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何俊强: 作品数：63 被引量：195H指数：10; 供职机构：深圳出入境检验检疫局更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目深圳出入境检验检疫局科研项目质检公益性行业科研专项项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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一种用于鲤春病毒血症病毒检测的核酸适配体及其应用: 本申请公开了一种用于鲤春病毒血症病毒检测的核酸适配体及其应用。本申请的用于鲤春病毒血症病毒检测的核酸适配体，包括式一所示通式的一种或两种DNA片段，式一：5’‑P<Sub>1</Sub>‑N‑P<Sub>2</Sub>‑...; 于力王津津郑晓聪贾鹏何俊强刘荭史秀杰兰文升杨锦舜

对虾白斑综合症病毒变性高效液相色谱检测方法的建立与应用: 2011年; 据对虾白斑综合症病毒(WSSV)的基因保守序列,使用Primer Explorer V3软件设计了2条引物,利用PCR的扩增产物,结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立了一种对虾白斑综合症病毒的DHPLC快速检测方法。该检测方法特异性好,与传染性皮下和造血器官坏死病毒、斑节对虾杆状病毒、肝胰腺细小病毒、对虾杆状病毒以及对虾基因组DNA无交叉反应;检测灵敏度较高,约为10-5ng/μL,高于常规PCR及荧光定量PCR的灵敏度。用建立的DHPLC方法对100尾对虾样品进行了临床检测,结果与荧光定量PCR检测结果一致。WSSV的DHPLC检测方法,特异性强、灵敏度高,是对WSSV进行有效检测的一种新方法。; 赵巍马亚赵玉然杨大伟梁成珠刘荭何俊强史秀杰岳志芹; 关键词：变性高效液相色谱对虾白斑综合症病毒

四种主要水生动物病毒纳米荧光试纸条病原快速鉴定技术的研究和应用: 刘荭郑晓聪贾鹏何俊强兰文升史秀杰陈兵王津津于力; 该研究建立了快速检测四种主要水生动物病毒-鲤春病毒血症病毒(SVCV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的纳米荧光试纸条的制备方法.利用荧光纳米晶...; 关键词：

鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其特性鉴定被引量：4: 2011年; 为获得针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)特异性的单克隆抗体(MAb),以纯化的SVCV为抗原,免疫BALB/c小鼠。将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选获得4个能稳定分泌抗SVCV MAb的杂交瘤细胞株;4个杂交瘤细胞制备腹水的MAb效价为1∶160000～1∶640000。亚型鉴定结果表明,这些MAb分属2个亚型(1F1、3E1,IgG2a;3F5、4F9,IgG1),轻链均为Κ链。Western blot分析显示,MAb1F1、3F5、4F9能特异性地识别SVCV的N蛋白(47ku),3E1能特异性地识别SVCV的G蛋白(69ku)。采用相加ELISA法对抗原表位分析结果显示,1F1、3F5、4F9可能识别相同的表位,3E1则识别不同的表位。间接免疫荧光试验结果显示4株MAb均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。这些MAb的制备为SVCV免疫学检测方法的建立奠定了基础。; 张朋刘荭陈孝煊吴志新余剑敏杜娟兰文升史秀杰郑晓聪何俊强贾鹏申斯思朱家增; 关键词：鲤春病毒血症病毒单克隆抗体 N蛋白

鲤春血症病毒中国分离株糖蛋白基因和氨基酸序列的初步解析被引量：14: 2005年; 2002～2004年间从国内养殖鲤科鱼类和观赏鱼类中分离出8株鲤春血症病毒(SVCV)。根据SVCV参考株全序列,设计引物,用逆转录聚合酶链式反应扩增出8株SVCV糖蛋白编码基因片段,并对扩增产物进行了克隆和序列测定。用生物信息学方法对测得的序列进行分析,结果8个国内分离株的糖蛋白基因序列与参考株的基因序列相似性均在92％以上,8个国内分离株之间基因序列相似性均在97．7％以上;8个国内分离株之间糖蛋白推导出的氨基酸序列相似性均在94．5％以上,与参考株氨基酸序列相似性在92．9％-94．9％之间。系统发育树分析结果表明,SVCV国内分离株与USA株、980451株、980528株和970469株的进化方向一致,与其它SVCV毒株在进化方向上不同。8个毒株有19个共同的酶切位点,推导出的氨基酸序列中有10个亲水区、10个可能的抗原位点和10个跨膜蛋白区域,其峰值基本一致。对SVCV国内分离株的糖蛋白6个功能位点(天冬酰胺糖基化位点、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸磷酸化位点和肉豆蔻酰基化位点)进行了初步分析。; 刘荭付峰黄倢何俊强史秀杰高隆英杨锦舜江育林; 关键词：糖蛋白

