南京大学医学院公共健康医学中心
- 作品数：20 被引量：23H指数：3
- 相关作者：宋红勇楚鹰刘忠程林苏艾荣更多>>
- 相关机构：南京理工大学环境与生物工程学院生物工程系南京理工大学环境与生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 人CCR5基因真核表达质粒的构建及其鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:构建人CCR5基因的真核表达质粒并对其进行功能鉴定。方法:PCR扩增人CCR5基因,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1内,构建含人CCR5基因的真核表达质粒pcDNA3.1-CCR5。使用RT-PCR、流式细胞术和HIV假病毒感染实验的方法,鉴定CCR5在真核细胞中的表达和功能。结果:克隆的人CCR5基因与GenBank中已登记的基因序列100%同源。瞬时转染真核细胞后,RT-PCR在预期的位置检测出目的条带,流式细胞术检测到约25.6%的细胞表达CCR5蛋白,且该蛋白能介导HIV假病毒的感染。结论:成功构建了含人CCR5基因的真核表达质粒。
- 程林宋红勇吴喜林吴稚伟
- 关键词：CCR5基因质粒真核表达人类免疫缺陷病毒
- 脂质胶束介导VEGF基因对称和不对称siRNA的抑瘤效果
- 2011年
- 目的:探讨脂质胶束递送靶向VEGF基因的对称siRNA和不对称siRNA(asiRNA)的抑瘤效果。方法:通过RNA电泳等方法,筛选不同组分比例的脂质胶束,用Western blot、细胞板计数法、CCK-8实验检测对乳腺癌MCF-7细胞活力的影响。构建H22肝癌荷瘤小鼠模型,随机分为不同实验组,连续14天尾静脉注射给药,计算抑瘤率和小鼠生存率。结果:在4组不同RNA干扰片段中,asiRNA21/23组抑制VEGF蛋白表达效果最好。在H22荷瘤小鼠实验中,asiRNA21/23组显示了明显的抑瘤效果,且延长了荷瘤小鼠的生存期。结论:脂质胶束递送VEGF-asiRNA21/23降低了MCF-7细胞中VEGF基因的表达,且具有明显的肿瘤抑制效果。
- 郭佳佳殷妍张昌栋王建军徐根兴
- 关键词：血管内皮生长因子
- 靶向HIV-1细胞受体基因CCR5的不对称siRNA的稳定性和体内分布研究
- 2011年
- 目的:探讨靶向HIV-1细胞受体基因CCR5的不对称siRNA(asiRNA)在血清和动物体内的稳定性和在动物体内分布情况。方法:用内皮抑素同脂质胶束联合递送asiRNA,琼脂糖凝胶电泳法检测asiRNA的血清稳定性,ELISA法和活体荧光成像法检测asiRNA的体内分布。结果:改变合适的实验条件和asiRNA的修饰,可提高asiRNA的血清稳定性。用ELISA法检测出静脉给药15 min后双链asiRNA在血液、肝、肺和肾内浓度较高,用活体荧光成像法检测出静脉给药24 h后asiRNA向肾内汇集排泄,两种检测方法测得asiRNA在脾内浓度较低。结论:两种检测方法方便实用,灵敏度不同,均可用于阳离子脂质体递送asiRNA的体内分布检测。
- 张昌栋殷妍郭佳佳梁晓飞段友容吴稚伟王建军徐根兴
- 关键词：CCR5SIRNAELISA
- 卵巢胰岛素抵抗对颗粒细胞增殖功能的影响
- 研究在卵巢胰岛素抵抗情况下,颗粒细胞细胞增殖功能及类固醇激素分泌功能的改变,结果显示在胰岛素抵抗的情况下,颗粒细胞增殖分裂功能及雌二醇合成能力亢进,而孕酮的合成能力显著下降,这些变化可能与 PCOS 不孕及促性腺激素治疗...
