昆明医科大学生物医学工程研究中心
- 作品数：140 被引量：580H指数：12
- 相关作者：高丽辉蔡传英任晓丽刘恺何梦婷更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院药物研究所北京协和医学院药物研究所药物靶点研究与新药筛选北京市重点实验室云南师范大学教育科学与管理学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 人血管内皮生长因子A(VEGFA)的原核载体构建、蛋白表达及鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的克隆人VEGFA基因,与原核载体融合表达、纯化及其鉴定,并将其应用于肿瘤血管生长研究过程中.方法采用PCR方法扩增人VEGFA序列,将其克隆入p GEX-KG原核载体,获得p GEX-KG-h VEGFA重组质粒.将该质粒转化入E.coli菌株BL21(DE3),经IPTG诱导其表达,以GSTrap亲和层析柱纯化融合蛋白,采用SDS-PAGE电泳,Western Blot方法鉴定融合蛋白的表达.结果 PCR扩增获得了h VEGFA基因片段,经测序证实与Gen Bank公布的序列一致,重组的质粒载体经过PCR、酶切鉴定,证明重组质粒中已成功的插入了h VEGFA基因片段.成功构建了该蛋白的原核表达载体p GEX-KG-h VEGFA.结论融合蛋白在IPTG终浓度为0.5 mmol/L、25℃条件下诱导表达,并获得纯化融合蛋白.采用Western Blot的方法可检测到目的融合蛋白GST-h VEGFA的表达.
- 赵瑜胡月新卢敏南焦扬赵洪波刘建军
- 关键词：VEGFA原核载体融合蛋白
- 尾加压素Ⅱ及其受体的研究进展
- 目的 尾加压素Ⅱ(UⅡ)是目前已报道的体内具有最强收缩血管能力的活性肽，与其受体UT广泛分布于中枢及外周的各组织器官中，发挥多种生理作用.UⅡ/UT系统表达水平的变化与多种疾病进程密切相关，因此近年来被认为是治疗多种疾病...
- 周睿杜冠华李莉刘旭
- 关键词：血管收缩血管活性肽拮抗剂
- 切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备被引量：1
- 2013年
- 目的优化表达条件后纯化出切除GST标签的Met-PGEX-4T-1蛋白,制备出假单胞菌来源的多克隆抗体.方法将蛋氨酸酶(L-methionine gamma-lyase,Me)t的基因克隆至pBSK载体中,形成重组质粒pBSK-Met,采用基因工程技术将pBSK-Met与PGEX-4T-1载体连接,形成Met-PGEX.利用大肠杆菌表达系统诱导表达出Met-PGEX,采用亲和层析法过柱纯化Met-PGEX,凝血酶切除分子量为26KD的GST标签,免疫新西兰兔制备出蛋氨酸酶多克隆抗体Met PcAb,双向免疫扩散实验测多克隆抗体效价为1:128,间接Elisa法测效价1:1×105.结果成功表达纯化出纯度大于90%的Met-PGEX并制备出多克隆抗体.结论所制备的多克隆抗体可用于检测不同来源重组蛋氨酸酶抗原差异性变化.
- 张芳任晓丽罗得华罗沈强王文举张华堂田长富
- 迷迭香提取物对小鼠急性酒精肝模型保护作用研究被引量：8
- 2017年
- 研究迷迭香提取物(Rosemary Extract,RE)对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用,并从酒精代谢、脂代谢、抗氧化和抗炎几个方面探讨其作用机制。将小鼠随机分为空白对照组(Control)、模型组(Model)、欣立得组(Metadoxine Capsules,MC,200 mg/kg·d),RE剂量组80、160、400 mg/kg·d,给药30 d后建立小鼠急性酒精肝损伤模型,检测血清ALT、AST、TG、TNF-α、IL-6、IL-10浓度,肝脏MDA、SOD、GSH-Px、ADH活性,qRT-PCR检测肝脏脂肪酸合成酶(FAS)、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、细胞色素P450 2E1(CYP2E1)、过氧化物酶体增值物激活α受体(PPARα)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)mRNA的表达,HE染色观察肝脏组织病理变化。RE组小鼠血清ADH活性升高,ALT、AST和TG含量降低,醒酒时间缩短,肝脏组织脂肪变性减轻,细胞凋亡相关基因Caspase3表达降低,保护机制研究发现RE能下调FAS和ADRP基因表达,减少肝脏脂肪合成;提高抗氧化损伤酶SOD、GSH-Px活性,下调酒精代谢中ROS合成基因CYP2E1和上调抗氧化损伤和炎症基因PPARα表达,使MDA浓度降低,减轻肝脏氧化损伤;降低炎性因子TNF-α和IL-6浓度,提高抗炎因子IL-10浓度。实验结果表明RE对小鼠急性酒精肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗氧化、抗炎和脂肪代谢调节有关。
- 张志毕杨晖张媛于浩飞胡炜彦张荣平
- 关键词：迷迭香提取物脂代谢炎症
- 自噬对胰岛β细胞保护作用研究进展被引量：2
- 2015年
- 糖尿病的发生与胰岛素分泌异常密切相关。胰岛β细胞数量减少或功能缺陷直接影响胰岛素分泌。自噬是一个高度保守的过程,它能改善炎症、氧化应激和内质网应激等对β细胞功能的损伤,延缓糖尿病的病程。本文将从自噬的定义、自噬相关蛋白和信号调节通路、自噬在维持胰岛β细胞结构和功能中的作用,以及影响胰岛β细胞自噬的主要因素等方面进行综述。
- 吴英智刘旭高丽辉
- 关键词：糖尿病胰岛Β细胞
- 芒果苷对α-葡萄糖苷酶活性的影响研究
- 目的:研究芒果苷(Mangiferin)对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用.方法:以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物,建立体外α-葡萄糖苷酶抑制剂微孔筛选模型,研究芒果苷对α-葡萄糖苷酶活性的影响,并采用酶...
