曲连东
- 作品数：277 被引量：698H指数：13
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生哲学宗教更多>>
- Ⅰ型犬腺病毒弱毒疫苗株及其应用
- 本发明公开了I型犬腺病毒弱毒疫苗株及其应用。本发明将所分离的I型犬腺病毒强毒株在MDCK上传代、克隆，培育了致弱毒株(CAV-HR)，安全性和免疫原性试验结果表明，本发明的弱毒株CAV-HR株对同源强毒攻击的犬可以提供很...
- 刘大飞张洪英曲连东王牟平刘立奎
- 文献传递
- SPF鸡.微生物学监测.第7部分:SPF鸡.胚敏感试验
- GB/T 17999的本部分规定了胚敏感试验的技术要求。本部分适用于对SPF鸡进行禽脑脊髓炎病原抗体的检测。
- 曲连东刘家森韩凌霞邵卫星朱果单忠芳姜骞司昌德于海波孟庆文
- 关键词：畜牧业家禽生物学微生物学
- 文献传递
- 鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因vp1的原核表达及其抗原性分析被引量：4
- 2008年
- 通过RT-PCR方法克隆出DHV-1:161/79/V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-VP1,转入E.coli Rosetta-gami(DE3) pLysS,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明在大肠杆菌中表达了1个相对分子量约为47ku的融合蛋白(Trx-His-VP1),将此融合蛋白用His-Ni+亲和层析法进行纯化。Western blot分析表明,Trx-His-VP1能与DHV-1阳性血清发生特异性反应,说明表达的结构蛋白VP1具有良好的抗原性。
- 甘一迪刘家森姜骞孟庆文韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：VP1基因原核表达
- SPF禽饲育室净化空调运行维护过程中的几点体会
- 2010年
- 净化空调是SPF级禽饲育室中的核心设备,它的作用主要是排出污染空气及有味气体,送入净化空气,保持各房间的压力梯度,保证动物的舒适及工作人员的健康,它是维持设施运行的重要因素,也是SPF级禽饲育室设备设施运行维护的重中之重。
- 张伟李艳华李昌文于海波韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：净化空调防冻节能
- 仙台病毒P基因的原核表达及抗原性分析
- 2009年
- 根据GenBank公布的仙台病毒(SeV)磷蛋白(P)基因序列,设计合成一对特异性引物,PCR扩增P基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中;重组质粒经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞BL21(DE3)PlysS,经IPTG诱导表达,获得相对分子量为99.6ku的融合蛋白。经western blot及ELISA分析表明表达的融合蛋白具有良好的抗原性。
- 蒋良丰刘家森司昌德郭东春姜骞曲连东
- 关键词：仙台病毒P基因原核表达
- EIAV基因转移载体包装盒表达质粒的构建
- 2009年
- 在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体成功构建并优化的基础上,构建了EIAV基因转移载体包装盒表达重组质粒。分别根据EIAV驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株感染性分子克隆(pLGFD3-8)和驴白细胞弱毒疫苗株感染性分子克隆pOK8266T序列,设计并合成引物,扩增EIAVgag/pol全基因和rev基因的第2个外显子,分别插入真核表达载体pCDNA3.1(+),获得表达载体pCDFGP和pCDREV,与亲本株的核苷酸同源性分别是99.6%和99.8%,编码蛋白Gag、Pol及Rev蛋白的推测氨基酸同源性分别为99.2%、98.3%和100%。利用脂质体法,分别将pCDFGP和pCDREV单独及共转染HEK293细胞,利用EIAV阳性血清分别进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(westernblot),检测外源蛋白的表达情况。结果表明,双质粒共转染的细胞中转染后48h可检测到特异性荧光,转染后60h的细胞裂解产物中可以检测到55ku的Gag蛋白及26ku的p26蛋白,而单独转染pCDFGP和pCDREV的细胞,IFA和western blot试验结果均为阴性。结果表明同时存在gag/pol和rev基因第4外显子的情况下,EIAV包装盒才能表达。
