宁夏大学生命科学学院微生物与分子生物学系
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
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- 干扰Wnt5a对BCG诱导的TC-1细胞炎性反应的调控作用研究
- 2023年
- 目的探究干扰Wnt5a对卡介苗(BCG)感染的小鼠肺上皮细胞(TC-1)炎性反应的调控作用,并阐明其作用机制。方法慢病毒干扰Wnt5a处理TC-1细胞系及其阴性对照细胞系后BCG感染24h。设置4个实验组:NC组、NC+BCG组、Si-3组和Si-3+BCG组。通过Western blot检测Toll样信号通路TLR2、TLR4、Myd88、p-NF-κB和NF-κB炎症相关蛋白表达水平,免疫荧光法检测各实验组p-NF-κB表达情况,qRT-PCR检测Toll样信号通路TLR2、TLR4、Myd88、p-NF-κB和NF-κB等基因mRNA表达水平,ELISA检测细胞培养上清促炎因子TNF-α、IL-6和IL-10含量。结果与对照组比较,BCG组炎性相关因子TLR2、TLR4、Myd88、NF-κB、p-NF-κB的蛋白表达水平(均P<0.01)和mRNA表达水平均显著上调(均P<0.05),p-NF-κB蛋白荧光强度较对照组显著增加,促炎因子TNF-α和IL-6表达水平升高(均P<0.01),抑炎因子IL-10表达水平降低。与BCG组相比,Si-3+BCG组上述蛋白表达水平(均P<0.05)和mRNA表达水平均(均P<0.01)显著下调,p-NF-κB蛋白荧光强度较BCG组均显著下调,促炎因子TNF-α和IL-6(均P<0.05)表达水平显著降低,抑炎因子IL-10表达水平显著升高(P<0.01)。结论干扰Wnt5a可调控卡介苗(BCG)感染的小鼠肺上皮细胞(TC-1)的炎性反应,其调控作用机制是通过Toll样信号通路依赖Myd88途径抑制BCG诱导的TC-1炎性反应。
- 原筱潭马亚博苗申奥陈琪聂雪伊徐金瑞杨易
- 关键词：WNT5ABCG炎性反应
- Wnt5a在肺相关疾病发生发展过程中作用的研究进展被引量：8
- 2021年
- Wnt5a是Wnt蛋白家族成员之一,通过与膜受体或共受体复合物结合激活细胞中磷酸化蛋白传递信号,既作用于经典Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路,又活化非经典Wnt信号通路。Wnt5a的表达调控及其信号转导与炎症应答有密切关联,因而在炎症性疾病的发生发展中发挥着重要作用。近年来,由肺部炎症引发的肺相关疾病严重威胁着人类健康,肺部感染性疾病已成为一大公共卫生安全问题。Wnt5a对肺毛细血管模式化、肺泡上皮细胞的分化、平滑肌细胞功能和肺成纤维细胞的增殖起重要作用,其在肺相关疾病发生发展过程中的作用也逐渐被揭示。现以Wnt5a蛋白及其介导的信号通路为主,概述Wnt5a在慢性阻塞性肺病、肺炎、肺肿瘤和肺纤维化等肺相关疾病发生发展过程中的最新研究进展,并展望Wnt5a在肺相关疾病研究的主要方向及预期进展,旨在为靶向Wnt5a进行肺相关疾病的防治提供理论依据。
- 陈琪李勇徐金瑞杨易
- 关键词：WNT5A慢性阻塞性肺病肺炎肺肿瘤肺纤维化
- Wnt5a激活c-Jun氨基末端激酶(JNK)促进KGN人颗粒细胞增殖和自噬
- 2022年
- 目的 探究无翅基因5a(Wnt5a)对KGN人颗粒细胞自噬的作用。方法 采用Wnt5a重组蛋白(rWnt5a)、抑制剂IWP2和BOX5处理KGN人颗粒细胞并设置对照组,Western blot法检测Wnt5a蛋白表达水平,免疫荧光细胞化学染色法观察rWnt5a组和抑制剂IWP2组中Wnt5a蛋白和颗粒细胞特异性标志物叉头盒L2(FOXL2)的表达共定位。CCK-8法检测KGN细胞的增殖能力,Western blot法检测rWnt5a及其抑制剂IWP2对KGN细胞自噬的影响以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)和活化T细胞核因子1(NFAT1)蛋白的表达变化。结果 与对照组相比,rWnt5a组Wnt5a蛋白水平增加,促进细胞增殖,微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 JNK、 NFAT1蛋白表达增加,核孔蛋白62(P62)蛋白表达降低;IWP2组Wnt5a蛋白水平降低,抑制人颗粒细胞增殖,LC3、 JNK和NFAT1蛋白表达降低,P62表达增加。结论 Wnt5a激活JNK促进KGN人颗粒细胞的增殖和自噬。
- 马亚博谢贤国原筱潭刘新峰徐金瑞杨易
- 关键词：细胞自噬
- CaMKⅡ对多囊卵巢综合征模型小鼠颗粒细胞中Caspase-3表达的影响
- 2023年
