张月
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：天津市泌尿外科研究所更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠血管内皮细胞表达人DAF和CD59对其心脏在人血清灌注下做功的影响
- 2007年
- 目的探讨联合转入衰变加速因子(DAF)和CD59基因对小鼠心脏在人血清灌注下做功及组织结构的影响。方法采用受精卵显微注射技术,将人DAF和CD59基因注入昆明小鼠受精卵的原核中,选取注射后仍健康的受精卵植入假孕母鼠的输卵管中待分娩。提取足月产小鼠(G_0代)基因组DNA,以聚合酶链反应(PCR)及Southern印迹杂交确定外源基因整合情况,应用流式细胞术检测人DAF和CD59在转基因小鼠白细胞上的表达,免疫组织化学染色检测人DAF和CD59在转基因小鼠心脏、肝脏及肾脏组织中的表达。取出转基因成功小鼠的心脏,在体外以人血清进行灌注,测定其做功能力,HE染色及免疫组化染色观察灌注后心脏的组织学变化以及补体C3c的沉积情况。以单一转DAF基因的小鼠为对照。结果共获得G_0代小鼠135只,经PCR及Southern印迹杂交分析,11只(8.1%,11/135)整合有人DAF和CD59外源基因,其中6只的白细胞膜表面人DAF和CD59表达阳性,强度分别为(86±6)%和(85±8)%,单转人DA F基因者(87±7)%,差异无统计学意义。人DAF及CD59仅表达于转基因小鼠心脏、肝脏及肾脏组织中的血管内皮细胞上。在人血清灌注后60min内,普通小鼠的心脏做功急剧下降,接近40min时心脏停止搏动;转DAF基因小鼠的心脏做功也下降,但仍维持在最大值的20%以上;转DAF和CD59双基因小鼠的心脏做功维持在最大值的40%以上。在人血清灌注的10～60min,转基因小鼠心脏做功能力明显强于普通小鼠心脏(P<0.05);灌注20～60min时,转双基因小鼠的心脏做功能力明显强于转DAF基因小鼠心脏(P<0.05)。普通小鼠心脏在人血清灌注后组织裂解较多见,肿胀严重,而转基因小鼠心脏组织的病理改变明显轻于普通小鼠,转双基因者的病理变化又明显轻于单一转DAF者,心肌血管中人C3c的沉积也明显少于单一转DAF者。结论血管内皮细胞特异性表达人DAF和CD59,可明显阻抑其心脏在�
- 张志宏马腾骧王广有李胜芝张月刘思金劳为德李光三
- 关键词：小鼠做功
- RNA干扰抑制膀胱肿瘤细胞BIU-87核干细胞因子基因表达对其增殖的影响被引量：10
- 2006年
- 目的探讨体外培养膀胱肿瘤细胞BIU-87核干细胞因子(NS)表达在肿瘤发生和肿瘤细胞自身维护中的作用,以及RNAi技术应用于肿瘤治疗的可行性。方法通过RT-PCR和North-ernblot方法检测体外培养的BIU-87细胞中NS的表达情况。采用分子克隆手段构建NS基因特异性siRNA表达载体,细胞转染获得稳定整合有pcDNA4/C-NS-Silencer载体和pcDNA4/C载体的细胞克隆,Northernblot方法检测阳性克隆NS基因表达丰度的变化,并观察其体外增殖能力的变化。结果RT-PCR和Northern印迹杂交结果均显示所检测的BIU-87细胞有较高水平的NS表达,NS在正常人膀胱组织中无表达。Northernblot检测证明获得稳定整合有pcDNA4/C-NS-Silencer载体的细胞克隆NS的表达丰度明显下调,且其体外增殖速率明显降低(P<0.05)。结论NS表达在BIU-87细胞体外增殖过程中发挥重要作用,通过RNAi技术实现NS基因沉默可能是一种较有前景的肿瘤治疗方法。
- 张志宏刘思金吴长利劳为德王广有李胜芝张月马志方赵振理刘秉乾马小兵
- 关键词：核干细胞因子增殖RNA干扰BIU-87细胞
- 血管内皮细胞组织特异性表达人CD55/CD59联合转基因小鼠抗超急性排斥反应能力的研究
- 目的:建立血管内皮细胞组织特异性表达人CD55／CD59联合转基因小鼠并观察其抗超急性排斥反应能力。方法:采用受精卵显微注射技术,将两种外源基因(一种含有人ICAM-2启动子、人CD55 cDNA、人CD55 cDNA、...