- 韩凌霞尹岚岚李亚明牛成明高鹏飞曲连东
- 关键词：马传染性贫血病毒
- 猫疱疹病毒Ⅰ型RAA检测方法的建立与应用被引量：3
- 2023年
- 为建立一种快速检测猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的方法,本研究根据GenBank上登录的FHV-1 UL55序列设计特异性探针及引物,筛选最佳引物对,建立了FHV-1的重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。该方法在39℃反应20 min即可快速、特异性地检测FHV-1。灵敏性试验结果显示,RAA最低检测限为7.60×101copies/μL,比普通PCR最低检测限高100倍。特异性试验结果显示,该RAA方法与猫杯状病毒、猫传染性腹膜炎病毒、猫细小病毒无交叉反应。对34份临床样本进行检测,其中13份为阳性,阳性检出率为38.23%。综上所述,本研究成功建立了猫疱疹病毒Ⅰ型RAA检测方法。
- 王颖戚睿斌崔赛赛杨育鹏冯可昕刘家森姜骞杨鸣发康洪涛曲连东
- SLA-1不同等位基因与病毒CTLs表位特异性结合的研究
- 高彩霞姜骞刘家森郭东春刘大飞刘春国李志杰仇铮田进曲连东
- 增强型猫ω干扰素的筛选及抗病毒活性分析被引量：1
- 2022年
- 为获得增强型猫ω干扰素(FeIFN-ω),本研究通过分子对接方法预测和参考相关位点研究,设计3组定点突变引物。以pJET-FeIFN-ω为模板分别扩增FeIFN-ω基因及其3个突变基因(FeIFN-ω-R35L、FeIFN-ω-A156R、FeIFN-ω-T188R),并连接慢病毒载体pLVX-IRSE,构建重组质粒pLVX-FeIFN-ω、pLVX-FeIFN-ω-R35L、pLVX-FeIFN-ω-A156R、p LVX-FeIFN-ω-T188R。4个重组质粒分别与包装质粒psPAX2和膜蛋白质粒pMD2.G共转染293T细胞包装慢病毒,48 h后收获细胞上清即为慢病毒。分别将4个慢病毒转导293悬浮细胞(293s),扩大培养后收获细胞上清,经镍离子亲和层析柱纯化蛋白,并经SDS-PAGE检测、BCA法测蛋白浓度。结果显示,rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R、rFeIFN-ω-T188R在293s细胞中得到高效表达,且蛋白纯化效果好;经BCA法测浓度,4种重组蛋白浓度均约为200μg/mL,即获得了重组干扰素rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R、rFeIFN-ω-T188R。4种重组干扰素分别经猫肾细胞(CRFK)孵育18 h后接种猫杯状病毒(FCV)或猫疱疹病毒(FHV)12 h,经相对荧光定量PCR法检测干扰素抗FCV和FHV活性;4种重组干扰素分别经CRFK细胞孵育12 h,经相对荧光定量PCR法检测干扰素刺激基因ISG15、Viperin、IFITM1的转录水平,结果显示:实验组与空白对照组差异极显著(P<0.01),实验组中rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R与rFeIFN-ω均差异不显著(P>0.05)或表现为活性降低,rFeIFN-ω-T188R与rFeIFN-ω、rFeIFN-ω-R35L、rFeIFN-ω-A156R差异均显著(P<0.05)表现为活性增强,并且r FeIFN-ω-T188R抗病毒活性及诱导ISGs的转录水平均比rFeIFN-ω高1倍左右。选择r FeIFN-ω和rFeIFN-ω-T188R分别与His纯化树脂结合,加入等量表达干扰素受体(IFNAR1/R2)的重组质粒转染293T细胞的裂解液,4℃结合过夜,经western blot鉴定干扰素与IFNAR1/R2结合亲和力分析,结果显示,rFeIFN-ω-T188R与IFNAR1的结合能力比r FeIFN-ω高1倍左右,且两者与IFNAR2的结合能力差异不�
- 李茵潘玉迪田进曲连东
- 关键词：真核表达生物活性
- 实验性慢性氟中毒家兔肝、肾动态超微病理学研究被引量：4
- 1994年
- ２４只２０～３０日龄体重０．７～１．２ｋｇ新西兰白兔随机分为实验组１５只（每日每只随饮水摄取ＮａＦ４５ｍｇ／ｋｇ体重）及健康对照组９只（饮用自来水）．两组在相同饲养管理条件下实验观察．分别在实验第３０，６０．９０ｄ时迫杀，对肝和肾进行超微病理学研究．结果表明，肝和肾实质细胞膜系统损伤明显，胶原原纤维再生增多，且有再生障碍及再生后的损伤性变化．
- 曲连东褚桂芳滕国麟张伟木杨贵军
- 关键词：慢性氟中毒病理学家兔
