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徐艳红: 作品数：41 被引量：145H指数：9; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

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白木香AsMYC2蛋白的原核表达与纯化被引量：5: 2016年; MYC2转录因子属于bHLH转录因子家族中重要的一员,它是植物茉莉酸(JA)信号途径中的核心调控元件之一,但在白木香中研究甚少。本实验以白木香叶片中分离的总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得AsMYC2基因的编码区(CDS)全长,利用基因重组技术构建pGEX-4T-1-AsMYC2原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,将鉴定正确的克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃下0.1 mmol·L^(-1)异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导4 h,AsMYC2蛋白的表达量最高,且主要为可溶性蛋白。利用谷胱甘肽亲和介质进行融合蛋白的纯化,最后应用SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定融合蛋白。结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-AsMYC2原核表达载体,诱导了GST-AsMYC2(谷胱甘肽巯基转移酶-AsMYC2)融合蛋白的表达并进行了蛋白的纯化。高质量的GST-AsMYC2融合蛋白的获得,为多克隆抗体的制备提供材料基础,为筛选其互作蛋白因子和研究基因功能奠定基础。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对该基因进行组织表达特异性分析,结果显示AsMYC2基因在沉香形成的主要部位根和茎中的表达量最高,在叶中的表达量最低;该结果提示该基因可能与白木香中沉香的形成有关。; 廖永翠徐艳红张争魏建和; 关键词：白木香

白木香3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶(AsHMGS)基因的克隆与表达分析被引量：11: 2014年; 以白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)茎cDNA为模板,采用反转录PCR及RACE技术分离得到HMGS基因cDNA全长。序列分析表明该基因序列全长1 831 bp,共编码465个氨基酸,推导的蛋白质分子量为51.4 kD,理论等电点6.25,命名为AsHMGS。推导的AsHMGS蛋白质序列具有植物HMGS酶的典型结构,并预测出HMGS酶的活性中心。系统进化树分析表明,AsHMGS蛋白与拟南芥、琴叶拟南芥、芥菜的相应蛋白相似度最高,其次为人参、喜树和野茶树。荧光定量PCR结果显示,茉莉酸甲酯能诱导白木香AsHMGS的表达。; 刘娟徐艳红杨勇梁良高志晖杨云张争隋春魏建和; 关键词：白木香

白木香来源的Ⅲ型聚酮合酶AsPKS3及其编码基因和应用: 本发明公开了白木香来源的Ⅲ型聚酮合酶AsPKS3及其编码基因和应用。本发明基于白木香的基因组及转录组数据筛选了得到了新的聚酮合酶AsPKS3，其氨基酸序列为SEQ ID NO.6所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQ ID...; 魏建和高志晖肖梦君王彬彬孙佩文吕菲菲徐艳红刘洋洋陈德力杨云冯雅楠

人CD271基因的克隆及原核表达: 2008年; 目的克隆人CD271基因,并在大肠杆菌中表达。方法采用RT-PCR技术从人REH细胞系中扩增CD271基因,将其克隆入pET22b表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行纯化及Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET22b/CD271经双酶切鉴定,可见1197bp的目的基因条带。表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约75000处可见表达条带。IPTG浓度为0.5mmol/L时,目的蛋白表达量最高。纯化后蛋白纯度为82.5%。Western blot检测表明纯化后的蛋白具有良好的反应原性。结论已成功克隆了人CD271基因,并在大肠杆菌中获得表达。; 徐艳红石琳张涛冯春玲刘红芹屈浩黄丽华朱卫彬张宇光; 关键词：克隆原核表达

白木香愈伤组织与叶片DNA快速提取方法的确定被引量：1: 2014年; [目的]确定白木香愈伤组织与叶片DNA的快速提取方法。[方法]用TE、ES1、ES2 3种提取液及相应的方法提取叶片和愈伤组织总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测提取产物,通过普通PCR及荧光定量PCR检查DNA的可用性,并将PCR产物经克隆测序验证。[结果]ES1法提取的叶片和愈伤DNA条带清晰,纯度较高;普通PCR和荧光定量PCR可扩增出200和600 bp左右的目的条带。ES2法提取液电泳不能检测到DNA条带,但PCR可扩增出愈伤组织200 bp左右目的条带。TE法得到的提取液检测不到DNA条带且PCR不能得到目的条带。[结论]ES1提取液及相应的提取方法可用于白木香愈伤和叶片DNA高通量快速提取,为沉香属植物种质研究和分子研究奠定基础。; 高志晖赵文婷张争徐艳红金钺杨云魏建和; 关键词：SINENSIS DNA快速提取叶片愈伤

