徐佳
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划黑龙江省科技计划项目国家科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定被引量：3
- 2010年
- 为鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗原表位,本研究将IBV tl/CH/LDT3/03株免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经克隆筛选,得到两株针对IBV核(N)蛋白的单克隆抗体(MAb)6H3和6F9,其染色体数目分别为90条和102条,MAb亚类鉴定分别属于IgG1和IgG2b,轻链均为κ链。对MAb6H3和6F9的抗原表位进行初步鉴定,将N基因分成8个片段克隆于pGEX-6p-1载体中,转化BL21(DE3)内诱导表达。经western blot分析,MAb6H3表位的初步定位在aa80～aa99,而MAb6F9表位的初步定位在aa64～aa82。而且MAb6F9还能特异性识别其他5株IBV的天然N蛋白,推测它们含有一个相同的B细胞表位。
- 徐佳邵昱昊韩宗玺李慧昕孔宪刚刘胜旺
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单克隆抗体
- 抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单链抗体的构建及初步鉴定被引量：2
- 2009年
- 为了构建鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核蛋白(N)单链抗体(scFv),本研究通过提取杂交瘤细胞株6H3的总mRNA,采用RT-PCR法扩增出抗IBVN蛋白抗体的重链和轻链可变区基因,利用重叠延伸PCR将其重链和轻链通过一条寡核苷酸链连接起来扩增了单链抗体基因,并将其克隆于原核表达载体pET-30a,构建重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达。对表达产物进行纯化复性后,用夹心ELISA和westernblot检测表明scFv可与传染性支气管炎病毒核蛋白发生特异性结合。
- 徐佳韩宗玺杨光邵昱昊李慧昕孔宪刚刘胜旺
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单链抗体原核表达
- 无特定病原体HBK-B和HBK-Q种鸭的遗传多样性分析被引量：6
- 2008年
- 利用18个微卫星标记对国家实验禽类种子中心保存的HBK-B和HBK-Q两个封闭鸭群进行遗传分析。试验结果表明:两个群体中各有7个位点的多态信息含量(PIC)大于0.5,18个微卫星标记的平均PIC分别为0.474和0.480,呈中度多态;校正后的等位基因丰富度分别为3.56和3.54,表明这两个群体的遗传多样性基本相同。等位基因频率差异的卡方检验和两个群体间的遗传分化系数FST值显著水平的检验均证明这两个群体间的遗传分化已经达到了极显著水平(P<0.01),趋于形成两个不同的品系,但在今后的选育过程中应该对已经存在的近交加以控制。
- 肖兵兵韩凌霞于海波司昌德徐佳曲连东韩建林
- 关键词：无特定病原体微卫星多态性
- EIAV基因转移载体的优化
- 2008年
- 本研究在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体pcPPTPRE(+)的基础上[含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)和人乙型肝炎病毒转录后调控元件(HPRE)],对其转录后调控元件和外源基因启动子进行优化。参考土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)基因组序列和人巨细胞病毒增强子/鸡β-actin启动子序列(CAGp),设计合成2对引物,分别扩增WHV转录后调控元件(WPRE)和CAGp片段,正向插入pcPPTPRE(+)获得重组质粒pcPPTWPRE和pcPPTWCAG。将获得的EIAV转移载体pcPPTWPRE和pcPPTWCAG以及pcPPTPRE(+),脂质体法分别转染人胚肾细胞HEK293和鸡胚成纤维细胞系DF-1,转染后12 h、24 h、36 h、48 h在荧光显微镜下观察特异性绿色荧光的表达。48 h后收获细胞,利用流式细胞仪检测转染细胞中表达EGFP的阳性细胞。结果表明,在HEK293细胞中pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均极显著高于pcPPTPRE(+)(P<0.01),pcPPTWCAG显著高于pcPPTWPRE(P<0.05);pcPPTWCAG的平均道数值极显著高于pcPPTPRE(+)和pcPPTWPRE,pcPPTWPRE显著高于pcPPTPRE(+)。在DF-1细胞中pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均显著高于pcPPTPRE(+),而pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的平均道数值均极显著高于pcPPTPRE(+),pcPPTWCAG显著高于pcPPTWPRE。本研究利用WPRE和CAGp优化构建了EIAV基因转移载体pcPPTWCAG,获得了较强的基因表达能力,为以鸡为宿主进行转基因研究提供了条件。
- 尹岚岚韩凌霞李亚明司昌德于海波徐佳曲连东冉多良
- 关键词：马传染性贫血病毒基因转移载体绿色荧光蛋白
- SARS-Co V S基因重组质粒的构建与瞬时表达
- 2005年
- 根据GenBank中登录的SARS-COV(BJ01株)基因序列设计引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从SARS病毒中扩增得到约3 768 bp的片段,将其克隆到真核表达质粒pVAX1,鉴定正确后,命名为pVAX1/S。体外转染Hela细胞,间接免疫荧光鉴定S蛋白的表达。构建的重组质粒经酶切及测序鉴定,开放阅读框正确;间接免疫荧光方法鉴定该重组质粒能在Hela细胞中表达。
- 王陆宝冉多良王红霞孟庆文徐佳吴东来
- 关键词：传染性非典型肺炎S基因
- EIAV基因转移载体转录后调控元件的优化
- 2008年
- 【目的】为了提高马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体质粒pcPPTPRE(+)的外源蛋白表达能力,对其转录后调控元件进行优化。【方法】将PCR扩增土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck Hepatitis Virus,WHV)转录后调控元件(WPRE),克隆于pGM-T载体获得重组质粒pGM-WPRE,利用NotⅠ酶将WPRE亚克隆入pcPPTPRE(+),筛选WPRE正向连接的重组质粒pcPPTWPRE,采用磷酸钙法分别将pcPPTWPRE和pcPPTPRE(+)转染HEK293细胞和DF-1细胞,利用荧光显微镜观察EGFP蛋白的表达,利用流式细胞仪检测转染细胞中EGFP阳性细胞的表达率。【结果】在HEK293细胞中,pcPPTWPRE表达外源基因的能力极显著优于pcPPTPRE(+);在DF-1细胞中,pcPPTWPRE与pcPPTPRE(+)表达外源基因的能力均不强,但前者略优于后者。【结论】土拨鼠肝炎病毒转录后,调控元件(WPRE)可以明显增强EIAV载体质粒的外源蛋白表达能力,为高表达能力伪型EIAV重组病毒的获得奠定了基础,同时也为其他病毒载体的构建提供了借鉴。
- 李亚明韩凌霞曲连东司昌德秦海斌杨增岐于海波徐佳
- 关键词：马传染性贫血病毒土拨鼠肝炎病毒基因转移载体