患病北极红点鲑的病原分离与鉴定被引量：16: 2007年; 对2004年5月四川省某养殖基地养殖的北极红点鲑患病鲑进行了病理学检查和病原分离,从病灶处分离到细菌和真菌。分离到的细菌经API生化鉴定为杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(Aeromonas salmonicidasubsp.salmonicida)。用引物AP1和AP2对纯化后的细菌进行PCR扩增,结果扩增出长度为421 bp的DNA片段,对扩增片段进行克隆、测序,用NCBI-BLASTn在GenBank中搜寻相似序列,结果与杀鲑气单胞菌各株A层蛋白部分编码基因有99%以上的序列同源性。用引物EUS-F和EUS-R对分离到的真菌进行PCR扩增,结果扩增出长度为755 bp的DNA片段,对扩增片段进行克隆、测序,用NCBI-BLASTn在GenBank中搜寻相似序列,结果与水霉属各株的DNA片段(包括18S核糖体RNA基因部分序列、内转录间隔区1全序列、5.8S核糖体RNA基因全序列、内转录间隔区2全序列和28S核糖体RNA部分序列)有93%-100%的同源性;而与属于丝囊霉菌属的EUS各株相对应的DNA片段仅有60%的序列同源性。因此判定所分离的真菌为水霉。杀鲑气单胞菌是引起疖疮病和溃疡病等病的病原菌,而水霉广泛存在于水中,当鱼受伤后,水霉孢子容易从患病部位侵入鱼体,加重感染。因此判断该病主要是由杀鲑气单胞菌引起,而水霉则引起继发感染。; 史秀杰刘荭高隆英何俊强江育林; 关键词：杀鲑气单胞菌水霉

一种同时检测水生动物五种DNA病毒的多重荧光PCR试剂盒: 本发明涉及一种同时检测水生动物五种 DNA 病毒的多重荧光 PCR 试剂盒，包括缓冲液，还包括 5 对荧光 PCR 引物和 5 条分子信标探针和 PCR 引物，所述 5 对荧光 PCR 引物和 5 条分子信标探针分别对应...; 兰文升刘荭王津津史秀杰郑晓聪贾鹏于力何俊强黄佳鸣; 文献传递

鲤疱疹病毒2型微滴式数字PCR检测方法的建立及比较分析被引量：10: 2017年; 本研究建立了定量检测鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果表明,与qPCR相比,ddPCR具有相同的特异性,其灵敏性比qPCR低20倍。在定量CyHV-2 DNA时,ddPCR(R^2=0.994)和qPCR(R^2=0.994)均表现出良好的线性关系,且2种检测方法间的定量值呈正相关(R^2=0.989)。在定量检测相同稀释度的CyHV-2 DNA时,qPCR的定量值始终比ddPCR高10倍。ddPCR的组内和组间重复变异系数(CV)分别为0.59%–11.26%和6.55%–23.21%,而qPCR为16.57%–27.56%和22.31%–56.73%,说明ddPCR具有更好的稳定性。在临床样品定量检测时,ddPCR的检出率稍高于qPCR。本研究建立的ddPCR能够准确定量检测CyHV-2,将为CyHV-2相关研究提供有益参考。; 赵欣贾鹏刘莹王津津史秀杰潘广郑晓聪于力何俊强刘荭吴志新; 关键词：实时荧光定量PCR

SVCV糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其单链抗体库的筛选与鉴定: 本研究利用杆状病毒表达系统表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白,利用噬菌体抗体展示技术筛选抗SVCV单链抗体(scFv).将SVCV糖蛋白基因(G)插入到供体质粒pFastBacHTA中,再用构建的质粒pFastBac...; 刘红贾鹏何俊强袁丽刘荭吴志新陈孝煊郑晓聪张凤于力戴和平史秀杰兰文升花群义王津津; 关键词：鲤春病毒血症病毒糖蛋白杆状病毒表达噬菌体展示单链抗体

鲑鱼肾杆菌实时荧光RT-PCR检测方法和试剂盒: 本发明建立了检测鲑鱼肾杆菌的Taq Man实时荧光定量PCR，优化反应条件，经特异性、敏感性及临床应用试验，表明该方法特异性强，敏感度高，适于鲑鱼肾杆菌的快速诊断和口岸检疫，也为鲑科鱼类的疫病调查、鲑鱼肾杆菌的流行病学研...; 何俊强刘宗晓史秀杰刘荭兰文升高隆英

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