(22.54±2.36)%。条件培养基培养14d后,骨髓基质干细胞表达施万细胞表面标记S-100蛋白,P75,GFAP。结论:施万细胞分泌因子可以诱导部分骨髓基质干细胞向神经组织细胞分化,并表达施万细胞表面标记。
- 林巍巍陈雪李奕王晓冬
- 关键词：骨髓基质干细胞施万细胞共培养
- 人工组织神经移植物对大鼠陈旧性坐骨神经缺损(60天)的修复作用被引量：3
- 2007年
- 目的观察人工组织神经移植物对陈旧性大鼠坐骨神经缺损的修复作用。方法切除成年SD大鼠部分左侧坐骨神经,饲养60d形成陈旧性坐骨神经缺损后,以人工组织神经移植物修复缺损,同时设自体神经修复和不修复两对照组。修复术后3个月做神经-肌复合电位、腓肠肌湿重及再生神经形态学检测。结果人工组织神经移植物修复组实验侧的运动神经传导速度、腓肠肌湿重、移植物远侧再生神经有髓神经纤维髓鞘厚度等结果与自体神经修复组相似。不修复对照组则未记录到神经-肌复合电位,未观察到再生神经纤维结构,腓肠肌湿重明显小于人工组织神经移植组和自体神经移植组。结论人工组织神经移植物在一定程度上能修复缺损60d的大鼠坐骨神经。
- 姚健施伟袁颖林巍巍陈雪李奕王晓冬
- 关键词：人工组织神经移植物神经再生神经桥接
- 磷酸化细胞外信号调节激酶在海马提取液诱导神经干细胞向神经元分化过程中的表达
- 2009年
- 目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路在海马提取液诱导神经干细胞向神经元分化过程中的作用。方法切割12只SD大鼠右侧穹隆海马伞,14d后分别取切割侧和正常侧海马制成匀浆,离心收集上清液,蛋白定量后备用。将获取的鼠胚海马源性神经干细胞培养在24孔板中,分成3组,每组8孔,于无血清条件下,切割组加切割侧海马提取液;正常组加正常侧海马提取液;对照组不加上述海马提取液。培养14d后进行微管相关蛋白2(MAP-2)与p-ERK的免疫荧光双标检测。结果MAP-2阳性神经元数量、胞体面积和细胞周长在切割组、正常组和对照组中依次减少,3组之间均有显著性差异。MAP-2、p-ERK免疫荧光双标细胞数量在切割组、正常组、对照组中也依次下降,但双标记细胞数占MAP-2阳性神经元数的百分比却反而依次增加,两者3组之间均有显著性差异,双标细胞大多为欠成熟细胞。结论切割穹隆海马伞侧海马提取液较正常海马提取液有明显促使神经干细胞向成熟神经元分化的作用;形态学初步证实ERK信号转导通路可能与神经干细胞向神经元分化有关。
- 朱蕙霞金国华田美玲秦建兵谭雪锋金淑仪
- 关键词：海马神经干细胞分化微管相关蛋白2磷酸化细胞外信号调节激酶
- 基于连续切片的成年SD大鼠红核三维重建
- 2009年
- 为利用三维重建工具软件对成年SD大鼠部分脑干、中脑导水管及红核结构进行三维重建，并对重建的红核进行观察和测量，探索了一种方法，即：制作大鼠脑干连续冰冻切片，Nissl染色后进行分步显微摄像并进行拼接；扫描大鼠脑定位图谱相关红核切面图像；利用PhotoshopCS3软件将上述获得的连续图像分别进行图像后处理，并利用3D-DOCTOR4．0软件分别对上述连续切片图像进行配准、分割和三维重建，对两种不同方式重建的红核进行比较。结果显示，利用大鼠脑干连续冰冻切片和大鼠脑定位图谱可以对SD大鼠红核等结构进行三维重建，重建出的结构具有立体感。可以在PC机中自由观察和测量，两种重建方法得到的红核形状大小基本类似。因此，得出结论：利用大鼠脑干的连续冰冻染色切片可以对大鼠红核进行三维重建。
- 吴辉群镇敏敏吕广明韩笑李耀富耿兴云蒋葵董建成
- 关键词：红核三维重建连续切片
