黑龙江八一农垦大学科技处(生物技术中心)
- 作品数：13 被引量：65H指数：3
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- PEDV E蛋白对宿主细胞UPR反应关键蛋白GRP78表达的影响被引量：5
- 2021年
- 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)能够引起仔猪的大量死亡,造成重大经济损失。PEDV E蛋白在病毒的出芽以及复制过程中起重要作用。将重组质粒pCMV-Myc-E与真核表达载体pCMV-Myc分别转染HEK-293T和PK15细胞系,验证PEDVE蛋白在宿主细胞的正确表达和亚细胞定位情况。同时验证未折叠蛋白反应(Unfold protein response,UPR)关键蛋白葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein of 78 KDa,GRP78)的表达情况。免疫荧光和Western Blot的结果表明,PEDV E蛋白在HEK-293T和PK15细胞中都得到正确表达,且定位于细胞质中。与对照组相比,重组质粒pCMV-Myc-E能够特异性引起GRP78蛋白表达量升高,且GRP78表达水平随E蛋白剂量与感染时间的增加而增强。以上结果表明,PEDV E蛋白能诱导UPR关键蛋白GRP78蛋白的表达,激活UPR反应。为后续研究PEDV E蛋白诱导UPR反应的分子机制提供参考。
- 王显赫徐梧皓张鑫林马大宇雷亚峰郑亮郭德轩吴志军吴志军曹宏伟
- 关键词：猪流行性腹泻病毒未折叠蛋白反应E蛋白
- PEDV Nsp6蛋白亚细胞定位及诱导内质网应激的初步研究被引量：2
- 2021年
- Nsp6是PEDV编码的非结构蛋白,目前关于Nsp6蛋白的结构和功能研究尚不清楚。为了更加清晰了解PEDV Nsp6的功能,通过无缝克隆技术、Western blot和间接免疫荧光等方法验证Nsp6蛋白的表达和细胞定位。此外,研究发现Nsp6能与内质网膜关键蛋白PDI共定位,并能引起内质网应激相关蛋白GRP78表达上调。初步证明了Nsp6蛋白能够引起内质网应激反应,为拓展Nsp6蛋白的结构和功能研究提供理论依据。
- 徐嘉欣武雪宁王显赫徐梧皓高鑫誉郑亮吴志军吴志军曹宏伟
- 关键词：PEDV非结构蛋白内质网应激
- EV71病毒诱导细胞应激颗粒形成的初步研究
- 2019年
- 肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)属于小RNA病毒科,肠道病毒属,肠道病毒A型的成员,是引起婴幼儿手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)的一种重要病原病毒。但截至目前,EV71病毒与宿主细胞相互作用的机制仍不清楚。为了研究EV71病毒诱导应激颗粒形成的分子机制,研究首先构建了真核表达载体pDsRed2-G3BP1,随后构建了稳定表达融合蛋白RFP-G3BP1蛋白的HeLa细胞系(HeLaRFP-G3BP1),并应用Western Blot和免疫荧光技术证实了G3BP1融合蛋白的正确表达。EV71病毒感染HeLaRFP-G3BP1后,超过40%感染细胞的胞质中出现了应激颗粒。此外,应用微管特异性抑制剂破坏细胞微管完整性之后,显著抑制应激颗粒的迁移聚集。研究证明了EV71病毒诱导细胞应激颗粒的初步形成并且应激颗粒的迁移聚集依赖于微管的完整性。
- 武雪宁徐嘉欣王显赫邹德华郑亮郑亮李兴志张雅婷李兴志张华张雅婷
- 关键词：EV71病毒微管
- 黑龙江垦区荷斯坦牛群遗传改良的关键问题被引量：1
- 2009年
- 近年来黑龙江垦区奶业呈高速发展态势,奶牛饲养业以及乳品加工已经成为垦区国民经济和农业的重要产业,奶业产业化程度大大提高,同时必须看到垦区奶业发展模式仍以奶牛数量增加为主,奶牛单产增加缓慢,效益下降,奶牛遗传改良工作滞后。
- 刘胜军韩玉静苗树军
- 关键词：荷斯坦牛奶牛饲养乳品加工冻精生产性能测定产犊间隔
- 基于双创能力培养的地方高校和科研机构科研管理模式探索被引量：3
- 2013年
- 在党的十七大提出的"提高自主创新能力,建设创新型国家"建设方针指导下,各高校和科研院所纷纷制定各项措施落实党的宏伟战略。数量众多的地方高校、科研院所在准确定位的基础上,提出了有别于科研型重点高校、国家级科研院所的发展方向,在不同层面和领域进行改革,以培养和提高自身的创新能力,但很多管理层面仍沿袭旧的管理模式,难以适应新的发展形势,需要深入研讨、变革。本文在分析当前地方高校和科研院所的科研管理现状基础上,参照国内外先进的管理模式,从改变管理理念、拓宽资助体系和多元化管理方式等三个方面,提出改进地方高校和科研单位的科研管理模式的思路,为其制定培养、提高创新创业意识能力的改革措施提供参考。
- 尚锐郭伟
- 关键词：创新创业科研管理地方高校
- PCV2 Cap蛋白原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
- 2023年
