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琼枝麒麟菜多糖超声提取工艺及皮肤修复活性研究被引量：4: 2014年; 目的优化琼枝麒麟菜多糖(EGP)的超声提取方法,并探讨EGP在皮肤损伤修复方面的作用。方法采用单因素考察和正交试验方法优化超声方法提取琼枝麒麟菜多糖(EGP),苯酚-浓硫酸法测定EGP中多糖含量。通过MTT细胞毒性实验、细胞增殖实验和划痕实验,研究EGP对人永生化表皮细胞(HaCaT)形态、增殖分化和细胞迁移速度的影响,评价其在皮肤损伤修复方面的作用。结果确定EGP的最优超声提取条件为:温度60℃,料液比1∶100,时间30min,EGP得率为40.3%±1.8%,其中多糖含量为48.2%±4.6%。EGP对HaCaT细胞几乎无毒,且在一定浓度范围内对HaCaT细胞的增殖有显著的促进作用;EGP还能加快HaCaT细胞的迁移速度,对皮肤损伤的愈合有显著的影响意义。结论超声法提取EGP时间短,工艺稳定,所得EGP毒性小,对皮肤及黏膜损伤的修复具有促进作用,可广泛应用于化妆品及医疗器械。; 王怀玲董栋邹沐平廖晓凤刘秋英王一飞; 关键词：超声提取工艺皮肤修复

琼枝麒麟菜海藻多糖(EGP)作为化妆品辅料功效研究: 本文采用超声提取方法提取琼枝麒麟菜多糖(EGP),以EGP得率为考察指标,对提取时间,提取温度以及料液比进行系统研究和单因素优化处理,最后得到最佳提取条件,并对最优条件下获得EGP样品定性鉴定,接着对EGP的生物活性评价...; 王怀玲王一飞; 关键词：超声提取生物活性; 文献传递

NDPK-A-C109S突变体的构建与蛋白活性的研究: 引言:核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)是nm23-H1基因表达的产物,nm23基因家族有广泛的生物学功能,其表达的产物有磷酸转移酶活性、Dnase活性等,在...; 高雪郭朝万张志红吕芬熊盛; 关键词：遗传学

琼枝麒麟菜多糖抗呼吸道病毒活性研究被引量：11: 2015年; 为了评价琼枝麒麟菜多糖(EGP)包括粗提物(CEGP)及大于500 k Da多糖组分(LEGP)抗呼吸道相关病毒活性。采用Reed-muench法计算流感病毒H1N1、H3N2和H5N3,柯萨奇病毒CVB3及呼吸道合胞病毒RSV-long株滴度;采用观察细胞病变效应(CPE)法,确定CEGP和LEGP对犬肾细胞(MDCK),人宫颈癌细胞(He La)和人喉癌上皮细胞(HEp-2)的最大无毒浓度;通过细胞病变观察法(CPE)及四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定CEGP和LEGP抑制各病毒产生细胞病变的作用。结果表明:CEGP和LEGP对5种常见的呼吸道病毒H1N1、H3N2和H5N3,CVB3和RSV都有抑制作用,CVB3和RSV对CEGP和LEGP更敏感;CEGP和LEGP有抗多种呼吸道病毒作用,为抗呼吸道病毒新药的研发提供理论依据。; 邹沐平董栋王怀玲王巧利蒲含林王一飞; 关键词：抗病毒呼吸道病毒

琼枝麒麟菜海藻多糖(EGP)作为化妆品辅料功效研究: 本文采用超声提取方法提取琼枝麒麟菜多糖(EGP),以EGP得率为考察指标,对提取时间,提取温度以及料液比进行系统研究和单因素优化处理,最后得到最佳提取条件,并对最优条件下获得EGP样品定性鉴定,接着对EGP的生物活性评价...; 王怀玲王一飞; 关键词：EGP 超声提取工艺皮肤修复保湿性紫外屏蔽; 文献传递

氧化还原对NDPK-A及突变体磷酸转移酶活性的影响: 2012年; 对核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)及其4种半胱氨酸突变体进行诱导表达及纯化,测定它们在氧化还原条件及正常条件下的磷酸转移酶活性,研究氧化还原及二硫键异构对NDPK-A及突变体活性的影响。将实验室之前构建成功的野生型NDPK-A(PBV-NDPK-A)及4种突变型NDPK-A基因(PBV-NDPK-A C4S,PBV-NDPK-A C109S,PBV-NDPK-A C145S,PBV-NDPK-A C4/109/145S)在大肠杆菌中高效表达;以DEAE-sepharose Fast Flow离子交换层析与Cibacron Blue 3GA Sepharose CL-4B亲和层析技术纯化目的蛋白;HPLC法测定比较野生型NDPK-A及突变体在氧化还原和正常环境下磷酸转移酶活性。结果显示,NDPK-A及突变体在大肠杆菌中高效表达;经纯化分别获得了均一的NDPK-A蛋白及突变体蛋白,纯度均达到98%;在还原环境下NDPK-A及突变体的磷酸转移酶活性均高于正常环境下的活性,但是在氧化环境下的磷酸转移酶活性明显低于正常环境下。氧化还原环境对NDPK-A结构异构及磷酸转移酶活性有一定的影响,提示氧化还原环境可能调控NDPK-A二硫键的形成,影响蛋白的聚集状态,从而影响蛋白的磷酸转移酶活性,并且NDPK-A结构中可能有更为复杂的氧化还原调控酶活性机制。; 张志红吕芬高雪杨依丽罗勇熊盛