- 张志宏李胜芝吴长利张月王广有马腾骧
- 文献传递
- 异种移植血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立用于异种移植研究血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠。方法采用受精卵显微注射技术,将含有人ICAM-2启动子、人CD59基因第1个内含子、人CD59 cDNA、BGH polyA终止信号的外源基因导入小鼠受精卵的原核中,选取注射后仍健康的受精卵移植入假孕母鼠的输卵管中待分娩。聚合酶链反应(PCR)及Southern blot确定外源基因整合阳性转基因小鼠。流式细胞术用于外源基因蛋白质水平表达检测。免疫组织化学方法观察人CD59在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏等器官表达分布情况。结果产仔130只,9只外源基因整合阳性,整合率6％(9／130)。6只获得蛋白质水平表达,蛋白质水平表达强度为人CD59在人白细胞表达强度的80％至95％,转基因效率5％(6／130)。免疫组织化学检测显示人CD59在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏组织有较强表达,且表达限于血管内皮细胞。结论成功地建立了用于异种移植研究血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠。
- 张志宏马腾骧王广有张月李胜芝李光三刘思金劳为德
- 关键词：异种移植排斥反应补体调节蛋白CD59转基因小鼠
- 血管内皮细胞组织特异性表达人CD59基因转基因小鼠传代及表达检测被引量：1
- 2004年
- 目的 :探讨外源基因在转基因动物中的遗传规律。方法 :将血管内皮细胞组织特异性表达人CD59基因转基因昆明种雄性小鼠 ,与普通昆明种雌性小鼠交配。Southern -blot杂交确定子一代外源基因整合阳性转基因小鼠。RT -PCR方法用于子一代转基因小鼠人CD59转录水平筛选。以流式细胞术检测人CD59基因在子一代转基因小鼠蛋白质水平表达。结果 :产子14只。7只外源基因整合阳性 ,其中雄性4只 ,雌性3只。转录水平检测发现3只出现所需的条带。继而对上述3只转录水平阳性的F1代小鼠白细胞行流式细胞术检测 ,白细胞膜表面人CD59表达均阳性。结论 :转基因动物的遗传规律复杂 。
- 张志宏马腾骧王广有李胜芝张月李光三刘思金劳为德
- 关键词：转基因动物
- 建立血管内皮细胞组织特异性表达人衰变加速因子的转基因小鼠被引量：3
- 2005年
- 目的为了研究异种移植,建立血管内皮细胞组织特异性表达人衰变加速因子(DAF)的转基因小鼠。方法采用受精卵显微注射技术,将含有人内皮细胞粘附分子-2(ICAM-2)基因启动子、人DAFcDNA(插有人DAF基因第一个内含子)、SV40splice/polyA的外源基因导入小鼠受精卵的原核中;选取注射后仍健康的受精卵移植入假孕母鼠的输卵管中待分娩。聚合酶链(PCR)技术及Southern印迹杂交法确定外源基因整合阳性转基因小鼠。RT-PCR方法和流式细胞术分别用于外源基因mRNA及蛋白质水平表达的检测。免疫组织化学方法观察人DAF在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏等器官的表达分布。采用Langendorff心脏灌流装置,用200g/L的稀释人血清灌注转基因小鼠离体心脏,检测其抗超急性排斥反应能力。结果共产仔鼠133只,21只整合有外源基因,整合率16%(21/133)。8只实现mRNA及蛋白质水平表达,蛋白质水平表达强度为人DAF基因在人白细胞表达强度的70%至95%,转基因效率6%(8/133)。免疫组织化学法显示人DAF在转基因小鼠器官组织切片上有较强表达,且表达限于血管内皮细胞。与普通鼠对比,转基因小鼠离体心脏存活时间明显延长,且60min灌注期间内做功仍维持在最大值20%以上。结论成功地建立了血管内皮细胞组织特异性表达人DAF的转基因小鼠。这种小鼠有一定的抗超急性排斥反应能力。
- 张志宏马腾骧王广有张月李胜芝李光三刘思金劳为德
- 关键词：组织特异性表达血管内皮细胞转基因小鼠LANGENDORFF内皮细胞粘附分子基因MRNA