- 宋娟娟刘伟王勇闫妙娥侯丽辉冯晓玲吴效科
- 文献传递
- 4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物抑制HSV-2感染研究被引量：1
- 2012年
- 目的:探索4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物(PSM)对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染细胞或小鼠的抑制作用。方法:建立Vero-ICP10细胞系,通过Luciferase检测不同浓度PSM对感染细胞中HSV-2的抑制作用,并通过In cell western技术检测HSV-2 gD蛋白表达,确定不同PSM浓度对HSV-2 gD蛋白表达的抑制作用;建立HSV-2阴道感染小鼠模型,观察PSM对HSV-2经生殖道感染小鼠的抑制作用。结果:Luciferase实验和In cell western实验结果均表明PSM具有抗HSV-2感染细胞的作用;小鼠模型中,5%的PSM能有效防止小鼠感染HSV-2(P<0.001)。结论:PSM在体内和体外模型中均可以抑制HSV-2感染。
- 陈钰宋思维邱敏吴稚伟
- 关键词：单纯疱疹病毒2型抗病毒
- 中国HIV-1B'亚型流行株gp120蛋白的表达与纯化被引量：1
- 2013年
- 目的:表达纯化中国HIV-1 B'亚型流行株gp120蛋白。方法:将gp120基因克隆至真核表达载体pTriEx-3 hygro,构建真核表达质粒pTriEx-3-gp120,转染CHO-K1细胞,96 h后收取上清,利用金属螯合层析的方法纯化该重组蛋白,并通过SDS-PAGE以及Western blotting验证重组蛋白的表达。结果:酶切及测序结果表明真核质粒表达构建正确,表达的重组蛋白可以被His标签抗体以及HIV-1阳性血清所识别,并从细胞转染上清中成功纯化了该蛋白。结论:我们成功构建了一个可用于免疫检测、疫苗设计以及其它相关研究的HIV-1免疫原。
- 楚鹰宋红勇吴稚伟
- 关键词：HIV-1GP120蛋白表达纯化
- HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2017年
- 目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。
- 楚鹰宫祥丹高建伟苏艾荣陈德燕宋红勇吴喜林吴稚伟
- 关键词：单克隆抗体
- sIgA在抗病毒治疗中的研究进展
- 2023年
- 免疫球蛋白A(IgA)主要分为血清型和分泌型。分泌型IgA(sIgA)是机体黏膜防御系统的主要成分,防止病原体入侵机体的第一道防线。sIgA分子通过直接结合病原体抗原,中和或阻断一系列病毒的活性,并阻止它们附着在宿主细胞上。sIgA在抗病毒领域的治疗潜力,使得sIgA在抗病毒领域备受关注,因此可能用于临床抗病毒治疗。本文重点对sIgA在抗病毒治疗中的应用现状及进展进行综述。
- 黄碧莲吴喜林吴稚伟
- 关键词：IGA抗病毒黏膜免疫
- 重组人内皮抑素DOPS胶束的制备及抑瘤效应研究被引量：3
- 2010年
- 目的:本研究采用二油基磷脂酰丝氨酸(DOPS)制备包载重组人内皮抑素的胶束,并考察其体内外抑瘤效应。方法:研究DOPS制备胶束的理化性质,考察重组人内皮抑素DOPS胶束对肿瘤细胞生长、鸡胚绒毛尿囊体内血管生长的影响及对H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤抑制效果。结果:制备的重组人内皮抑素DOPS胶束的粒径为(117.7±21.4)nm,Zeta电位为+18.1 mV,包封率为96.54%。该胶束明显抑制MCF-7肿瘤细胞的生长和增殖,抑制率为32.02%;对鸡胚绒毛尿囊血管新生也有明显的抑制作用,剂量越大,抑制作用越强。与单独使用重组人内皮抑素相比,该胶束抑制H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长,抑制率达到55.42%。结论:以DOPS胶束作为药物载体可有效地增强重组人内皮抑素的抑瘤效应。
- 邢静樊燕蓉冯志英王建军徐根兴
- 关键词：重组人内皮抑素胶束肿瘤
- mTSLP-V1/V2融合蛋白的真核表达与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse thymic stromal lymphopoietin,mTSLP)与人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法:以真核表达质粒pCEP-Pu为载体,构建mTSLP与gp120BALV1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后,使用PEI瞬时转染293F悬浮细胞,表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析,并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果:SDS-PAGE、Western blot分析显示,在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带,并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论:在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白,该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位,能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。
- 楚鹰王亭亭芮昱文宋思维苏艾荣程林宋红勇郑大同吴稚伟
- 关键词：人免疫缺陷病毒1型融合蛋白