琼枝麒麟菜多糖抗单纯疱疹病毒2型活性研究被引量：4: 2015年; 目的探讨琼枝麒麟菜多糖(EGP)抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的活性及其作用机制。方法联合采用观察细胞病变效应(CPE)法和MTT法评价EGP对Vero细胞的毒性。空斑减数实验检测EGP对HSV-2的综合抗病毒活性、直接灭活作用、吸附及进入细胞过程的抑制作用、和感染后的治疗作用。Real-time PCR(RT-PCR)检测EGP对HSV-2基因表达及其DNA复制的影响。结果 EGP浓度低于125μg/mL对Vero细胞无毒性。EGP具有较强的综合抗病毒活性,在实验所用最低浓度(1.95μg/mL)下,EGP可达到80%的HSV-2病毒抑制率。EGP对HSV-2具有很强的直接灭活和抑制吸附作用,治疗作用相对较弱。同时,EGP可以下调HSV-2早期基因UL52和晚期基因UL27的表达,但是对病毒的DNA复制过程无影响。结论麒麟菜多糖具有显著的抗HSV-2感染活性,主要通过干扰病毒对细胞的粘附、侵入而发挥作用。; 邹沐平董栋王怀玲刘秋英蒲含林王一飞; 关键词：HSV-2 抗病毒

NDKP-A及其突变体的抗病毒增敏功能研究: 引言:在构建的NDPKA突变体中,的活性最高。为了证实其增强的磷酸转移酶活性能应用于药物开发和寻找更好的增敏剂中,利用构建的几种突变体重组载体,进行体外研究抗病毒增敏效应,比较其对核苷类似物的抗病毒增敏效应差异。材料和方...; 张志红陈蕴如郭朝万熊盛

NDPK-A C4/109/145S突变体降低磷酸转移酶活性但增加DNase活性: 2011年; 核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变体并研究其生物学效应,为NDPK-A结构与功能的研究提供参考.用定点突变法将NDPK-A的4位、109位和145位Cys突变为Ser,构建pBV220-NDPK-A C4/109/145S和pEGFP-NDPK-A C4/109/145S两种重组质粒.在大肠杆菌中高效表达NDPK-A C4/109/145S突变体,纯化后可获得均一的重组NDPK-A C4/109/145S突变体蛋白.HPLC法和DNA消化法测定发现,C4/109/145S突变体磷酸转移酶活性低于野生型NDPK-A,而DNase活性高于野生型NDPK-A.以A549细胞作为模式细胞的流式细胞仪周期检测表明,C4/109/145S突变体与野生型NDPK-A一致,均可将细胞周期延滞在S期和G2/M期.这些结果证实,NDPK-A结构异构与其磷酸转移酶活性密切相关,其酶活性至少需要1个Cys残基存在,NDPK-A结构中的二硫键也可能是其DNase活性的负调控机制之一,胞内NDPK-A的氧化还原异构可能对细胞周期无显著影响.; 高雪张志红吕芬钱垂文王一飞熊盛; 关键词：定点突变细胞周期

GST-NDPK-A融合蛋白的原核表达及体外互作蛋白的检测: 2013年; 旨在了解核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)的功能,通过GST-Pull down技术寻找与其存在体外相互作用的蛋白。以含有目的片段的质粒pBV-NDPK-A为模板,扩增出相应的目的基因片段,将其插入带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达质粒。双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定融合蛋白的表达,并与高表达细胞系A549孵育,进行GST-Pull down试验,并通过LC-MS/MS质谱鉴定体外与NDPK-A相互作用的蛋白。结果显示,成功构建GST-NDPK-A的原核表达载体;在大肠杆菌BL21中诱导表达出可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose 4B纯化后,获得了有生物活性的GST-NDPK-A融合蛋白,GST-Pull down试验和质谱鉴定结果发现NDPK-A与Fussel-18、Rrp12体外存在相互作用。; 吕芬刘忠银兴峰赵振岭陈妙娟张嘉萱陈伟钱垂文熊盛; 关键词：表达纯化相互作用

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