郭东春
- 作品数：115 被引量：337H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 水禽呼肠孤和水禽细小病毒病诊断技术
- 张云刘明耿宏伟黄鹤张序温纳相郭东春刘益民王洪峰郭凤宇
- 成果名称：水禽呼肠孤和细小病毒病抗原学和血清学诊断技术。该项目属于国家“973”计划项目“动物重要病原体致病机制研究”中的“水禽呼肠孤病毒的分离、鉴定技术的前期探索研究”，合同编号为2005CB522905；国家重点实验...
- 关键词：
- 关键词：抗体检测
- 某种猪场猪疥螨感染情况调查及治疗试验被引量：10
- 2006年
- 采用显微镜直接检查法和虫体浓集法，对河南某种猪场的保育猪、育肥猪和种母猪疥螨感染情况进行了调查，结果其感染率分别为55．0％、67．2％和40．0％，平均感染率为58．82％。分别应用1％伊力佳、阿力佳注射剂按0．3mg／kg体重1次皮下注射，或预混剂按1．5kg／t料混饲连喂1周或2周、或按2kg／t料混饲连喂1周对疥螨病猪进行治疗，用药后15d，螨虫转阴率均达100％，平均病变记分减少率为84．83％（81．6％～88．4％），表明上述2种药物不同剂型和用法、用量对猪疥螨病均具有良好疗效。建议规模化猪场使用1％阿力佳预混剂，按1．5kg／t料，混饲连喂1～2周防治猪疥螨病。
- 宁长申臧为民张龙现菅复春张志敏刘红英郭东春康凯
- 关键词：疥螨伊力佳感染率
- 同时检测多杀性巴氏杆菌及其荚膜A型的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用被引量：7
- 2021年
- 为建立可以同时检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其荚膜A型的快速敏感检测方法,本研究在建立的Pm kmt1基因的荧光定量PCR基础上,设计了该菌capA基因特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。本实验从荚膜A型Pm C48-1菌株中扩增了capA基因,构建了重组质粒pMDcapA;以pMD-capA重组质粒为标准品,建立的标准曲线在9.83×10^(3)拷贝/μL~9.83×10^(9)拷贝/μL内与Ct值具有良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9873,扩增效率(E)为1.032。建立的双重荧光定量PCR方法可以同时检测Pm及其荚膜A型,而对B型、D型Pm、鸭疫里默氏杆菌、支气管败血波氏杆菌等细菌检测结果均为阴性,具有较强的特异性;对重组质粒标准品的检测灵敏度为10^(1)拷贝/μL,高于常规PCR检测方法(10^(3)拷贝/μL)100倍具有较高的敏感性;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有较好的重复性。本实验建立的双重荧光定量PCR方法可以同时快速敏感地检测Pm及其荚膜A型,对于其临床和实验室的快速诊断具有重要意义。
- 刘本金郑亚婷许腾林姜骞刘家森康洪涛田进郭东春曲连东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌TAQMAN探针荧光定量PCR
- SPF巴马小型猪的培育及应用被引量：3
- 2017年
- 利用我国自有资源巴马小型猪群,完成了疫病净化,建立了无特定病原体巴马小型猪实验猪群。制定了饲育标准、实验猪遗传学检测标准和微生物质量控制技术标准,制订了黑龙江省地方标准《无特定病原体猪微生物学监测技术规范》,对建立的猪群进行了遗传学和微生物质量控制。建立了猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染巴马小型猪感染模型。扩增了巴马小型猪重要细胞因子及固有免疫相关的重要分子,从分子水平进一步证明巴马小型猪可以代替家猪进行猪病感染实验。目前建立的猪群已广泛应用在猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒等猪重要疫病防控及致病机理的研究,实现了共享利用。本项目的完成解决了实验用猪瓶颈问题,提升了动物疫病研究水平,提供了新型实验动物,实现了优质种质资源共享利用,加速了生命科学研究和生物制品产业发展,推动了农业实验动物的行业进步。
- 姜骞韩凌霞司昌德林欢高彩霞郭东春张伟刘家森曲连东
- 关键词：巴马小型猪无特定病原体
- 杂交瘤细胞株McAb 1H2及兔出血症RHDVa型病毒单克隆抗体
- 杂交瘤细胞株McAb 1H2及兔出血症RHDVa型病毒单克隆抗体，它涉及一株杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体。它解决了目前没有能够单独识别RHDV2型病毒或RHDVa型病毒的单克隆抗体的问题。杂交瘤细胞株McAb 1H2...