- 高丽辉何荣冯国华张富东李玲
- 抗2型糖尿病药物研究新进展被引量：10
- 2014年
- 糖尿病主要表现为高血糖及微血管并发症,主要分为1型和2型糖尿病,其中2型糖尿病占糖尿病患者的90%-95%。近年来糖尿病药物的研究取得了较大进展,出现了很多新型的抗糖尿病药物,如二肽基肽酶4抑制剂、胰高血糖素样肽1类似物、钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂和白细胞介素1受体拮抗剂等。该文就抗2型糖尿病药物研究新进展予以综述。
- 万星驿李玲
- 关键词：抗糖尿病药物白细胞介素1受体拮抗剂
- Fmr1基因调控成年小鼠海马APP和磷酸化Akt-GSK3β的表达
- 脆性X综合症(Fragile X Syndrome,FXS)是由于Fmr1基因甲基化静默导致的智力发育迟滞遗传性精神疾病。Fmr1基因编码的FMRP蛋白缺失导致受其调控的数百种mRNA启动蛋白翻译进程,造成神经元树突棘发...
- 龚仕涛邹嫄媛王星棋李锦超张明
- 关键词：脆性X综合征FMR1基因APPGSK3Β
- 文献传递
- 柴竭抑肝纤对硫代乙酰胺诱导的大鼠肝纤维化的影响被引量：4
- 2019年
- 目的:研究中药复方柴竭抑肝纤(Chaijie Yiganxian,CJYGX)对抗大鼠肝纤维化的作用及其机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,阳性组(鳖甲煎丸),CJYGX高、中、低剂量组。除正常组外,其余5组通过腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导建立肝纤维化模型。自造模第4周开始,阳性组给予鳖甲煎丸1 g·kg^(-1)·d-1灌胃,CJYGX高、中、低剂量组分别给予CJYGX 7.96,3.98,1.99 g·kg^(-1)·d-1灌胃,模型组灌服生理盐水,每日灌胃1次,共5周。于末次灌胃24 h后,水合氯醛轻度麻醉大鼠,留取血清及肝组织,称肝脏湿重并计算肝脏指数;全自动分析法检测大鼠肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP);酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝纤维化血清学标志物层粘连蛋白(laminin,LN),透明质酸酶(hyaluronidase,HA),Ⅳ型胶原(Ⅳcollagen,CⅣ),Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ);马松(Masson)染色观察肝脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),Smad2,Smad3,Smad4,Smad7 mRNA表达;免疫组化检测肝脏组织血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)和TGF-β1蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肝脏指数显著升高;肝功能指标ALP,AST,ALT的含量显著升高;肝纤维化指标LN,HA,Ⅳ-C,PCⅢ和HYP显著升高; Masson染色观察到肝纤维化程度显著增加; TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4 mRNA表达显著升高,Smad7 mRNA表达显著降低; TGF-β1,PDGF和α-SMA蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各剂量的CJYGX能不同程度的降低肝功能指标ALP,AST,ALT的水平;肝纤维化指标LN,HA,Ⅳ-C,PCⅢ和HYP都明显的降低; Masson组织观察到肝纤维化�
- 郭会君蔡悦青魏炜余晓玲张志毕姜莉云
- 关键词：肝纤维化SMAD
- 丹参水提物对小鼠病理脱发模型毛发的再生影响被引量：8
- 2016年
- 目的研究丹参水提物对小鼠病理脱发模型毛发再生的促进作用.方法睾酮诱导建立小鼠脱发模型,分为空白组,模型组,章光101组,丹参低、中、高剂量组(20、40、80 mg/m L)组.涂药21 d,测量脱毛区毛长、毛重和毛囊数,检测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)含量,脱毛区皮肤组织血管内皮生长因子(VEGF)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量.结果 (1)丹参水提物能明显促进小鼠再生毛发的毛长、毛重和毛囊数(P<0.05);(2)降低T和提高E2含量(P<0.05),平衡激素水平;(3)提高SOD和GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05);(4)提高VEGF含量(P<0.05).结论在睾酮诱导的小鼠病理脱发模型中,丹参水提物能有效促进毛发的再生,其作用机制可能与平衡激素水平、抗氧化和促进VEGF表达有关.
- 张志毕董超马娇冯国华
- 关键词：丹参水提物雄激素性脱发毛发再生睾酮
