周明乾
- 作品数：36 被引量：99H指数：6
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 人血小板生成素基因cDNA和基因组DNA的克隆和序列测定被引量：2
- 2001年
- 目的研究内含子和5＇非翻译区对血小板生成素(TPO)基因表达的影响.方法以中国人胎肝mRNA为模板,应用RT-PCR和长距离PCR(LD-PCR)技术扩增了约1.1kb的全长人TPO cDNA.6.2 kb的TPO基因组DNA和TPO基因组中的内含子I,内含子Ⅱ～Ⅳ和内含子Ⅴ.结果全序列分析表明,全部的编码序列、所有的内含子/外显子剪切部位序列同已知一致,个别差异发生在内含子中.结论通过PCR扩增技术,成功地从中国人胎肝组织中克隆了全长人TPO cDNA、TPO基因组DNA及其全部的内含子.
- 宁云山周宏伟周明乾陈泽洪方向东富宁王小宁
- 关键词：血小板生成素基因组DNA内含子克隆
- Wnt基因的类别及功能被引量：5
- 2007年
- Wnt是一类癌基因,在动物发育过程中具有广泛的作用。该文介绍哺乳动物基因组中19个Wnt基因的功能。
- 向阳高基民胡志明周明乾
- 关键词：癌基因
- 大鼠WAP启动子指导人TPO在真核细胞中瞬时表达
- 2014年
- 目的构建以大鼠WAP启动子调控的人血小板生成素(TPO)真核表达质粒并进行瞬时表达,探讨TPO基因组中不同内含子对TPO表达影响。方法通过基因工程方法构建以大鼠WAP启动子调控的6种TPO真核表达质粒,并通过酶切和测序进行鉴定,将上述重组质粒分别在HC-11和COS-1细胞上转染48 h后,通过双抗体夹心ELISA定量分析转染上清中TPO表达。结果酶切及测序分析表明构建与设计相符,6种重组质粒在COS-1细胞和HC-11细胞中均获得表达,其表达水平从高到低依次为pTPOWE>pTPOWA>pTPOWD>pTPOWB>pTPOWC>pTPOWF,其中含有TPO IntronⅤ的重组质粒pTPOWE表达量最高,而含有TPO全基因组的重组质粒pTPOWF表达量最低。结论 IntronⅤ可能含有特殊增强TPO表达序列,而TPO基因组中可能存在抑制TPO高水平表达结构元件。
- 李妍陈艳周明乾周宏伟宁云山
- 关键词：血小板生成素内含子基因表达
- 生殖域中特异表达的新基因Rcet2的克隆
- 2008年
- 利用NCBI中的数字差异显示数据库首先电子克隆了Rcet2基因,然后从成年小鼠睾丸组织中克隆出Rcet2全长基因,序列分析显示:Rcet2基因全长cDNA为454 bp,含3个外显子,编码88个氨基酸残基,该蛋白含1个不完整的半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域,但缺少半胱氨酸蛋白酶抑制剂关键的作用位点,而这些位点对半胱氨酸蛋白水解酶的抑制作用是重要的.小鼠多组织RT-PCR结果显示,Rcet2在成年老鼠大脑、睾丸和附睾生殖域中特异表达,睾丸中的表达高于附睾和大脑,Rcet2与半胱氨酸蛋白酶抑制家族2的Cres亚家族具有相似的特征,结果显示Rcet2可能是Cres亚家族中的一个新成员.