一种白木香萜类合酶: 本发明涉及一种白木香萜类合酶，并提供了一种经修饰的倍半萜合酶的基因，通过基因工程技术使常用宿主微生物高效表达：催化合成目标产物效率高的、可溶性好的倍半萜类化合物的合成酶，以此来促进倍半萜类化合物的生物酶催化合成技术的进步...; 徐艳红魏建和唐小琳余翠翠; 文献传递

濒危南药白木香悬浮细胞体系的建立被引量：3: 2014年; 以白木香（Aquilaria sinensis）茎尖为材料,利用诱导形成的愈伤组织构建悬浮细胞体系。结果表明,诱导愈伤组织最适培养基为MS＋2.0 mg·L^-1 NAA＋1.0 mg·L^-1 6-BA;经12次继代培养的愈伤组织生长旺盛、质地疏松适于悬浮培养;将其置于液体培养基MS＋2.0 mg·L^-1 NAA＋1.0 mg·L^-1 6-BA＋500.0 mg·L^-1 CH中震荡培养,建成悬浮细胞体系。悬浮细胞生长曲线呈S型,初期增长缓慢,4~6天为对数增长期,7~12天进入平台期,12天以后细胞生长速度及活力迅速下降;GC-MS结果显示,培养0、3、6、9、12天悬浮细胞不含沉香倍半萜,使用100μmol·L^-1 MeJA处理24 h可检测到倍半萜。本实验构建的白木香悬浮细胞体系均一稳定、细胞活力良好,可作为研究伤害诱导白木香形成倍半萜的离体体系,同时也具备离体生产沉香倍半萜的潜力。; 刘娟韩晓敏梁良刘庆昌徐艳红杨成民张争孙晶魏建和; 关键词：白木香愈伤组织悬浮细胞培养

22个白木香倍半萜合酶(AsTPS)基因的健康与伤害诱导表达特性研究被引量：2: 2017年; 目的:明确22个As TPS基因在健康和伤害白木香中的表达情况,筛选出催化沉香倍半萜合成的关键酶基因。方法:全断法伤害处理白木香,常规PCR和荧光定量PCR(qRT-PCR)检测基因表达情况。结果:22个As-TPS基因中,1个基因在健康和伤害白木香中均不表达;3个基因在健康白木香中不表达,但明显响应于外界伤害;18个基因在健康白木香中均有一定量表达,而伤害处理后,其中7个基因相对表达量达数千倍,11个基因虽也被诱导表达,但相对表达量仅达几十倍至几百倍。结论:21个As-TPS基因为伤害诱导型基因,其中3个是沉香倍半萜合成的关键催化酶基因;在伤害诱导后含量急剧表达上升的7个As-TPS是白木香伤害诱导结香早期倍半萜合成的重要催化酶。; 吕菲菲孙佩文刘培卫李俊徐艳红魏建和; 关键词：白木香基因表达

白木香AsMAPK3基因的克隆及表达分析被引量：1: 2017年; 目的:克隆白木香中分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)基因,检测其组织表达及诱导表达特性。方法:在454高通量测序获得部分c DNA序列基础上,利用RACE方法获得全长cDNA。采用NCBI在线Blastp、DNAman和MEGA4软件,对序列进行生物信息学分析。随后,通过荧光定量PCR检测目的基因的组织表达及诱导表达特性。结果:扩增到了白木香中分裂原活化蛋白激酶基因AsMAPK3,并对其进行了生物信息学分析和表达特性分析。结论:通过As MAPK3的克隆及分析,为后续验证其生物学功能奠定了基础。; 徐艳红田美慧孙佩文高志晖金钺魏建和; 关键词：白木香 MAPK基因

白木香3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因AsHMGR2的克隆及表达分析被引量：15: 2013年; 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)是萜类合成甲羟戊酸(MVA)途径中的第一个关键限速酶。本研究根据课题组白木香转录组数据库中的HMGR2部分转录本序列设计引物,利用RT-PCR和RACE技术克隆HMGR2基因的全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;利用荧光定量PCR检测AsHMGR2基因在不同组织和不同伤害处理下的表达差异。克隆得到的白木香AsHMGR2基因开放阅读框为1749bp,编码582个氨基酸,GenBank登录号为KC140287。组织表达分析的结果显示,AsHMGR2基因主要在根和茎尖中表达,其次是主干,叶中的表达量最低;该基因同时受物理伤害和结香液处理的诱导,分别在6h和8h达到最高表达水平。本研究通过AsHMGR2基因的全长cDNA克隆和表达特性分析,为后续深入研究其在沉香倍半萜合成途径的功能奠定了基础。; 徐艳红杨欣张争梁良魏建和; 关键词：白木香

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