- 刘家森曲连东姜骞郭东春刘大飞刘春国李志杰仇铮田进吴红霞刘明
- 鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白的表达及其免疫原性的分析被引量：1
- 2013年
- 为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中,构建重组表达质粒pHtb-RA1110,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE分析表明,诱导表达的目的蛋白的分子质量大约为56ku,与预期大小相符,以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,诱导的重组蛋白能特异性地识别鸭疫里氏杆菌阳性血清,具有良好的抗原性。用纯化的Riean1110蛋白免疫SPF鸭,经ELISA检测,可产生高水平的抗体。结果表明,制备的重组Riean1110蛋白为建立鸭疫里氏杆菌的血清学检测方法奠定了基础。
- 帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东
- 关键词：鸭疫里氏杆菌原核表达免疫原性
- 抗鸭多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 为制备抗鸭多杀性巴氏杆菌(P.multocida)外膜蛋白H(OmpH)单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的OmpH重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并以重组OmpH蛋白为抗原,通过间接ELISA方法筛选出3株能够稳定分泌抗OmpH的杂交瘤细胞株(1A9、1E9、3G7)。MAb亚类鉴定表明,1A9、1E9和3G7均为IgG1亚类,轻链均为κ链。经western blot和间接免疫荧光检测证明3株MAb均具有良好的特异性。这些抗OmpH MAb的获得,为鸭P.multocida病的快速、有效、敏感的诊断方法建立奠定了基础。
- 卢艳郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢崔玉东曲连东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌单克隆抗体
- 产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立被引量：10
- 2013年
- 为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓度0.4mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。
- 曲泽慧陈佩佩张爱芹郭东春林欢姜骞刘家森师东方曲连东
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌双重PCRK88菌毛
- 鸡γ-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究被引量：4
- 2017年
- 将克隆的鸡γ-干扰素(Ch IFNγ)基因亚克隆至酵母表达载体p PICZα-A中,构建重组质粒p PIC-Ch IFNγ。将鉴定正确的质粒p PIC-Ch IFNγ线性化,通过电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE检测,结果表明Ch IFNγ在酵母中获得了分泌型表达,表达产物分子量约为20 ku。表达产物粗提后以细胞病变抑制法检测其活性,效价为107.69U/m L;在鸡胚中能有效抑制H9N2亚型禽流感病毒的增殖;动物攻毒保护试验结果显示,表达的蛋白具有较好的抗病毒活性。
- 刘新文王秀丽郭东春邹敏郭伟伟宫晓李陆梅范根成
- 关键词：分泌表达抗病毒活性
- 鸭多杀性巴氏杆菌外膜蛋白A基因表达及抗原性鉴定被引量：5
- 2010年
- 根据已发表的Pm70株的序列(GenBank登录号:AE004439)设计了两对引物,用PCR方法扩增了鸭多杀性巴氏杆菌标准株C48-102的外膜蛋白基因A(ompA),扩增的片段为1062bp。将测序结果与GenBank中多杀性巴氏杆菌P52、PM70、T931317、T94289的ompA序列比对结果表明,核苷酸水平上同源性为89.0%～98.9%;在氨基酸水平上同源性为90.7%～99.2%。全ompA序列在大肠杆菌中干扰蛋白的正常表达,因此截断ompA蛋白的信号肽序列,将去信号肽的ompA基因插入到pPRO-EX-Htb载体上,构建了原核表达载体Htb-ompA,转化BL21,并诱导表达,SDS-PAGE结果表明,表达蛋白约为35kDa,与预期的分子量大小相符。Western-blot结果表明,表达的蛋白具有良好的抗原活性。本研究重组蛋白ompA的获得,为敲除ompA基因多杀性巴氏杆菌突变株的血清学检测奠定基础。
- 孙郭东春刘家森姜骞司昌德林欢韩凌霞崔玉东曲连东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌外膜蛋白A原核表达