- 向阳邹寿长周延凯周明乾聂东宋
- 关键词：克隆半胱氨酸蛋白酶抑制剂
- 抗HLA-A~*0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定被引量：1
- 2003年
- 目的制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(Yolk immunoglobulin,IgY)抗体。方法用纯化HLA-A*0201重链抗原加完全福氏佐剂免疫岭南黄鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定。结果获得ELISA效价为1×106的抗重链IgY抗体,蛋白含量为9.77 mg/ml。经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达90%以上。结论用重链抗原加福氏佐剂免疫种鸡制备的IgY抗体产量多、效价高,为结合HLA-A*0201复合体诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞活化奠定了基础。
- 孟晓静孟民杰林来兴妹周明乾王小宁
- 关键词：IGY
- IL-2体外诱导健康人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的研究被引量：3
- 2007年
- 目的研究IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的影响。方法分离健康志愿者外周血T细胞,加入IL-2,常规体外培养,乳酸脱氢酶释放法检测其非特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术,分析其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果3例健康志愿者外周血T细胞对鼻咽癌细胞系CNE2没有杀伤作用;PBMC的TCRVβCDR3谱型均呈高斯分布,经IL-2体外培养后部分家族出现不同的优势表达。结论IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移有一定影响,对其非特异性杀伤无影响。
- 常红罗薇马骊周明乾温茜吴远彬黄宇贤郭坤元
- 关键词：IL-2T细胞受体互补决定区3
- GFP-SA融合蛋白的表达纯化及其锚定修饰肿瘤细胞的研究被引量：1
- 2008年
- GFP(绿色荧光蛋白)-SA(链亲和素)双功能融合蛋白的制备及其鉴定研究,以展示所建立的技术平台,即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞表面进行高效的锚定修饰。构建原核表达载体pET24d/GFP-SA转化大肠杆菌BL21(DE3)。用IPTG诱导重组蛋白的表达,用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化。用制备的GFP-SA双功能融合蛋白,对B16肿瘤细胞已生物素化的细胞表面进行修饰,经荧光显微镜和流式细胞仪进行修饰效率分析。此外,用MTT法检测细胞表面修饰对肿瘤细胞活力及其生长情况的影响。GFP-SA重组融合蛋白在大肠杆菌实现了高效表达(约占细菌总蛋白的20%),通过纯化和复性制备的GFP-SA双功能融合蛋白具有双重活性,即:链亲和素介导的、对生物素高效特异的结合活性,和GFP发射绿色荧光的活性,并能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞。此外,GFP-SA双功能融合蛋白的细胞表面修饰对细胞的活力及其生长无显著影响。GFP-SA融合蛋白能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞,可用作肿瘤疫苗研究的示踪蛋白及实验对照体系。
- 周明乾林来兴妹胡志明苏华徐翠香高基民
- 关键词：绿色荧光蛋白链亲和素融合蛋白肿瘤细胞
- 抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体的生物学活性研究被引量：5
- 2005年
- 背景与目的目前,常规疗法已难以提高卵巢癌患者的生存率,已有实验数据及临床前试验结果表明,双特异性抗体能有效介导效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究旨在通过检测抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-I)的生物学活性,为其临床前试验及应用提供实验依据。方法观察BHL-I介导的外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)与靶细胞SKOV3结合、MTT法检测外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)增殖及PBL对靶细胞SKOV3杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBL分泌hIFN-γ、hTNF-α变化。结果BHL-I介导的花环形成率(15.7%)显著高于对照组(11.1%)(P<0.01);在抗原存在下,BHL-I显著促进PBMC增殖和PBL对靶细胞的杀伤(P<0.01),且杀伤率与花环形成率呈正相关(r=0.946);杀伤过程中上清液中hIFN-γ、hTNF-α显著增高(P<0.01)。结论BHL-I能介导PBL和SKOV3结合并活化PBL特异杀伤效应,杀伤可能与其hIFN-γ、hTNF-α表达增高有关。
- 杨介钻张众马骊姚新生周明乾王祥斌王小宁
- 关键词：卵巢癌细胞株
- 预刺激淋巴细胞的伸瘤运动
- 2005年
- 目的对淋巴细胞的伸瘤现象进行描述,并探讨伸瘤的一些影响因素及伸瘤运动与淋巴细胞功能的关系。方法分离外周血淋巴细胞,用PHA、IL-2、a-CD3、PHA+IL-2预刺激后与口腔上皮癌细胞混合作用。于倒置显微镜下直接观察淋巴细胞的粘(伸)瘤情况;取混合细胞经冷丙酮固定并Gimasa染色后在镜下观察淋巴细胞与瘤细胞作用情况,并于1、2、4、6h,取混合淋巴细胞于扫描电镜下观察伸瘤运动的发生、发展变化。结果与未预刺激组比较,PHA组能提高粘瘤指数,IL-2、a-CD3、PHA+IL-2均能提高淋巴细胞的粘(伸)瘤指数,以PHA+IL-2对粘(伸)瘤率的提高作用最为显著,电镜下发现在粘(伸)瘤运动过程中,外周血淋巴细胞的形态也发生变化。结论淋巴细胞预刺激能促进伸瘤运动的发生,伸瘤运动可能是淋巴细胞的一种杀伤方式。
- 杨介钻马骊何小维周明乾胡志明王小宁
- 关键词：淋巴细胞预刺激扫描电镜
- 链亲和素－白细胞介素2融合蛋白
- 本发明提供一种融合蛋白，该蛋白由接头肽连接一链亲和素和一白细胞介素－2构成，其中所述的接头肽的氨基酸序列为SerSerGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySer。本发明融合蛋白同时具有...
- 高基民胡志明周明乾林来新妹
- 文献传递