- 目的:探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在正常小鼠卵巢和多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠卵巢组织中的差异表达,阐明CaMKⅡ对PCOS小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:用蓖麻油溶解脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射诱导PCOS小鼠模型(PCOS组),对照组小鼠注射等体积蓖麻油,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组小鼠血清中睾酮水平,阴道涂片监测2组小鼠发情周期变化,HE染色观察2组小鼠卵巢组织病理形态表现,免疫荧光染色法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白定位和荧光强度,Western blotting法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)蛋白表达水平。采用短发夹RNA (sh-RNA)-CaMKⅡ慢病毒转染人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)建立稳转体系,分为空白对照组、 sh-CaMKⅡ-1组和sh-CaMKⅡ-2组,Western blotting法检测各组KGN细胞中CaMKⅡ和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PCOS组小鼠血清中总睾酮和游离睾酮水平明显升高(P<0.01),发情周期紊乱,停滞于发情中期,卵巢组织中出现颗粒细胞层数较少的空泡状卵泡,表明PCOS小鼠模型建立成功。CaMKⅡ蛋白在小鼠卵巢组织的卵母细胞、颗粒细胞和间质细胞中均有表达;与对照组比较,PCOS组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ荧光强度和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,sh-CaMKⅡ-1和sh-CaMKⅡ-2组KGN细胞中CaMKⅡ蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:PCOS小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白表达水平降低诱导Caspase-3蛋白表达水平升高,进而促进颗粒细胞凋亡。
- 谢贤国马亚博徐娅秀张燕杜长征徐金瑞杨易
- 关键词：多囊卵巢综合征
- 不同发育期小鼠卵巢组织中Wnt5a蛋白表达水平及其对卵母细胞自噬的影响
- 2022年
- 目的:探讨不同发育期小鼠卵巢组织中Wnt5a蛋白表达水平,并阐明Wnt5a对卵母细胞自噬的影响。方法:收集不同发育期小鼠卵巢组织,采用Western blotting法检测Wnt5a蛋白在小鼠围产期卵巢组织中的表达水平,选取新生1 d(1 dpp)小鼠卵巢组织进行免疫荧光染色,将卵母细胞胞质标记物DDX4和颗粒细胞标记物FOXL2(红色)分别与Wnt5a(绿色)和细胞核标记物Hoechst(蓝色)共染后,观察卵母细胞形态和数量。体外培养胚胎期17.5 d(17.5 dpc)小鼠卵巢组织,分为对照组、1 mol·L^(-1)过表达Wnt5a组(rWnt5a组)、1 mol·L^(-1)抑制剂IWP2组和1 mol·L^(-1)抑制剂BOX5组,采用Western blotting法检测各组小鼠卵巢组织中Wnt5a、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62蛋白表达水平,免疫荧光法观察卵巢卵母细胞数量。结果:Wnt5a在不同发育阶段小鼠卵巢组织中均有表达,与13.5 dpc组比较,17.5 dpc和1 dpp组Wnt5a蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),荧光定位发现目的蛋白Wnt5a与标记物DDX4和FOXL2有重叠部分。Western blotting法检测,与对照组比较,rWnt5a组Wnt5a蛋白表达水平明显升高(P<0.01),抑制剂IWP2组Wnt5a和LC3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),抑制剂BOX5组Wnt5a蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与rWnt5a组比较,抑制剂IWP2组LC3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),P62蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。免疫荧光染色,与对照组比较,抑制剂IWP2组卵巢中卵母细胞数目减少。结论:Wnt5a可能通过影响小鼠卵巢内自噬水平调控卵母细胞的存活。
- 马亚博原筱潭谢贤国刘新峰徐金瑞杨易
- 关键词：WNT5A卵巢组织卵母细胞自噬