- 猪圆环病毒2型是一种常见的猪感染性病毒,Cap蛋白为猪圆环病毒2型的核衣壳蛋白,也是该病毒最主要的结构蛋白,是目前猪圆环病毒2型基因工程疫苗研制的关键蛋白。研究构建了Cap蛋白原核表达质粒pET28a-His-Cap,转化Transetta(DE3)表达菌株,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE及蛋白免疫印迹试验验证,重组蛋白主要以可溶性形式表达,少数为包涵体蛋白。以Ni-NTA树脂进行蛋白纯化,纯化后蛋白浓度为629μg·mL^(-1),采用透析袋浓缩将重组蛋白浓缩,浓缩后蛋白终浓度为1.8 mg·mL^(-1)。将重组蛋白与弗氏佐剂等体积混合,充分乳化后制备抗原,免疫兔子采集全血,分离血清。经蛋白免疫印迹试验,该多抗与重组蛋白存在免疫反应性,ELISA检测抗体效价可达1∶32000,IFA试验证明该多抗能够特异性识别猪圆环病毒2型。Cap蛋白多克隆抗体的成功制备,为后续猪圆环病毒2型基因工程疫苗制备过程中验证Cap体外蛋白表达提供了材料。
- 李钰昌郑亮张华张华肖莉杰吴志军
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 新型冠状病毒E基因真核表达载体的构建及表达
- 2022年
- 囊膜蛋白(E蛋白)是新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2,SARS-CoV-2)的小包膜蛋白,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为了更有利地研究SARS-CoV-2 E蛋白的生物学功能,研究成功构建了SARS-CoV-2 E基因的真核表达载体。首先,通过PCR技术扩增SARS-CoV-2 E基因,并将pCMV-Myc载体进行双酶切。随后,利用同源重组将SARS-CoV-2 E基因连接至pCMV-Myc载体。经酶切和测序鉴定发现,SARS-CoV-2 E基因成功克隆至pCMV-Myc载体中,并将重组质粒命名为pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E。将重组质粒pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E转染至HEK-293T细胞,利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测重组质粒的表达以及定位情况。结果表明,重组质粒pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E在HEK-293T细胞中成功表达,并且发现重组蛋白主要分布于胞质,少量存在于胞核,为进一步研究SARS-CoV-2 E蛋白的功能奠定基础。
- 于雯郑亮王宏宇高鑫誉吴志军曹宏伟曹宏伟
- 关键词：新型冠状病毒E基因蛋白表达
- PEDV E蛋白的跨膜结构域对其细胞定位的影响研究
- 2022年
- 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为猪流行性腹泻的病原体,感染上该病毒的仔猪出现脱水、腹泻和呕吐,给世界养猪业造成了经济损失。PEDV囊膜蛋白E在病毒包膜形成、病毒离子形成、病毒出芽和释放过程中发挥至关重要的作用。根据软件预测可知,PEDV E蛋白是一种有一个跨膜域的跨膜蛋白。研究将PEDV E蛋白设计好的截短基因(E-T1、E-T2和E-T3)连接至pCMV-myc真核表达载体中,经PCR和双酶切鉴定结果表明已构建成功。最后,将重组质粒pCMV-myc-E、E蛋白截短基因质粒Myc-E-T1、Myc-E-T2和Myc-E-T3转染HEK-293T细胞和IPEC-J2细胞,通过间接免疫荧光技术观察其E蛋白以及截短基因的细胞分布情况,并探究是否与内质网发生共定位。研究结果发现,E蛋白以及E-T1、ET2分布在细胞质并定位在内质网,而E-T3则分布在整个细胞且没有与内质网共定位。说明了E-T1、E-T2可能行使着与E蛋白类似的功能,而E-T3则没有。研究为进一步探讨PEDV的E蛋白功能和分子生物学特性奠定了基础。
- 郭德轩郑亮张宁郑小会吴志军曹宏伟曹宏伟
- 关键词：猪流行性腹泻病毒E蛋白内质网细胞定位
- 多用型孔轮式高速精密排种器
- 多用型孔轮式高速精密排种器，是用在播种机上一种排种装置，用于豆类、玉米和包衣圆粒种的精密插种，可用于同一苗带双条或多条插种。排种器分为壳体(2)；排种型孔轮部分包括型孔轮(24)、清种叉(8)和护种板(9)；清种毛刷轮部...
- 郝恒昌张宝库
- 文献传递
- 仔猪副伤寒的诊断与治疗被引量：2
- 2008年
- 仔猪副伤寒，又称猪沙门氏菌病（Swine salmonellosis），是由致病性沙门氏菌引起的仔猪传染病。主要致病菌是猪霍乱沙门氏菌和猪伤寒沙门氏菌，还有鼠伤寒、德尔培和肠炎沙门氏菌等。该病菌分布广，能从各种途径传人猪群。许多猪可借本身的抵抗力将其消灭或免疫，有些则成为带菌猪。如饲养管理不当、气候突变或长途运输等，
- 何晶吴凌王国良周玉龙
- 关键词：仔猪副伤寒致病性沙门氏菌猪霍乱沙门氏菌猪沙门氏菌病伤寒沙门氏菌肠炎沙门氏菌
